周麗珍 黃成 丁煒煒 嚴(yán)紹熙 賴(lài)胤龍

摘要：為進(jìn)一步提高藍(lán)藻水華應(yīng)急工作中葉綠素a數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和快捷性，以西牛潭水庫(kù)水源地水樣為樣本，開(kāi)展了不同研磨時(shí)間和浸提時(shí)間對(duì)不同含量葉綠素測(cè)定的影響試驗(yàn)。結(jié)果表明，在水華應(yīng)急工作中，樣品在充分研磨的條件下，浸提時(shí)間可縮短至2h進(jìn)行葉綠素a含量測(cè)定。相比于《水質(zhì)葉綠素a 的測(cè)定分光光度法》（HJ897-2017）手工法，該方法提高了快速測(cè)定的準(zhǔn)確性和快捷性。

關(guān)鍵詞：葉綠素a;浸提時(shí)間;藍(lán)藻水華;應(yīng)急監(jiān)測(cè)

中圖分類(lèi)號(hào) Q946 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2020）16-0169-02

1 前言

藍(lán)藻水華是指氮、磷以及其他微量元素等迅速增加，同時(shí)光照、溫度及水紋地理等條件恰好適宜藻類(lèi)生長(zhǎng)繁殖時(shí)，藻類(lèi)大量繁殖聚集并達(dá)到一定濃度后，使水體呈現(xiàn)藍(lán)綠色的一種水體污染現(xiàn)象[1-2]。葉綠素a是表征藍(lán)藻生物量的重要因子之一，藍(lán)藻水華暴發(fā)時(shí)，對(duì)葉綠素a濃度的快速準(zhǔn)確分析可以評(píng)價(jià)藻類(lèi)水華暴發(fā)情況與動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)，對(duì)于做好水華應(yīng)急處置工作具有重要的指導(dǎo)意義[3-5]?！端|(zhì)葉綠素a的測(cè)定分光光度法》（HJ897-2017）[6]是分析葉綠素a濃度的國(guó)標(biāo)法，該方法操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性好且準(zhǔn)確度高。但對(duì)樣品的浸泡提取時(shí)間推薦在2～24h，而不同濃度的葉綠素a充分浸泡提取時(shí)間并不明確，從而不能很好地滿(mǎn)足水華應(yīng)急監(jiān)測(cè)工作中分析速度快的要求。

本研究以西牛潭水庫(kù)水源地水樣為樣本，在《水質(zhì)葉綠素a的測(cè)定分光度法》（HJ897-2017）方法基礎(chǔ)上，開(kāi)展不同研磨時(shí)間和浸提時(shí)間對(duì)不同含量葉綠素a測(cè)定的影響試驗(yàn)，縮短樣品分析時(shí)間，為葉綠素a的測(cè)定提供一種快速有效的方法。

2 材料與方法

2.1 試驗(yàn)材料 全自動(dòng)樣品快速研磨器：品牌;上海凈信;型號(hào)規(guī)格：JXFSTPRP-24;出產(chǎn)編號(hào)：019518261;研磨頻率：65Hz;紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（配10mm石英比色皿）：品牌：新世紀(jì);型號(hào)規(guī)格：T6;出廠(chǎng)編號(hào)：28-1650-01-0520;其他設(shè)備和藥品見(jiàn)《水質(zhì)葉綠素a的測(cè)定分光光度法》（HJ897-2017）。

2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 以西牛潭水庫(kù)水源地水樣為樣本。（1）1OOmL水樣，抽濾后的水樣一份研磨時(shí)間為90s，另一份研磨時(shí)間為180s，2份水樣的浸提時(shí)間均為24h;（2）抽濾3份50mL水樣，研磨時(shí)間均為90 s，浸提時(shí)間分別為2h、4h和24h;抽濾3份1OOmL水樣，研磨時(shí)間均為90s，浸提時(shí)間分別為2h、4h和24h;抽濾3份200mL水樣，研磨時(shí)間均為90s，浸提時(shí)間分別為2h、4h和24h。

3 結(jié)果與分析

3.1 研磨時(shí)間對(duì)葉綠素a含量測(cè)試的影響 在《水質(zhì)葉綠素a的測(cè)定分光光度法》（HJ897-2017）中，采用手工反復(fù)研磨、多次轉(zhuǎn)移到離心管的方式提取葉綠素a，不僅研磨效率低，而且多次轉(zhuǎn)移研磨液會(huì)導(dǎo)致葉綠素a損失較大，影響數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度。全自動(dòng)樣品快速研磨器可以快速自動(dòng)研磨，不僅研磨速度快，效率高，而且可以完全避免葉綠素a的損失，從而大大地提高了測(cè)試葉綠素a含量的準(zhǔn)確度。為初步探討全自動(dòng)樣品快速研磨器研磨時(shí)間對(duì)葉綠素a含量測(cè)試的影響，根據(jù)廠(chǎng)家的建議，研磨時(shí)間90s同時(shí)再設(shè)置180s作為對(duì)比，結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，當(dāng)研磨時(shí)間為90s和180s時(shí)，葉綠素a濃度的均值為73μg/L，相對(duì)偏差為1.4%，說(shuō)明葉綠素a濃度變化不大，基本達(dá)到充分研磨狀態(tài)。因此，選定研磨時(shí)間90s，繼續(xù)探討不同浸提時(shí)間對(duì)葉綠素a濃度的影響。

3.2 浸提時(shí)間對(duì)葉綠素a含量測(cè)定的影響 在《水質(zhì)葉綠素a的測(cè)定分光光度法》（HJ897-2017）中，對(duì)樣品浸提時(shí)間推薦在2～24h。因此，本實(shí)驗(yàn)以浸提時(shí)間24h為背景參考，探索浸提時(shí)間2、4h、24h背景參考相比對(duì)葉綠素a濃度測(cè)試的影響。由表2可知，在50mL、100mL、200mL相同抽濾體積下，分別浸提2h、4h和24h，葉綠素a濃度的范圍為70～71μg/L，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.8%～2.9%，說(shuō)明相同抽濾體積時(shí)，浸提2h和4h與24h比較，葉綠素a濃度差別不大，浸提2h時(shí)基本達(dá)到浸提充分狀態(tài)。對(duì)抽濾體積（50mL、1OOmL、200mL）、浸提時(shí)間（2h、4h、24h）和葉綠素a濃度3個(gè)因素進(jìn)行雙側(cè)顯著相關(guān)性分析，浸提時(shí)間和葉綠素a濃度的P值為0.561，大于0.05，表明相同抽濾體積時(shí)，浸提2h和4h與背景參考24h比較，葉綠素a濃度變化均不顯著。因此，在藻類(lèi)水華應(yīng)急工作中，準(zhǔn)確、快速測(cè)定不同含量葉綠素濃度的最佳浸提時(shí)間為2h。抽濾體積和葉綠素a含量的P值為0.490，大于0.05，表明相同浸提時(shí)間時(shí)，抽濾體積為50mL、100mL、200mL的葉綠素a濃度變化不顯著。4結(jié)論由本次試驗(yàn)可知，葉綠素a的研磨階段，采用全自動(dòng)樣品快速研磨器研磨90s，基本可以研磨充分，相比于手工研磨，不僅提高了效率，而且減少了研磨過(guò)程中葉綠素a的損失率，大大提高了數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。葉綠素a的浸提階段，在50mL、1 OOmL、200mL相同抽濾體積下，浸提2h、4h與24h比較，葉綠素a濃度變化不顯著。因此，在水華應(yīng)急工作中，樣品在充分研磨的條件下，浸提時(shí)間可縮短至2h進(jìn)行葉綠素a濃度測(cè)定。相比于《水質(zhì)葉綠素a的測(cè)定分光光度法》（HJ897-2017）手工法，該方法提高了測(cè)定的準(zhǔn)確性和快捷性。

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[6]HJ 897-2017，水質(zhì)葉綠素a的測(cè)定分光光度法[S].

（責(zé)編：張宏民）

基金項(xiàng)目：韶關(guān)市2018年科技計(jì)劃社會(huì)發(fā)展與農(nóng)村科技專(zhuān)項(xiàng)資金項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：2018sn047。

作者簡(jiǎn)介：周麗珍（1989-），女，廣東韶關(guān)人，碩士，工程師，從事環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)研究工作。 *通訊作者 收稿日期：2020-06-30