劉 洋 ，趙文靜 ，2，沈 斐 ，戴慧俊 ，朱 峰 ，董京萍 ，金唯新 ，紀兆林 *

（1.揚州大學園藝與植物保護學院，江蘇揚州 225009；2.連云港市農(nóng)業(yè)科學院果林研究室，江蘇連云港 222000；3.無錫市惠山區(qū)陽山鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務中心，江蘇無錫 214155；4.無錫太湖陽山水蜜桃科技有限公司，江蘇無錫 214156）

桃細菌性穿孔?。╬each bacterial shot hole）是由樹生黃單胞李致病變種（Xanthomonas arboricolapv.pruni，Xap）侵染引起、危害桃樹的重要病害之一，在世界范圍內(nèi)廣泛分布和傳播[1-2]。該病害還危害李樹[3]、杏樹[4]、櫻桃[5]等核果類果樹以及扁桃[6]等，在我國南、北方產(chǎn)區(qū)均普遍發(fā)生，在沿江河湖海等地區(qū)以及多雨年份嚴重發(fā)生。該病主要為害桃樹葉片，也能為害枝條和果實，造成早期落葉，減弱樹勢，影響商品果率，降低品質(zhì)[7-9]。近年來，桃樹種植面積大量增加，桃細菌性穿孔病發(fā)生日益嚴重，有的桃園大暴發(fā)或大流行，導致減產(chǎn)甚至絕產(chǎn)，帶來了較大的經(jīng)濟損失，嚴重影響桃產(chǎn)業(yè)健康和可持續(xù)發(fā)展。目前可用于防治該病的藥劑很少，且防效參差不齊、不理想。因此，筆者通過室內(nèi)藥劑毒力測定和田間試驗，以篩選出生產(chǎn)上用于桃細菌性穿孔病防治的有效化學農(nóng)藥和生物農(nóng)藥，為桃細菌性穿孔病高效、低毒防治提供技術支持，也為化學和生物農(nóng)藥復配防治奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

桃細菌性穿孔病菌（Xanthomonas arboricolapv.pruni,Xap）9-6，為揚州大學園藝與植保學院實驗室保存的菌株，試驗前于NB培養(yǎng)基上活化和培養(yǎng)。

1.2 供試藥劑

選取用于室內(nèi)毒力測定的藥劑均為登記可用于細菌病害防治的殺細菌劑，以及報道具有細菌抑制作用的廣譜殺菌劑或一些產(chǎn)區(qū)用于細菌病害防治的藥劑，如異菌脲和乙蒜素等。在室內(nèi)毒力測定基礎上選擇抑菌作用較好的藥劑進行田間防治試驗。

用于室內(nèi)毒力測定的化學農(nóng)藥原藥有：98%溴菌腈，江蘇托球農(nóng)化股份有限公司生產(chǎn)；97%異菌脲，江蘇藍豐生物化工股份有限公司；50%辛菌胺，江蘇東寶農(nóng)化股份有限公司；96%噻唑鋅，湖北康寶泰精細化工有限公司；96%喹啉銅、96%葉枯唑，山東德睿商貿(mào)有限公司。用于室內(nèi)毒力測定的化學農(nóng)藥制劑有：3%噻霉酮可濕性粉劑（WP），陜西西大華特科技實業(yè)有限公司；80%波爾多液可濕性粉劑（WP），通州正大農(nóng)藥化工有限公司；20%噻菌銅懸浮劑（SC），浙江龍灣化工有限公司；50%氯溴異氰尿酸可溶粉劑（SP），河南銀田精細化工有限公司；57.6%氫氧化銅水分散粒劑（WG），澳大利亞紐發(fā)姆有限公司。

用于室內(nèi)毒力測定的生物農(nóng)藥制劑有：0.3%梧寧霉素水劑（AS），遼寧微科生物工程股份有限公司；72%農(nóng)用硫酸鏈霉素可溶粉劑（SP），華北制藥河北華諾有限公司；2%春雷霉素可濕性粉劑（WP），青島泰生生物科技有限公司；80%乙蒜素乳油（EC），河南科邦化工有限公司；12%中生菌素可濕性粉劑（WP），福建凱立生物制品有限公司；8%寧南霉素水劑（AS），德強生物股份有限公司；0.3%丁子香酚可溶液劑（SL），南通神雨綠色藥業(yè)有限公司。

在室內(nèi)毒力測定基礎上，選擇用于田間防治試驗的藥劑包括50%氯溴異氰尿酸SP，河南銀田精細化工有限公司；0.3%梧寧霉素AS，遼寧微科生物工程股份有限公司；72%農(nóng)用硫酸鏈霉素SP，華北制藥河北華諾有限公司；20%噻唑鋅SC，美國瑞邦國際集團（中國）生物科技有限公司；3%中生菌素WP，福建凱立生物制品有限公司；25%溴菌腈WP，江蘇托球農(nóng)化股份有限公司；3%噻霉酮WP，陜西西大華特科技實業(yè)有限公司；33.5%喹啉銅SC，浙江海正化工股份有限公司。

1.3 室內(nèi)毒力測定

原藥用丙酮溶解，制劑用無菌水溶解，溶解后用無菌水稀釋配置成10 g/L藥劑母液。將各藥劑母液用無菌水稀釋，配置成所需梯度濃度藥液。采用牛津杯擴散法測定各梯度藥液對桃細菌性穿孔病菌的抑菌效果。配制雙層平板，平板表面晾干后，取病菌菌液150 μL（1×108cfu/mL）均勻涂平板，將牛津杯放置在平板中央，其中加入100 μL待測藥液，于28℃培養(yǎng)16 h后測量抑菌圈直徑，每個濃度藥劑處理重復3次，并設清水作為對照。

按式（1）計算不同濃度藥劑的抑制率。

同時配置含不同梯度濃度的各藥劑平板，采用病菌平板劃線法，確定各藥劑對病菌的最低抑菌濃度（MIC）。將藥劑不同濃度的抑制率轉換為機率值，濃度轉換為對數(shù)值，以抑制率機率值為縱坐標（y），濃度對數(shù)值為橫坐標（x），用DPS軟件分析計算出各藥劑對病菌的毒力回歸方程、EC50值等。

1.4 田間小區(qū)防治試驗

根據(jù)室內(nèi)毒力測試結果，田間小區(qū)試驗選用毒力較好的氯溴異氰尿酸、梧寧霉素、農(nóng)用硫酸鏈霉素、噻唑鋅、中生菌素、溴菌腈以及噻霉酮和喹啉銅等藥劑。試驗地設在江蘇省無錫市惠山區(qū)陽山鎮(zhèn)寺前村10年生桃園，品種為“柳條白鳳”。藥劑施藥劑量根據(jù)藥劑包裝袋上的推薦用量濃度及生產(chǎn)上防治細菌病害的用量范圍綜合設置。試驗處理：0.3%梧寧霉素AS（有效成分含量3.75 mg/L）、72%農(nóng)用硫酸鏈霉素SP（有效成分含量240 mg/L）、3%中生菌素WP（有效成分含量50 mg/L）、20%噻唑鋅SC（有效成分含量400 mg/L）、50%氯溴異氰尿酸SP（有效成分含量333.33 mg/L）、25%溴菌腈WP（有效成分含量250 mg/L）、3%噻霉酮WP（有效成分含量20mg/L）、33.5%喹啉銅SC（有效成分含量223.33 mg/L）以及清水對照。每試驗處理3個小區(qū)（重復），每小區(qū)3棵桃樹，共27個小區(qū)（重復）。桃樹大小一致，各小區(qū)隨機排列，并插地牌。桃樹落花后開始施藥，連續(xù)噴施4次，每次間隔14 d左右。

本次試驗分別于最后1次施藥后5、13 d進行病情調(diào)查，調(diào)查所有試驗桃樹，每棵桃樹調(diào)查10根新梢上的全部葉片。按東、南、西、北、中方向，每個方位隨機調(diào)查2根新梢。分級方法（以葉片為單位）為0級：葉片上無細菌性穿孔病斑；1級：葉片上病斑極少，不足5%葉面積；3級：葉片上病斑較少，占6%～10%葉面積；5級：葉片上病斑較多，占11%～25%葉面積；7級：葉片上病斑較重，占26%～50%葉面積；9級：葉片上病斑很多很重，占50%以上葉面積。病葉率、病情指數(shù)、病葉防效、病指防效，按式（2）～（5）計算。

2 結果與分析

2.1 不同藥劑對桃細菌性穿孔病菌的毒力

由表1可見，化學農(nóng)藥中氯溴異氰尿酸對桃細菌性穿孔病菌的毒力最強，EC50值為0.055 9 mg/L，最小抑菌濃度為27 mg/L；噻唑鋅的EC50值為0.116 6 mg/L，毒力次之；再者是溴菌腈、噻霉酮和喹啉銅，對應的EC50值分別為1.528 7、2.171 6和3.031 5 mg/L。葉枯唑、氫氧化銅對桃細菌性穿孔病菌的毒力較差，EC50分別接近100 mg/L和達到400 mg/L以上，而噻菌銅對桃細菌性穿孔病菌完全沒有抑制作用。

表1 化學殺菌劑對桃細菌性穿孔病菌的毒力

由表2可知，在供試的生物農(nóng)藥中，梧寧霉素和農(nóng)用硫酸鏈霉素對桃細菌性穿孔病菌的毒力最強，EC50值分別為0.065 1、0.069 8 mg/L；中生菌素的毒力次之，EC50值為1.242 2 mg/L；乙蒜素的毒力很差，EC50值超過了500 mg/L。梧寧霉素、農(nóng)用硫酸鏈霉素和中生菌素完全抑制病菌的最低抑菌濃度分別為12.500 0、38.880 0和14.343 8 mg/L，而丁子香酚則對病菌沒有抑制作用。

表2 生物農(nóng)藥對桃細菌性穿孔病菌的毒力

2.2 不同藥劑對桃細菌性穿孔病的田間防效

田間小區(qū)試驗表明，除3%噻霉酮WP的防治效果較差外，其他試驗藥劑對細菌性穿孔病都有較好的防效。第4次藥后5 d的病葉防效為45.88%～93.20%，病指防效為56.15%～94.73%，其中20%噻唑鋅SC的防效最好（病葉和病指防效均在90%以上）；其次是25%溴菌腈WP、33.5%喹啉銅SC，3%中生菌素WP和0.3%梧寧霉素AS。藥后13 d的病葉防效為44.13%～91.38%，病指防效為56.41%～93.84%，其中72%農(nóng)用硫酸鏈霉素SP防效最好，其次是0.3%梧寧霉素AS、33.5%喹啉銅SC、3%中生菌素WP和50%氯溴異氰尿酸SP（表3）。此外，20%噻唑鋅SC和25%溴菌腈WP藥后13 d的防效明顯低于其藥后5 d的防效，而50%氯溴異氰尿酸SP和33.5%喹啉銅SC的防效較穩(wěn)定。

表3 不同藥劑對桃細菌性穿孔病的田間防效

3 結論與討論

毒力測定表明，化學農(nóng)藥氯溴異氰尿酸、生物農(nóng)藥梧寧霉素和農(nóng)用硫酸鏈霉素對桃細菌性穿孔病菌的毒力強，EC50值分別為0.055 9、0.065 1和0.069 8 mg/L；其次是噻唑鋅，EC50值為0.116 6 mg/L；而中生菌素、溴菌腈、噻霉酮和喹啉銅對病菌也有較好的抑制作用?；瘜W農(nóng)藥氫氧化銅、葉枯唑、波爾多液以及生物農(nóng)藥乙蒜素、寧南霉素的抑菌效果較差，EC50值均超過50 mg/L。丁子香酚和噻菌銅對病菌沒有抑制作用，前者可能具有誘導抗病作用，而后者具有雙重殺菌機理。噻唑基團和銅離子都對細菌有較好的防治作用[10]，但對桃細菌性穿孔病菌無抑菌活性還需進一步研究。一般含銅制劑都是植物細菌性病害的首選防治藥劑，由于生產(chǎn)上含銅制劑的頻繁使用，已出現(xiàn)了桃細菌性穿孔病菌等植物病原細菌的銅耐受性和抗性[11-12]，本研究氫氧化銅對桃細菌性穿孔病菌的抑菌作用較差（EC50值為425.751 7 mg/L），而噻菌銅則對病菌沒有抑菌活性，這或許與桃細菌性穿孔病菌中銅耐受性或抗性有關，其中可能存在其他機制，并不是Xanthomonas中的copLAB基因簇決定的[11]。

田間小區(qū)防治試驗表明，氯溴異氰尿酸、噻唑鋅、喹啉銅、溴菌腈等化學農(nóng)藥，梧寧霉素、農(nóng)用硫酸鏈霉素、中生菌素等生物農(nóng)藥對桃細菌性穿孔病都有較好的防治效果，藥后5d的病葉防效為45.88%～93.2%，藥后13 d的病葉防效為44.13%～91.38%。50%氯溴異氰尿酸SP對水稻白葉枯病和細菌性條斑病[13]、水稻細菌性基腐病[14]、黃瓜細菌性角斑病[15]、月季根癌病[16]等都有較好或一定的防治效果。氯溴異氰尿酸低毒、易分解，具有內(nèi)吸傳導作用，溶于水后能釋放出次溴酸和次氯酸，具有殺滅細菌和真菌的能力，釋放后形成的三嗪二酮和均三嗪仍有較強的殺菌作用。此外，50%氯溴異氰尿酸SP的生產(chǎn)原料富含尿素、鉀鹽及微量元素群，也具有促進植物生長的作用[16]。因此在桃細菌性穿孔病防治上可考慮使用氯溴異氰尿酸。梧寧霉素（又稱四霉素）是一種高效低毒、內(nèi)吸的農(nóng)用抗生素，對革蘭氏陰性細菌和革蘭氏陽性細菌均有極強的殺滅作用，對柑橘潰瘍病菌[17]、煙草青枯病菌[18]具有較強的毒力，對白菜軟腐病也有較好的防效[19]，因此也可用于桃細菌性穿孔病的防治。農(nóng)用硫酸鏈霉素對桃細菌性穿孔病菌的毒力及田間防效均較好，但已不再登記及續(xù)展，不能再用于細菌病害的防治。本研究篩選出來的生物農(nóng)藥梧寧霉素及中生菌素或可替代農(nóng)用硫酸鏈霉素應用于田間植物細菌病害的防治。因此，氯溴異氰尿酸、梧寧霉素、噻唑鋅、中生菌素、喹啉銅、溴菌腈等農(nóng)藥在桃細菌性穿孔病防治上具有較好的應用前景。因筆者只采用一種濃度進行桃細菌性穿孔病田間防治試驗，所以在這些藥劑的劑量、使用時間和次數(shù)以及這些藥劑的組合等方面還需要進一步試驗和探索，同時這些化學農(nóng)藥和生物農(nóng)藥的復配也需進一步研究，以減少化學農(nóng)藥的使用。