免疫膠體金技術在中藥材活性成分檢測中的研究進展

劉立微

摘? 要：中藥材質(zhì)量主要取決于其自身活性成分，目前工作人員主要依靠儀器設備檢測中藥材自身活性成分，這種檢測方式較為復雜，無法做到快速檢測。而免疫膠體金技術可以有效改善這種情況，該技術具有較高靈敏度，較強的特異性，便于處理樣品，能夠快速檢測等特征，與傳統(tǒng)方式相比其實用性顯著。文章從該技術工作原理與特點等多方面對其進行介紹，并探究該項技術在重要活性成分檢測中的應用情況。

關鍵詞：免疫膠體金;中藥材活性成分;研究進展

膠體金是免疫膠體金技術應用過程中不可或缺的部分，利用該項技術自身具備的特征，可以在光鏡電鏡環(huán)境下對膠體金內(nèi)部抗原物質(zhì)金進行檢測定位，定性，甚至是定量研究，是一項全新的標記技術。現(xiàn)如今，隨著科學技術不斷發(fā)展創(chuàng)新，該技術在應用過程中逐漸完善，成為第四大標記技術。因其本身具有高靈敏度，較強特異性，便于處理，快速檢測等多項優(yōu)勢，已廣泛應用在各個檢測儀器當中，例如光鏡，電鏡，流式細胞儀等，最近幾年，該技術也被用于檢測中藥材自身活性當中。

1 免疫膠體金（ICG）技術的概述

1.1 ICG技術的基本原理及特點

1.1.1 基本原理

氯金酸若受到抗壞血酸，白琳等多種還原劑的影響將會形成某種顆粒物質(zhì)，且?guī)в胸撾姷氖杷z溶液，如果受到靜電影響液體會逐漸成為膠體狀態(tài)，故此將其稱作膠體金。運用還原法可以將氯金酸制成大小不一的膠體金顆粒。在弱堿環(huán)境當中，這種顆粒本身會帶有負電荷，能夠與其他直徑較大分子或者蛋白質(zhì)分子融合在一起，利用顯微鏡對其進行觀察可以發(fā)現(xiàn)物質(zhì)當中含有部分黑褐色顆粒，另外部分標記物與相應配體結合在一起會形成粉紅色斑點。膠金體無法影響蛋白質(zhì)或者其他分子生物特征，因此該技術常被運用于免疫學，組織學等多項醫(yī)學領域當中。

1.1.2 特點

和其他醫(yī)學技術進行比較可以看出，免疫膠體金技術具有以下幾項特征;第一，該技術可以借助靜電發(fā)揮的作用與多種生物分子進行統(tǒng)合，且不會改變生物分子原有活性;第二，該技術擁有某種特異性，并不會吸收組織細胞;第三，免疫膠體金標記技術常用于光鏡和熒光顯微鏡當中，IGSS方法是目前最有效的免疫方法，因膠體金本身也可以激發(fā)電子，故此可以用于掃描電鏡工作當中，且其顆粒較為密集，且在顯微鏡環(huán)境下分辨率較高，因此分辨過程較為輕松。

1.2 ICG檢測技術的應用

1.2.1 膠體金技術在電鏡技術上的應用

目前隨著免疫膠體金技術愈發(fā)成熟，該技術在運用過程中已經(jīng)與電鏡技術相互融合，且成為最為常用的免疫細胞化學方法。該技術不僅有上述所說的特征，且可以對抗原體進行測量，定性，觀察，通過觀察結果結合實際情況選用標記方法。免疫膠體金技術多重標記法可以將形態(tài)，功能融合在一起，借助這種方式能夠了解分子之間的關系，包括其合成，分泌等過程。借助不同方式觀察戊型肝炎病毒卻發(fā)現(xiàn)膠體金方法當中有許多病毒顆粒都被金屬顆粒包裹，根據(jù)金屬顆粒分布情況可以輕松找到病毒顆粒，由此可以看出免疫膠體金電鏡技術在運用過程中具有簡便，快速的能特征，提升檢測效果。

1.2.2 在快速檢測上的應用

免疫膠體金技術目前已經(jīng)成為免疫學領域當中常用的檢測方法之一，主要用于檢測藥物中殘留的細菌，病毒等。常用的方法有膠體金免疫層析法、斑點免疫金滲濾法制成試紙條或試劑盒。制備鹽酸克倫特羅載體抗原，免疫動物后產(chǎn)生高效價的特異性抗體，純化抗體與膠體金結合成免疫金，制備成簡易的檢測試紙條。通過檢測試紙條的敏感性、保存期、金標抗體工作濃度選擇、操作方法對比、實驗檢測及與單抗金標試紙條平行檢測等試驗，證明建立的免疫金試紙法快速檢測鹽酸克倫特羅具有實用性、可靠性和穩(wěn)定性。通過優(yōu)化膠體金溶液的pH值和嘔吐毒素的三聯(lián)檢測卡。結果證明：該三聯(lián)檢測卡操作簡便、快速、準確、穩(wěn)定，且能同時檢測3種真菌毒素，有較好的應用前景。

2 中藥材活性成分檢測方法的概述

2.1 化學檢測法

以往工作人員常用化學反應等方法檢測中藥材自身活性成分，從藥材內(nèi)部將活性成分提取出來，并對其采取提純措施，根據(jù)成分自身化學結構選擇相應鑒別方法，例如可以用將鹽酸與鎂粉混合在一起，通過二者產(chǎn)生的化學反應鑒定蘆丁中的活性物質(zhì)黃酮類化合物，觀察溶液顏色變化情況判斷液體當中是否含有相應化合物。和儀器檢測方法不同，該方法操作簡單便捷，且無需投入過多時間精力，但其靈敏度和專一性無法和儀器檢測法比較，這種方法無法做定量分析，故此該方法不常用于檢測中藥材活性成分。

2.2 儀器聯(lián)用法

為了提高檢測方法的專屬性、靈敏度、準確度等，通常將色譜的高效分離與質(zhì)譜的高分辨力聯(lián)合應用，將色譜儀與質(zhì)譜儀或其他儀器串聯(lián)使用。文獻中建立了超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜（uPLc-Ms/MS）測定癍痧涼茶中18種活性成分的定量分析方法，結果表明：所建立的方法線性良好、靈敏度高、精密度高、準確度好、穩(wěn)定性理想。

3 免疫膠體金技術在中藥材活性成分檢測中的應用

大多情況下，中藥材活性成分檢測中會將單克隆抗體技術與ICG技術聯(lián)用，制備成膠體金免疫檢測試紙條。制備免疫膠體金試紙條，首先需制備相應的單克隆抗體，因中藥材活性成分多為小分子物質(zhì)，只有反應原性而不具備免疫原性，必須將其連接到一些大分子蛋白載體上以形成偶聯(lián)物，借助大分子T細胞表位間接誘導B細胞激活、分化增殖，產(chǎn)生針對半抗原的特異性抗體。常見的載體有牛血清白蛋白、多聚賴氨酸等。而偶聯(lián)的方法由目標化合物的官能團決定，若半抗原帶有游離羧基，可用碳化二亞胺法、混合酸酐法、活潑酯法;若半抗原帶有酮基，可用manni ch反應和羧甲基羥胺法。半抗原與載體蛋白偶聯(lián)后通過純化獲得具免疫原性的人工合成抗原，并將其免疫動物，一般選用的動物為小鼠或大鼠，使動物體內(nèi)產(chǎn)生致敏B淋巴細胞。處死動物并取出其脾臟，制備成脾細胞懸液，加入促進劑，再與同系的骨髓瘤細胞按一定比例混合，獲得雜交瘤細胞，通過色譜法或沉淀法純化抗體，并進行效價測定。

4 結束語

綜上所述可以看出，如今我國中醫(yī)藥在臨床領域已經(jīng)得到廣泛的應用，對藥材需求量越來越多。然而因藥材資源匱乏，環(huán)境質(zhì)量不斷下降導致大部分天然藥材安全性無法得到保障，甚至部分藥材已經(jīng)出現(xiàn)變異情況。鑒于這種情況有關部門要加強對藥材市場的監(jiān)管力度，結合實際情況選用檢測方法。目前，在對中藥材活性成分檢驗過程中，免疫膠體金技術已經(jīng)成為最常用的檢測技術，和傳統(tǒng)技術進行比較可以發(fā)現(xiàn)，該技術方法簡單快捷，特異性較強，可以快速檢測出中藥材自身活性成分，發(fā)展前景廣闊。

參考文獻

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