皮 泉， 張 霞， 劉顯明， 曾秀玲， 劉妍罕， 曾茂芹， 溫貴蘭， 文 明*

(1. 貴州省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州 貴陽 550008； 2. 威寧縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州 威寧 553100； 3. 貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025)

近年來，貴州省委省政府大力支持生態(tài)家禽養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展，明確將“生態(tài)家禽”列為助推貴州省脫貧攻堅(jiān)“一縣一業(yè)”特色優(yōu)勢(shì)產(chǎn)業(yè)之一進(jìn)行發(fā)展，將生態(tài)家禽養(yǎng)殖作為貴州省脫貧攻堅(jiān)工作的重點(diǎn)。生態(tài)養(yǎng)雞是從農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展角度，根據(jù)生態(tài)學(xué)與生態(tài)經(jīng)濟(jì)學(xué)原理，將傳統(tǒng)養(yǎng)殖方法和現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)相結(jié)合，利用林地、草場(chǎng)、果園、農(nóng)田、荒山、竹園、河灘等資源進(jìn)行放養(yǎng)，生產(chǎn)無公害優(yōu)質(zhì)雞。隨著生態(tài)養(yǎng)雞規(guī)模擴(kuò)大，養(yǎng)殖時(shí)間延長(zhǎng)，疫病問題也日益突出。為了解貴州生態(tài)養(yǎng)雞主要疫病(禽流感、新城疫)的免疫狀況和感染情況，2020年7月本項(xiàng)目組隨機(jī)選取威寧縣5個(gè)生態(tài)養(yǎng)雞場(chǎng)，采集血清樣品和棉拭子樣品進(jìn)行禽流感和新城疫免疫抗體監(jiān)測(cè)及病原核酸檢測(cè)，以期為生態(tài)養(yǎng)雞場(chǎng)主要疫病的防控提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 檢測(cè)樣品選取養(yǎng)殖規(guī)模在2 000羽以上的生態(tài)養(yǎng)雞場(chǎng)5個(gè)，每場(chǎng)隨機(jī)抽取雞血清樣品100份，共500份；每場(chǎng)隨機(jī)采集咽喉、泄殖腔雙棉拭子(合并)樣品20份，共100份。待檢樣品冷藏保存，送至貴州省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

1.2 檢測(cè)試劑與主要儀器禽流感H5亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原(批號(hào)20191213)、禽流感H7亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原(批號(hào)20191225)、新城疫血凝抑制試驗(yàn)抗原(批號(hào)20200510)，購(gòu)自青島易邦生物工程有限公司公司；禽流感病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒(批號(hào)20191218)，購(gòu)自哈爾濱國(guó)生生物科技股份有限公司；新城疫病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒(批號(hào)ND20191230P)，購(gòu)自北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司；病毒RNA提取試劑盒(批號(hào)NE0230)，購(gòu)自北京雷根生物技術(shù)有限公司；熒光定量PCR儀(ProFlexTM)，Thermo Fisher公司產(chǎn)品。

1.3 禽流感與新城疫免疫抗體監(jiān)測(cè)制備1%紅細(xì)胞懸液以及禽流感H5亞型、H7亞型和新城疫4單位抗原懸液。取待檢雞血清樣品按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T 18936—2003)、《新城疫診斷技術(shù)》(GB/T 16550—2008)血凝和血凝抑制(HA-HI)試驗(yàn)測(cè)定雞血清中禽流感H5亞型、H7亞型和新城疫抗體效價(jià)。結(jié)果判定：HI效價(jià)≤23判為陰性；HI效價(jià)=24為可疑，需重復(fù)試驗(yàn)；HI效價(jià)≥25判為陽性。

1.4 禽流感與新城疫病毒核酸檢測(cè)取雞咽喉、泄殖腔棉拭子樣品，按照病毒RNA提取試劑盒說明書提取總RNA，用禽流感病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒和新城疫病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒分別進(jìn)行禽流感病毒和新城疫病毒核酸檢測(cè)。結(jié)果判定：陽性對(duì)照Ct值≤30并出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線，陰性對(duì)照無Ct值且無特定擴(kuò)增曲線，表示試驗(yàn)成立。檢測(cè)樣品Ct值≤30并出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線判為陽性；檢測(cè)樣品30

2 結(jié)果與分析

2.1 禽流感與新城疫免疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果由表1可見：禽流感H5亞型、H7亞型和新城疫免疫抗體平均HI效價(jià)分別為26.68、27.04、26.21，但雞群免疫抗體效價(jià)的離散度較大(分別為31.06%、27.48%、25.56%)，表明免疫抗體整齊度較低。平均免疫抗體合格率分別為86.78%、95.64%、92.74%，達(dá)到國(guó)家農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定≥70%的要求。

表1 威寧縣生態(tài)雞禽流感和新城疫免疫抗體監(jiān)測(cè)統(tǒng)計(jì)

2.2 禽流感與新城疫病毒核酸檢測(cè)由圖1、圖2可見：100份雞咽喉、泄殖腔棉拭子樣品均未檢出禽流感病毒和新城疫病毒特異性核酸，說明生態(tài)養(yǎng)殖雞群無禽流感和新城疫感染。

3 討論

3.1生態(tài)家禽養(yǎng)殖作為貴州省重點(diǎn)發(fā)展的農(nóng)業(yè)農(nóng)村產(chǎn)業(yè)革命支柱產(chǎn)業(yè)之一，全省各地出現(xiàn)了“經(jīng)濟(jì)林+雞”“果林+雞”“茶林+雞”等多種生態(tài)養(yǎng)殖模式，但在養(yǎng)殖過程中常發(fā)生“重養(yǎng)殖輕防疫、抓發(fā)展輕環(huán)保、求產(chǎn)量輕安全”等問題。由于生態(tài)規(guī)模養(yǎng)殖環(huán)境消毒難度較大，疫苗免疫困難較多，接觸野生動(dòng)物機(jī)會(huì)較高，發(fā)生疫病的風(fēng)險(xiǎn)較大，因此本項(xiàng)目組選擇有候鳥遷徙和棲息地(草海)、生態(tài)養(yǎng)殖疫病風(fēng)險(xiǎn)較大的威寧縣進(jìn)行生態(tài)雞主要疫病(禽流感和新城疫)免疫抗體監(jiān)測(cè)與病原核酸檢測(cè)，以了解生態(tài)養(yǎng)雞場(chǎng)禽流感與新城疫的免疫狀況和感染情況。

3.2本次對(duì)威寧縣5個(gè)生態(tài)養(yǎng)雞場(chǎng)進(jìn)行禽流感和新城疫免疫抗體監(jiān)測(cè)顯示：H5亞型禽流感免疫抗體合格率為86.80%，低于2019年周立良[1]對(duì)福建省武夷山市雞場(chǎng)(97.31%)和馬衛(wèi)紅等[2]對(duì)貴州省惠水縣雞場(chǎng)(92.75%)的檢測(cè)結(jié)果；H7亞型禽流感免疫抗體合格率為95.60%，與福建省武夷山市(97.31%)[1]和貴州省惠水縣(93.40%)[2]的檢測(cè)結(jié)果基本一致；新城疫免疫抗體合格率為92.80%，與謝梅等[3]2019年對(duì)河北省衡水市雞場(chǎng)的檢測(cè)結(jié)果相近。在5個(gè)生態(tài)養(yǎng)雞場(chǎng)中均未檢測(cè)出禽流感和新城疫病毒，說明威寧縣生態(tài)養(yǎng)雞場(chǎng)未受禽流感和新城疫感染，防控工作做得較好。此外，雞群H5亞型、H7亞型禽流感和新城疫免疫抗體HI效價(jià)的離散度較大，說明生態(tài)養(yǎng)雞場(chǎng)免疫抗體整齊度不高，需要定期開展免疫抗體監(jiān)測(cè)，對(duì)免疫抗體HI效價(jià)不合格的雞及時(shí)進(jìn)行禽流感和新城疫補(bǔ)免工作，提高生態(tài)雞群免疫抗體保護(hù)力，有效防止禽流感和新城疫野毒感染。