無菌制劑無菌水平的影響因素

王佳鑫

摘? 要：無菌保證水平，即SAL，Sterility Assurance Level，又稱微生物存活概率。而對于無菌制劑來說，控制微生物污染是極其重要的。由于終端滅菌的制劑在生產(chǎn)過程中存在某種程度的微生物污染是不可避免的，為此對無菌保證進行數(shù)學性評估而提出了"無菌保證水平"。本文對無菌制劑無菌水平的影響因素進行綜述。

關(guān)鍵詞：無菌水平;影響;因素

無菌制劑是指法定藥品標準中列有無菌檢查項目的制劑，包括大小容量注射劑。無菌物品是指物品中不含任何活的微生物，實際上無法證明產(chǎn)品中沒有活的微生物存在，因為對于任何一批滅菌物品而言，絕對無菌既無法保證也無法用實驗來證實無菌保證水平，即SAL，Sterility Assurance Level，又稱微生物存活概率。而對于無菌制劑來說，控制微生物污染是極其重要的。由于終端滅菌的制劑在生產(chǎn)過程中存在某種程度的微生物污染是不可避免的，為此對無菌保證進行數(shù)學性評估而提出了“無菌保證水平”。本文對無菌制劑無菌水平的影響因素進行綜述。

1 無菌檢查法的局限性

有報道顯示，無菌檢查時應用的培養(yǎng)液只適用于臨床檢驗細菌與真菌，并非是多種真菌與細菌生長的最佳條件。無菌檢查在《中華人民共和國藥典》規(guī)定中屬于抽樣檢查，無法100%檢驗整批產(chǎn)品，具有顯著局限性。驗證無菌檢驗方法是保障無菌檢查結(jié)果可靠性及準確性，但產(chǎn)品絕對無菌這一結(jié)論則無法得出。

2 無菌制劑無菌水平的影響因素

無菌生產(chǎn)工藝就是必須在無菌控制條件下生產(chǎn)無菌制劑的方法，并定期對無菌生產(chǎn)工藝進行驗證，驗證內(nèi)容包括環(huán)境空氣過濾系統(tǒng)有效性、工藝用水系統(tǒng)、設(shè)備和人員清潔及培養(yǎng)液模擬灌裝實驗等。微生物的來源主要有以下3種。

2.1 人員

人是潔凈區(qū)環(huán)境的最大污染源，在無菌室由操作人員引起的污染將達到總污染原因的百分之九十五。人員幾乎涉及到所有的生產(chǎn)步驟，接觸和操作引起的污染仍是生產(chǎn)企業(yè)面臨的主要問題。

2.2 工藝用水

注射用水與注射劑在生產(chǎn)過程中污染可能性最高的發(fā)熱性物質(zhì)就是細菌內(nèi)毒素。細菌內(nèi)毒素由革蘭陰性菌產(chǎn)生，而水源性微生物絕大多數(shù)為革蘭陰性菌。細菌內(nèi)毒素為外源性致熱原，它可激活中性粒細胞等，會使人致病甚至死亡，對藥品質(zhì)量產(chǎn)生不良的影響。細菌內(nèi)毒素具有耐熱性，需用干熱滅菌（250℃，30min以上）才能去除。

2.3 環(huán)境

革蘭陽性菌、革蘭陰性菌是根據(jù)對細菌進行革蘭氏染色的結(jié)果來區(qū)分的，如果將細菌作革蘭氏染色，凡染后菌體呈紫色的，稱“革蘭氏陽性菌”，菌體呈伊紅色，稱“革蘭氏陰性菌”?？諝庵械奈⑸锘緸楦锾m陽性菌，人體攜帶的常見葡萄球菌和唾液鏈球菌，而沃氏葡萄球菌、藤黃微球菌和芽孢桿菌均為常見環(huán)境菌。產(chǎn)生芽孢的細菌都是革蘭陽性菌，芽孢對熱、干燥、輻射、化學、消毒劑等理化因素均有強大的抵抗力。文獻報道，對制藥企業(yè)生產(chǎn)環(huán)境中分離的92株葡萄球菌菌種鑒定，結(jié)果表明92株葡萄球菌均為凝固酶陰性菌，可分為8個葡萄球菌菌種，其中表皮葡萄球菌污染率最高（27.2%）[1]。企業(yè)可以建立潔凈區(qū)微生物數(shù)據(jù)庫。建立潔凈區(qū)微生物數(shù)據(jù)庫是追溯產(chǎn)品微生物污染來源的有效方法，能夠為無菌藥品GMP生產(chǎn)過程制定有效的控制措施提供依據(jù)，并使其更有針對性[2]。

3 無菌安全水平提升的措施

3.1 人員培訓

空氣凈化和物理隔離可以有效阻斷大部分微生物的傳播，但接觸和操作引起的污染仍是生產(chǎn)企業(yè)面臨的主要問題，加強對無菌操作人員的培訓和管理是解決這一問題的關(guān)鍵[3]。無菌操作技術(shù)是加強無菌制劑生產(chǎn)過程中無菌控制、保障無菌制劑質(zhì)量的有效方法[4]。目前已無菌制劑生產(chǎn)企業(yè)均建立了完善的質(zhì)量管理體系，能否全面、細致、周到地執(zhí)行和實施GMP有效執(zhí)行是關(guān)鍵。GMP培訓是提高藥品生產(chǎn)企業(yè)人員素質(zhì)、保障員工掌握本崗位的基本理論知識、操作規(guī)程和實際操作技能的有效手段。應對員工開展各類培訓，對不同員工所在崗位需要掌握的知識和技能進行針對性培訓，確保企業(yè)人員能明確掌握崗位的實際操作技能、操作規(guī)范及基本理論知識，從而能使藥品質(zhì)量的基礎(chǔ)得到保證。同時反思現(xiàn)行的無菌培訓，要經(jīng)常對員工進行藥害事件的宣傳教育工作，增強責任心，使其在工作中自覺地按照標準操作規(guī)程操作。

3.2 工藝用水

企業(yè)內(nèi)部應設(shè)立警戒水平及糾偏限度，以便及時發(fā)現(xiàn)不良趨勢，確保水系統(tǒng)的細菌內(nèi)毒素水平和微生物污染水平得到有效的控制。

3.3 環(huán)境管理

環(huán)境管理的主要思想是防止空氣、設(shè)備、設(shè)施以及操作人員的污染和交叉污染。環(huán)境監(jiān)測包括懸浮粒子、空氣浮游菌、沉降菌、設(shè)備和設(shè)施表面的微生物以及操作人員的衛(wèi)生狀況監(jiān)測等。沉降菌、浮游菌及表面微生物這3種監(jiān)測的原理是不同的，針對不同的微生物，不能完全相互替代。沉降菌是用標準提及的方法收集到的活微生物粒子，通過專用的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。浮游菌（英文名：airborne microbe）就是指懸浮在空氣中的活微生物粒子。表面微生物：是指在正常的環(huán)境下，物體體表及或與外界相通的腔道中，都存在著不同種類和數(shù)量的微生物，可以是自身產(chǎn)生的，或者通過接觸、空氣氣流而傳播。通過對潔凈室/區(qū)空氣、設(shè)備、設(shè)施表面以及操作人員表面微生物的采集、鑒別可了解潔凈室的清潔、消毒步驟的有效性或缺陷性。

3.4 注重無菌生產(chǎn)工藝驗證

要定期進行培養(yǎng)液模擬灌裝驗證，使用培養(yǎng)液作為藥品的替代品進行無菌模擬生產(chǎn)，證明經(jīng)過完整的生產(chǎn)過程，對無菌工藝進行驗證。無菌分裝粉針劑的質(zhì)量保證主要依賴于無菌生產(chǎn)線的基本條件和對生產(chǎn)工藝各環(huán)節(jié)嚴格的質(zhì)量控制。培養(yǎng)基模擬灌裝驗證試驗最少在線灌裝3批，每瓶產(chǎn)品均應進行無菌檢查。除菌過濾系統(tǒng)適應性驗證試驗包括過濾系統(tǒng)相容性測試、過濾前后濾膜完整性測試、濾膜的微生物截留量QOS商滅測試。

3.5 現(xiàn)場監(jiān)督

現(xiàn)場監(jiān)督是質(zhì)量保證（quality assurance，QA）的一部分。QA人員的主要職責就是對生產(chǎn)全過程進行控制，為了滿足品質(zhì)的要求而進行的全面有效的質(zhì)量管理活動。QA人員工作的性質(zhì)就是要找別人的缺點與不足，糾正生產(chǎn)過程中出現(xiàn)的差錯及不規(guī)范行為，做到防患于未然。QA人員不僅是對不規(guī)范行為進行扣罰還要能和操作人員共同分析問題，從根本上幫助操作人員解決問題，得到操作人員的理解和尊重。

參考文獻

[1]李瓊瓊，宋明輝，秦峰，劉浩，楊美成.制藥企業(yè)生產(chǎn)環(huán)境中污染葡萄球菌菌種鑒定方法的比較評價及毒素基因調(diào)查分析[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2019（04）.

[2]戶美玲，陳佩，嚴東珍，孟麗.建立潔凈區(qū)微生物數(shù)據(jù)庫與無菌藥品GMP生產(chǎn)過程控制的探討[J].微生物學免疫學進展，2013（03）.

[3]范一靈，馮震，鐘瑋，楊燕，蔣波，房蕊，鮑英，徐偉東.無菌藥品生產(chǎn)企業(yè)核心區(qū)微生物污染調(diào)查與分析[J].中國藥事，2014（06）.

[4]崔菊霞.無菌操作技術(shù)在無菌制劑生產(chǎn)中的應用[J].中國藥事，2013（02）.