李思月 曹丹 王多 付夢露 陳文英 王青

摘?要：本實(shí)驗(yàn)采用超聲波提取法對白花蛇舌草中的多糖進(jìn)行提取，以多糖得率為評價(jià)指標(biāo)，采用單因素試驗(yàn)對料液比、提取時(shí)間、提取溫度、超聲功率進(jìn)行研究，并進(jìn)行驗(yàn)證，優(yōu)選最佳提取工藝。結(jié)果表明，提取多糖的最佳工藝為料液比1：6，超聲功率110w，提度60℃，提取60min，在最佳條件下連續(xù)進(jìn)行3次提取，多糖得率可達(dá)3.42%。

關(guān)鍵詞：白花蛇舌草;多糖提取;超聲波法

1儀器與試藥

儀器：Branson2200超聲波清洗儀（上海方正電子電器有限公司）;BT-125D電子分析天平（普林巴克科學(xué)儀器有限公司）;TU-1810紫外可見分光光度計(jì)（北京普新通用儀器有限責(zé)任公司）;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）。

試藥：白花蛇舌草，購于陜西康譽(yù)藥業(yè)有限公司，經(jīng)鑒定為茜草科草本植物;葡萄糖對照品（批號2019015，北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司）;山東旭晨化工科技有限公司）;無水碳酸氫鈉（天津天力化學(xué)試劑有限公司）;乙醇、正丁醇、無水乙醇等為分析純。

2 研究方法

2.1對照品溶液的配制

取燥至不含結(jié)晶水的糖對照品約10mg，精定，于10ml的容瓶中，加入，溶解，定容至刻度，即得0.1mg/ml的葡萄糖對照品溶液。

2.2苯酚溶液的制備

取100g苯酚，加0.1g鋁片和0.05g氫氧化鈉，加熱蒸餾，收集182℃的餾分，取此餾分5ml加水溶解并稀釋至100ml，搖勻，即得5%的苯酚溶液，置棕色瓶內(nèi)備用。

2.3最大吸收波長的確定

精密吸取1ml葡萄糖對照品溶液置于10ml容量瓶中，立即加入濃硫酸5.0ml，6%苯酚溶液1.0ml，靜置20min，搖勻，放至室溫，進(jìn)行測定，空白試驗(yàn)為蒸餾水，在200～600nm波長范圍內(nèi)掃描，測得在488nm處出現(xiàn)最大吸收。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

分別精密吸取0ml，0.1ml，0.2ml，0.4ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml的葡萄糖對照品溶液，置于10ml的瓶中，加水定容至刻度，搖勻，濾過，分別取續(xù)濾液1.0ml至試管中，再加入濃硫酸5.0ml，苯酚溶液1ml，放置室溫，以0ml容量瓶為空白對照，在488nm處測吸光度，以對照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=10.971x+0.0042，在0.01～0.10mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，R2=0.9996

2.5多糖的提取方法

稱取白花蛇舌草適量烘干，加一定量水，采用提取2次，濾過，濾液濃縮至原體積一半，加2倍量乙醇，置至沉淀析出，抽濾，沉淀加15ml的水使溶全，加-正混合溶液，充分振搖，除去含有的蛋白，離心，用2mg/ml的氫氧化鈉調(diào)節(jié)上清液的PH等于7，離心后，加入乙醇，此時(shí)乙醇為原來的2倍量，析出沉淀，將沉淀物用等真燥至重，即得白舌草干多糖。

2.6多糖得率計(jì)算

按2.5下工藝流程制備干多糖，將干多糖置于100mL容量瓶中溶解后定容，得到多糖溶液。并采用硫酸-苯酚顯色法進(jìn)行顯色。在490nm出測定吸光度值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度。

Y=（C×V×D）×10-6/m×100%

其中，Y為多糖得率;C為多糖濃度;D為稀釋倍數(shù);m為半枝蓮質(zhì)量;V為配置溶液的體積。

3提取工藝研究

3.1料液比對多糖得率的影響

在確定110w，提取60min，提度60℃三者保持不變時(shí)，取白花蛇舌草，分別考察料液比為1：4，1：5，1：6，1：7，1：8對多糖得率的影響。按照上述實(shí)驗(yàn)方法結(jié)果得，多糖得率隨著料液比先增加后逐漸減少。故選擇料液比為1：4，1：6。

3.2提取時(shí)間對多糖得率的影響

在比為1：6，60℃，超率110w三者不變時(shí)，取白花蛇舌草，考察超聲提取時(shí)間為50，60，70，80，90min時(shí)，按照上述的實(shí)驗(yàn)方法計(jì)算多糖得率，結(jié)果在提取時(shí)間為60min時(shí)，多糖得率最大，隨著時(shí)間延長，依次降低故提取時(shí)間為60min。

3.3提取溫度對多糖得率的影響

在確定1：6，110w，為60min三者不變時(shí)，取白花蛇舌草，考察提取溫度為50，60，70，80，90℃時(shí)，多糖得率的情況，按照上述的實(shí)驗(yàn)方法計(jì)算多糖得率，結(jié)果可見：隨的升高，多糖先升高，再逐漸下降，故提取溫度為60℃。

3.4超聲功率對多糖得率的影響

在確定1：6，60min，提度60℃三者不變時(shí)，取白花蛇舌草，考察超聲功率為70，80，90，100，110w時(shí)，多糖得率的情況，按照上述的實(shí)驗(yàn)方法計(jì)算多糖得率，結(jié)果可見：隨超聲功率增加而增大，所以，超聲功率越大，多糖的得率越高，故超聲功率水平為110w。

3.5最佳提取工藝驗(yàn)證

精密稱取白花蛇舌草藥材10g，根據(jù)單因素試驗(yàn)確定最佳水平進(jìn)行提取，平行進(jìn)行3次，按照“2.6”項(xiàng)下方法計(jì)算多糖得率，結(jié)果在最佳條件下，白花蛇舌草多糖得率平均為3.42%。

4結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)在提取過程中為了減少干擾，首先采用乙醇去除所含的單糖，低聚糖及苷類等干擾性成分，采用了單因素試驗(yàn)考察影響白花蛇舌草多糖得率的因素并得到各因素的最高水平并進(jìn)行驗(yàn)證，最后得在提取60℃、提60min、料比1：6、超率110W，率最高為3.42%，實(shí)驗(yàn)過程中采用的超聲波法在實(shí)驗(yàn)室中簡單易行，操作方法簡單，為白花蛇舌草多糖的提取工藝提供了一定的理論基礎(chǔ)，為其在藥理作用和臨床應(yīng)用研究也提供了幫助。

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基金項(xiàng)目：本文系2019年大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目省級立項(xiàng)項(xiàng)目，項(xiàng)目名稱為白花蛇舌草中多酚類成分提取的工藝優(yōu)化及抗氧化活性研究，項(xiàng)目編號為S201913123040;

作者簡介：李思月，陜西國際商貿(mào)學(xué)院醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)2016級

通訊作者：王青，講師，主要從事中藥化學(xué)與質(zhì)量控制的教學(xué)與科研工作