一例羊傳染性胸膜肺炎的診斷與分析

熊 杰，張昕彤，蔣成偉，胡生富，蒲楊柳，梁易曉

（1.攀枝花市動物疫病預(yù)防控制中心，四川 攀枝花 617000；2.攀枝花市動物衛(wèi)生監(jiān)督所）

羊傳染性胸膜肺炎，又稱羊支原體性肺炎（MPSG），是由多種支原體引起的綿羊和山羊的一種高度接觸性傳染病，以高熱、咳嗽、纖維素性胸膜肺炎為主要特征，典型病理特征是胸腔有大量淡黃色漿液纖維素性滲出物；胸膜充血；肺胸膜與肋胸膜粘連；心包積液；肺臟肝變。筆者就2020 年5 月攀枝花某散養(yǎng)戶山羊發(fā)生羊傳染性胸膜肺炎的發(fā)病情況、臨床癥狀、病理變化、實驗室診斷，提出思考和分析。

1 發(fā)病情況及臨床癥狀

攀枝花某農(nóng)戶，養(yǎng)殖本地山羊32只，2020年5月26日開始發(fā)病，出現(xiàn)眼結(jié)膜蒼白、發(fā)紺，精神沉郁，死前口吐泡沫、低嚎和腹部膨脹等癥狀，到27日已死亡7只，死亡率達(dá)21.9%。

2 病理變化

對死亡24 h內(nèi)的山羊進(jìn)行解剖，發(fā)現(xiàn)心臟質(zhì)地軟化，肺與胸壁，肝與腹壁少量粘連，肺臟肝變、真胃出血，胃黏膜壞死脫落，膽囊腫大積液。

經(jīng)過對臨床癥狀和病理變化分析，初步懷疑為羊傳染性胸膜肺炎感染，現(xiàn)場采集心、肝、肺、腸系膜淋巴結(jié)至實驗室進(jìn)行熒光定量PCR檢測。

3 實驗室診斷

3.1 樣品處理及核酸提取

將現(xiàn)場采集的心、肝、肺等組織用組織研磨儀（寶予德，EasyextractS）進(jìn)行組織勻漿后，8 000 rpm離心2 min取上清液，按照DNA 提取試劑盒（離心柱提取法）提取組織DNA。

3.2 熒光定量PCR

將提取的DNA按照無錫優(yōu)聯(lián)生物科技有限公司羊傳染性胸膜肺炎（MPSG）核酸檢測試劑盒（熒光-PCR法）（生產(chǎn)批號：20040101）說明書進(jìn)行羊傳染性胸膜肺炎（MPSG）支原體檢測。

4 結(jié)果

羊傳染性胸膜肺炎（MPSG）支原體檢測結(jié)果：陽性對照Ct 值≤32 并出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線，陰性對照CT 值＞38或無CT值，試驗結(jié)果成立。所有被檢樣品CT值≤35并出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線，表明所有樣品羊傳染性胸膜肺炎（MPSG）支原體陽性。

5 討論

山羊支原體山羊肺炎亞種（Mccp）、絲狀支原體山羊亞種（Mmc）和綿羊肺炎支原體（Mo）是引起羊傳染性胸膜肺炎的主要病原體，其中Mccp 和Mmc 屬于絲狀支原體簇，均感染山羊，Mo 感染山羊和綿羊。三種致病支原體中，Mccp 引起的山羊傳染性胸膜肺炎（CCPP）危害最大，發(fā)病率高達(dá)100%，病死率60%～70%，世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列入必須上報的動物疫病目錄，我國為將其與其他支原體引起的山羊肺炎區(qū)別，將其命名為山羊接觸傳染性胸膜肺炎，并制定了國家標(biāo)準(zhǔn)。Mccp、Mmc和Mo的正確及時診斷是羊傳染性胸膜肺炎防控的重點，其中Mccp 的實驗室診斷則最為困難。病原分離與鑒定是鑒別診斷支原體的黃金標(biāo)準(zhǔn)，但是由于Mccp 體外生長難度大并且容易受到其他支原體污染，此方法多適用于科研院所，較少應(yīng)用于基層獸醫(yī)實驗室。血清學(xué)診斷和分子診斷技術(shù)是目前常用的方法，雖然Mccp與Mmc同屬于絲狀支原體簇成員，存在血清學(xué)交叉反應(yīng)，但隨著診斷技術(shù)的改進(jìn)，有研究人員開發(fā)出了特異性強(qiáng)、敏感性高、重復(fù)性好的血清學(xué)診斷方法。相比于血清學(xué)診斷方法，基于基因或者DNA 的分子診斷方法具有更高的特異性和敏感性，目前常用的分子診斷方法有PCR、熒光定量PCR、環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)（LAMP）和重組酶聚合酶擴(kuò)增（RPA）。

羊傳染性胸膜肺炎在我國長期存在，20世紀(jì)20年代，我國新疆伊犁地區(qū)最早發(fā)現(xiàn)此病，隨后在新疆、甘肅、西藏、四川、內(nèi)蒙古等地流行，給我國養(yǎng)羊業(yè)帶來了重大損失。攀枝花地處山區(qū)，山羊多采取放養(yǎng)的養(yǎng)殖模式，疫苗免疫率低，發(fā)病風(fēng)險高，該次試驗采用熒光定量PCR方法進(jìn)一步驗證了羊傳染性胸膜肺炎在攀枝花流行，為下一步攀枝花市羊傳染性胸膜肺炎的流行病學(xué)調(diào)查與支原體分型鑒定奠定了基礎(chǔ)。