金屬有機框架衍生單原子納米酶的合成、表征與生物應(yīng)用研究進展

王馮生 周治國

摘 ?要： 單原子催化劑（SACs）具有高原子利用效率以及高催化活性，在各種催化體系中均表現(xiàn)出優(yōu)異的性能.其原子級別的活性位點與天然的金屬蛋白酶類似，因此單原子納米酶（SAzymes）的概念也應(yīng)運而生.而金屬有機框架（MOF）由于其具有高孔隙率的特點，可以作為合成SAzymes的前驅(qū)體.該文總結(jié)了使用MOF前體/模板構(gòu)建SACs的合成策略，以及SAzymes的生物應(yīng)用，提出了基于MOF衍生的SAzymes的發(fā)展挑戰(zhàn)和前景.

關(guān)鍵詞： 單原子催化劑（SACs）; 單原子納米酶（SAzymes）; 金屬有機框架（MOF）

中圖分類號： Q 559+.3 ? ?文獻標(biāo)志碼： A ? ?文章編號： 1000-5137（2021）06-0745-09

Abstract： Due to the high utilization efficiency of atom and catalytic activity， single atom catalysts （SACs） show excellent performance in various catalytic systems. Their atomic level active sites are similar to natural metalloproteinases， so the concept of single atom nanozymes（SAzymes） came into being. With its high porosity， metal-organic-framework （MOF） can be used as a precursor for the synthesis of SAzymes. In this review， the synthesis strategies of SACs constructed by MOF precursor/template and their biological applications are summarized. Finally， the challenges and prospects for the development of monatomic nanozymes based on MOF derivatives are proposed.

Key words： single atom catalysts（SACs）; single atom nanozymes （SAzymes）; metal-organic-framework（MOF）

0 ?引 言

單原子催化劑（SACs）是具有原子分散活性位點且催化活性高的一類材料[1].但是隨著納米粒子尺寸的減小，原子的表面能增加，SACs中單個原子更容易聚集成簇，導(dǎo)致負載率較低.金屬有機框架（MOF）由于其具有納米尺寸的通道和腔體、超高的比表面積、化學(xué)可調(diào)性和結(jié)構(gòu)靈活性，而成為一類有前途的多功能材料.與其他多孔材料相比，MOF作為負載型催化劑的平臺顯示出了巨大的優(yōu)勢.MOF材料可以通過增加金屬單個原子與底物之間的相互作用來解決SACs的團簇問題，并且MOF衍生的SACs繼承了MOF的許多優(yōu)點，如高的三維孔隙率和較大的比表面積，這更有利于物質(zhì)的擴散和活性位點的充分暴露.近年來，SACs被發(fā)現(xiàn)具有和金屬蛋白酶相似的催化活性，因此SACs在納米酶方向的研究越來越深入，單原子納米酶（SAzymes）的概念應(yīng)運而生.SAzymes相比于普通的納米酶，具有更精細的結(jié)構(gòu)、更高的催化活性和選擇性.本文主要綜述了MOF衍生的SAzymes的制備方法、表征及其在生物方面的應(yīng)用.

1 ?MOF衍生SACs的制備方法

MOF材料可以通過簡單的熱處理轉(zhuǎn)化為SACs，所得的SACs通常比固定在MOF中的單原子具有更高的穩(wěn)定性，大大擴展了SACs的應(yīng)用.由于這些優(yōu)點，MOF衍生的SACs在近兩年備受關(guān)注.然而，金屬原子在高溫?zé)峤膺^程中有聚集傾向，通過在MOF中預(yù)先設(shè)計具有一定間隙的金屬中心，可以有效地抑制金屬原子的遷移，使其在熱解后形成SACs.在大多數(shù)情況下，由富含氮（N）配體構(gòu)建的MOF中含有豐富的N原子.高溫?zé)峤夂螅琈OF中的有機部分可以轉(zhuǎn)化為N摻雜的碳材料，利用金屬與N的相互作用，可以用來固定和穩(wěn)定單個金屬原子[2]，從而有助于活性中心的充分暴露，使其在催化方面具有很好的應(yīng)用前景.

1.1 金屬交換策略

金屬單原子的穩(wěn)定主要基于自下而上的策略，在此過程中，金屬前驅(qū)體被吸附和還原，并受到富缺陷載體的限制，因此SACs的制備仍然面臨挑戰(zhàn).通過選擇性地摻雜金屬，并還原剩余金屬，可以在多孔機體上直接制備SACs.YIN等[3]用鋅離子（Zn2+）代替一定比例的鈷離子（Co2+）位置，并充當(dāng)“柵欄”，進一步擴大Co原子的相鄰距離.低沸點Zn原子（熔點420 ℃，沸點907 ℃）可以在超過800 ℃的高溫下蒸發(fā)，之后原位還原Co節(jié)點，從而生成鈷單原子催化劑（Co SACs），如圖1（a）所示.混合金屬策略需要2種金屬具有相似的配位環(huán)境，通過金屬交換達到隔離金屬位點的目的，從而使單個原子穩(wěn)定地錨定在載體上.

1.2 MOF模板策略

MOF是一種備受關(guān)注的新型多孔材料.選擇孔徑比金屬前驅(qū)物直徑稍大的MOF，將金屬前驅(qū)物限制在MOF的孔中是實現(xiàn)原子分離最有效的方法之一.同時，MOF后處理后可產(chǎn)生大量的配位點，可作為金屬原子的固定位點.采用ZIF-8來分離和封裝金屬前驅(qū)體乙酰丙酮鐵（Fe（acac）3），高溫?zé)峤夂?，ZIF-8轉(zhuǎn)變?yōu)閾诫sN的多孔碳.同時，籠罩中的Fe（acac）3通過有機連接子的碳化而還原，生產(chǎn)鐵單原子催化劑（Fe SACs），如圖1（b）所示[4].

1.3 混合配體策略

MOF的周期性結(jié)構(gòu)導(dǎo)致建筑單元的空間分離，從而抑制了金屬原子在熱解過程中的團聚，使MOF成為制備SACs的理想前體.同時，ZIF-8的微孔也阻礙了傳質(zhì)和活性位點.JIAO等[5]通過調(diào)節(jié)Fe-TCPP（TCPP代表四（4-羧基苯基）卟啉）和H2-TCPP 混合配體之間的比例，提供了一系列同構(gòu)的MOF，表示為Fe20-PCN-222.熱解后，F(xiàn)e20-PCN-222可以轉(zhuǎn)換為Fe SACs，如圖1（c）所示.Fe-TCPP組裝到Fe20-PCN-222的3D網(wǎng)絡(luò)中可有效抑制分子堆積，并且混合配體策略進一步擴大了相鄰的Fe-TCPP配體的距離.通過整合單個Fe原子和具有定向介孔的分層多孔結(jié)構(gòu)，有助于促進活性位點的進入，優(yōu)化后的單原子Fe摻雜的含N多孔碳（FeSA-N-C）表現(xiàn)出了極好的氧還原活性和超高的穩(wěn)定性.

1.4 其他策略

除了上述的3種SACs的制備方法以外，人們又發(fā)展了多種制備SACs的策略，例如電化學(xué)腐蝕法[6]、電化學(xué)沉積法[7]、犧牲模板法[8]、光催化還原法[9]、熱轉(zhuǎn)化[10]策略等方法.FAN等[6]用合成的鎳（Ni）基金屬有機骨架（Ni-MOF）在氮氣（N2）氣氛中碳化，制備了包裹在石墨烯（rGO）層中的Ni納米顆粒（Ni@C），再用鹽酸去除多余的Ni金屬.然后，在其修飾的電極上施加電化學(xué)循環(huán)電位，Ni@C上的直接恒定電勢也可以激活電催化劑，在活化過程中形成了Ni單原子.ZHANG等[7]利用電化學(xué)沉積發(fā)現(xiàn)了一種制備SACs的通用途徑，通過使用標(biāo)準(zhǔn)的三電極系統(tǒng)，將氫氧化鈷納米片加載到玻璃碳電極上作為工作電極，低濃度的可溶性金屬鹽作為金屬前體添加到氫氧化鉀電解質(zhì)中，重復(fù)循環(huán)掃描后得到SACs.僅改變金屬前體和載體，就可以從陰極或陽極沉積成功地獲得30多種不同的SACs，具有一定的普適性.ZHANG等[8]在合成的羥基氧化鐵（α-FeOOH）納米棒上包裹多巴胺獲得α-FeOOH@ PDA（PDA表示聚多巴胺），退火后，聚多巴胺（PDA）層轉(zhuǎn)化為氮摻雜碳（CN）殼，而α-FeOOH被PDA層緩慢還原為Fe，通過Fe原子與CN殼之間強相互作用，制備了分散在氮摻雜碳上的Fe單原子催化劑（SA-Fe/CN）.ZHOU等[9]將富含N空位的氮化碳納米片分散在氯鉑酸（H2PtCl6）的去離子水中液氮冷凍后，用420 nm的濾光器在300 W氙燈下照射，冰層融化后生成鉑（Pt）單原子.而LIU等[10]將H2PdCl4引入兩原子厚的二氧化鈦（TiO2）納米片的水分散體中，以吸附鈀（Pd）物質(zhì)，然后將混合物用低密度紫外（UV）照射，獲得原子分散的Pd催化劑（Pd1/TiO2）.WEI等[11]將鈀納米粒子（Pd NPs）、硝酸鋅（Zn（NO3）2）溶液與2-甲基咪唑溶液混合，在Pd NPs上生長ZIF-8納米晶體，以生成Pd NPs@ZIF-8復(fù)合材料，然后將Pd NPs@ZIF-8納米復(fù)合材料在惰性氣氛下熱解.在高溫下Pd NPs會形成更大的Pd納米顆粒，但是增大的Pd納米粒子會與基板強烈碰撞，逐漸變小，最后轉(zhuǎn)變?yōu)閱蝹€原子.

1.5 MOF衍生SACs的表征

MOF衍生SACs的微觀結(jié)構(gòu)與其性能密切相關(guān).因此，確定其結(jié)構(gòu)，才能更好地了解催化劑的活性.到目前為止，各種表征技術(shù)包括像差校正的高角度環(huán)形暗場掃描透射電子顯微鏡（AC-HAADF-STEM）、X射線吸收精細結(jié)構(gòu)（XAFS）、紅外光譜（IR）等，已經(jīng)被發(fā)展并用來研究SACs的詳細微觀結(jié)構(gòu).

1.5.1 AC-HAADF-STEM

場發(fā)射電子槍發(fā)射的相干電子經(jīng)過聚焦鏡、物鏡前場及光闌，匯聚成原子尺度的電子束斑.通過線圈控制電子束斑，逐點在樣品上進行光柵掃描.連續(xù)掃描樣品的一個區(qū)域，便形成掃描透射電子顯微鏡（STEM）成像.若環(huán)形探測器接收角度進一步加大，接收到的信號主要是高角度非相干散射電子，此時得到的像為高角環(huán)形暗場像（HAADF，Z襯度像）.Z襯度像為非相干像，是原子列投影的直接成像，其分辨率主要取決于電子束斑的尺寸，因而，它比相干像具有更高的分辨率.配備的球差校正器的電鏡在200 kV電壓下，可獲得至少0.1 nm的電子束斑，同時電子束電流密度可提高10倍以上，使Z襯度像的分辨率和探測敏感度進一度提高，電鏡的分辨率進入10-10 m尺度，可以獲得單個原子的成像.AC-HAADF-STEM的出現(xiàn)使得在原子水平上識別活性位點成為可能.由于單個金屬原子的原子序數(shù)（Z值）與載體原子的Z值不同，在AC-HAADF-STEM圖像中可以很好地識別出孤立的單個金屬原子，以N摻雜多孔碳鐵單原子催化劑（Fe-SAs/NC）為例，如圖2所示[12].

1.5.2 高分辨透射電子顯微鏡（HRTEM）

高分辨透射電子顯微鏡（HRTEM）是對物質(zhì)內(nèi)部微結(jié)構(gòu)進行觀察及電子衍射分析的一種高分辨電子顯微儀器，通過與能譜儀的配合使用，可以對SACs中的各種元素進行定性、半定量，及定量的微結(jié)構(gòu)分析.

1.5.3 XAFS

XAFS的測量不僅可以證明金屬原子的原子分散性，對SACs的氧化態(tài)、配位數(shù)和配位構(gòu)型等更為詳細的信息也具有重要意義，這是深入了解SACs結(jié)構(gòu)信息的最有力的技術(shù).X射線吸收光譜（XAS）可分為擴展X射線吸收精細結(jié)構(gòu)光譜（EXAFS）和X射線吸收近邊緣光譜（XANES）.當(dāng)X射線穿過物體時，在吸收限的高能一方，吸收系數(shù)隨光子能量的增加而下降.但是假如用高分辨率譜儀進行細致的觀察，將會發(fā)現(xiàn)，在吸收限的高能一方，吸收系數(shù)隨光子能量的增加一般呈周期性的變化，把吸收限附近的一塊放大，就得到所謂的EXAFS.在XAS中，閾值之上60 eV以內(nèi)的低能區(qū)譜出現(xiàn)強的吸收特性，稱之為XANES.它是由于激發(fā)光電子經(jīng)周圍原子的多重散射造成的，XANES主要反映吸收原子的價態(tài)和一些結(jié)構(gòu)信息.

1.5.4 漫反射紅外傅里葉變換（DRIFT）光譜

研究發(fā)現(xiàn)，吸附在不同活性位上的分子總是呈現(xiàn)不同的振動頻率和振動強度.利用紅外光譜技術(shù)，可以通過監(jiān)測探針分子如一氧化碳（CO）的吸附行為來推斷金屬原子的分散狀態(tài).例如，對鋁基卟啉單原子鉑催化劑（Al-TCPP-0.1Pt）進行DRIFT光譜分析時，用Ar吹掃以去除任何松散吸附的CO，只能觀察到以2 090 cm-1為中心的峰值，該峰可歸屬于單Pt原子上化學(xué)吸附的CO振動峰，如圖3所示[13].

1.5.5 密度泛函理論（DFT）

由于量子化學(xué)理論和高性能計算技術(shù)的快速發(fā)展，基于第一性原理的理論計算已成為實驗研究結(jié)果的重要補充，理論計算結(jié)果和實驗結(jié)果相互印證，成為催化科學(xué)研究中重要的輔助手段.HUO等[14]通過單原子鐵納米催化劑（SAF NCs）非均相催化Fenton反應(yīng)的實驗結(jié)果，采用DFT計算，提出了合理的反應(yīng)機理.如圖4所示，在納米催化劑存在下，過氧化氫（H2O2）在單個Fe原子上的初始吸附顯著削弱了H2O2分子中過氧鍵（-O-O-）的結(jié)合能，導(dǎo)致了羥基自由基（·OH）容易釋放和Fe-O鍵（2.93 eV）的大能量保存.這部分難以克服的能量限制了Fenton過程后的催化反應(yīng).在酸性催化環(huán)境下，H可以通過氫鍵被·OH吸引.隨后生成的水分子（H2O）在很大程度上降低了系統(tǒng)能量（-3.67 eV），補償了Fe-O脫粘的能量屏障.結(jié)果表明，在酸性環(huán)境下，SAF NCs通過質(zhì)子介導(dǎo)的H2O2均相分解途徑，比在中性條件下具有更高的催化活性.通過DET計算結(jié)果與實驗結(jié)果相結(jié)合進行分析，有助于推測反應(yīng)機理，同樣可以對SACs的催化活性做出預(yù)判.

2 ?MOF衍生SAzymes的生物應(yīng)用

近年來，SACs除了被認為是最有希望和最有效的電化學(xué)能量轉(zhuǎn)化催化劑和化學(xué)催化劑以外，其生物方面的應(yīng)用也正在嶄露頭角.碳負載的金屬SAymes具有與自然金屬酶相似的活性位點.例如，細胞色素P450酶的活性位點包含一個單血紅素b輔因子和一個近端配體，類似于鐵基SACs中的鐵氮配位（FeN4）位點.除了單原子Fe納米酶以外，貴金屬如釕（Ru）、銠（Rh）、鈀（Pd）、銀（Ag）和銥（Ir），均可以代替Fe模擬人工P450酶的活性[15].SAzymes正在生物傳感和腫瘤治療中發(fā)揮作用.

2.1 活性氧（ROS）和N的高效清除劑

在活生物體中，氧氣（O2）涉及許多代謝過程，其中一部分會導(dǎo)致ROS的形成，引發(fā)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化，嚴重危害人體健康.人體可通過超氧化物歧化酶（SOD）將其除去.有證據(jù)表明，活性氧和氮物種（RONS）在膿毒癥的病理過程中起到了至關(guān)重要的作用.抗氧化治療是一種通過使用抗氧化劑減少過量RONS來減輕炎癥的新的藥理學(xué)方法.天然酶（如SOD和過氧化氫酶（CAT））被認為是潛在的抗氧化劑，能夠通過調(diào)節(jié)細胞內(nèi)ROS水平來保護細胞.例如，CAO等[16]制備了N摻雜的碳負載原子分散的卟啉中心（Co/PMCS），并將其用于模擬抗氧化酶以有效清除RONS，如圖5（a）所示.Co/PMCS可以模擬SOD，CAT和谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）等多種酶，有效地消除H2O2和超氧陰離子（·O2-）.同時，通過氧化還原循環(huán)有效地降低·OH.更重要的是，它們可以通過卟啉中心的協(xié)同作用清除NO.最終，在脂質(zhì)過氧化物（LPS）誘導(dǎo)的敗血癥和菌血癥中，Co/PMCS降低了過量的RONS，抑制了促炎性細胞因子的產(chǎn)生，使感染小鼠具有明顯的生存優(yōu)勢，如圖5（b）所示，這些結(jié)果表明，SAzymes是一種很有前途的抗氧化劑.

2.2 生物傳感器

SACs由于其最大原子利用率的獨特性，為提高納米酶的催化活性提供了潛在的途徑.NIU等[17]制備的氮摻雜多孔碳鐵單原子納米酶（Fe-NCSAzymes），表現(xiàn)出了前所未有的過氧化物酶模擬活性，甚至可以與天然HRP相媲美.CHEN等[18]通過化學(xué)摻雜方法合成了雙金屬鐵鋅沸石咪唑酯骨架（Fe-Zn ZIF），熱解后得到的氮摻雜多孔碳鐵單原子納米酶（Fe-N/CSAzymes），通過新型比色測定法，成功證明該材料可與2-磷酸抗壞血酸偶聯(lián)，并靈敏地感測堿性磷酸酶（ALP）活性.CHENG等[19]提出了一種基于單個Fe原子的新單原子納米酶（SAN），該單原子錨定在碳納米管負載的N摻雜碳（CNT/FeNC）上.憑借出色的類過氧化物酶活性，碳納米管單原子鐵納米酶（CNT/FeSAN）納米酶已被用于超靈敏檢測，可以用于H2O2、葡萄糖的超靈敏檢測.WU等[20]通過金屬鹽、氨基葡萄糖和二氧化硅（SiO2）模板混合物的熱解制備了氮摻雜碳鐵單原子納米催化劑（Fe-N-C SACs），具有類氧化酶活性.通過單個Fe活性位，F(xiàn)e-N-C SA酶可以將O2活化為·O2-.氮摻雜碳鐵單原子納米酶（Fe-N-C SAzymes）可以引起一些變色反應(yīng)，研究發(fā)現(xiàn)這種巰基分子可以與Fe-N-C SAzymes結(jié)合，并且可以抑制納米酶的活性.在這個基礎(chǔ)上，制造了一種基于Fe-N-C SAzymes的生物傳感器，用來評估乙酰膽堿酯酶（AChE）的活性.KIM等[21]通過精心模擬天然過氧化物酶的活性位點結(jié)構(gòu)，設(shè)計和合成了類似于鐵氮配位（Fe-N4）單位嵌入rGO的血紅素輔因子（Fe-N-rGO），F(xiàn)e-N-rGO具有過氧化物酶特性.將Fe-N4位點嵌入rGO可選擇性地增加類似過氧化物酶活性.基于Fe-N-rGO的生物測定法，可檢測人血中的乙酰膽堿和人類癌細胞釋放的H2O2.JIAO等[22]使用氯化亞鐵（FeCl2）、葡萄糖和雙氰胺為前體制備了具有內(nèi)在類似過氧化物酶活性的Fe-N-C SAzymes，原子分散的Fe-N中心位點與天然HRP類似，可以特異性增強類似過氧化物酶活性，拓展了Fe-N-C SAymes在細胞內(nèi)生物傳感中的應(yīng)用.WU等[23]在N摻雜的碳納米片表面合成了高濃度孤立銅（Cu）原子的氮摻雜碳納米片銅單原子納米酶（Cu-N-C），表現(xiàn)出類過氧化物酶活性，將Cu-N-C SAzymes與天然AChE和膽堿氧化酶相結(jié)合，構(gòu)建了AChE比色檢測系統(tǒng)，可以用于乙酰膽堿和有機磷農(nóng)藥的比色檢測.

2.3 腫瘤治療

眾所周知，含F(xiàn)e催化劑可以通過Fenton反應(yīng)產(chǎn)生大量有毒的·OH，從而引起細胞凋亡和抑制腫瘤.HUO等[24]以沸石咪唑鹽骨架和Fe（acac）3為前驅(qū)物制備了Fe-N-C SACs，可以使用H2O2作為腫瘤治療的底物來催化Fenton反應(yīng)，如圖6所示.為了確保腫瘤治療功效并提高催化效率，將Fe催化劑活性位點降至原子級別.在酸性腫瘤微環(huán)境（TME）下，該單原子Fe納米酶可以有效地觸發(fā)原位腫瘤特異性Fenton反應(yīng)，選擇性地產(chǎn)生大量有毒的·OH，導(dǎo)致惡性腫瘤的凋亡并且誘導(dǎo)LPS的積累，引起腫瘤細胞肥大病，從而產(chǎn)生協(xié)同抑制腫瘤的效果.

WANG等[25]使用SAzymes用于增強光動力療法來治療腫瘤.通過使用MOF作為載體，將單原子釕（Ru）摻入骨架中，再用具有生物相容性的材料包裹的有機配體、金屬離子二氫卟吩（Ce6）光敏劑可自組裝成單原子酶（OxgeMCC-rSAE）.單原子酶使H2O2快速分解，減輕實體瘤的缺氧狀況，增加ROS產(chǎn)生，并引起細胞凋亡.WANG等[26]合成了富含卟啉樣單原子Fe（III）中心的金屬有機骨架（P-MOF），在近紅外光（NIR）下，P-MOF中Fe（Ⅲ）的自旋狀態(tài)的轉(zhuǎn)換將促進單線態(tài)氧（1O2）的生成，增加癌癥光療的效果.SAzymes作為無機納米材料具有獨特的理化性質(zhì)，同時隨著納米技術(shù)的不斷發(fā)展，可以更加精細地調(diào)控其尺寸和表面修飾，從而對其酶活性進行調(diào)控.

2.4 抗 菌

SAymes還具有相當(dāng)大的抗菌潛力.XU等[27]制備了ZIF-8衍生的單原子鋅（Zn）碳納米球，具有出色的類似過氧化物酶活性，抑制銅綠假單胞菌的生長率高達99.87%，并能顯著促進傷口愈合.該酶的高過氧化物酶類活性可歸因于配位不飽和的鋅氮配位（Zn-N4）位點，其促進了H2O2的分解和·OH的形成，對細菌造成氧化損傷.HUO等[28]制備了N摻雜碳中單個Fe原子的納米催化劑（SAF NCs），與其他含F(xiàn)e的納米過氧化物酶一樣，可產(chǎn)生大量的·OH來殺死細菌，對于革蘭氏陰性大腸桿菌和革蘭氏陽性金黃色葡萄球菌細胞均表現(xiàn)出優(yōu)異的抗菌性能.

3 ?結(jié)論與展望

納米酶正在快速發(fā)展，與天然酶相比，納米酶具有明顯的優(yōu)勢，包括低成本，遇到熱、酸、堿等非生理條件時，不易失活，易于擴展等出色的性能.因此，納米酶已廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)、生物傳感等方面.然而，納米酶的復(fù)雜結(jié)構(gòu)和組成意味著難以在原子尺度上研究催化活性位點，并且難以深入了解生物催化的本質(zhì).具有原子活性位點的SAzymes有利于探測結(jié)構(gòu)與活性位點之間的關(guān)系，并可能進一步發(fā)展更優(yōu)異的納米酶.盡管SAzymes在合成、表征和機理研究方面取得了許多突破，但是作為一個新興研究方向，仍有很長的路要走.希望在原子尺度上設(shè)計合理、先進的納米酶，并探索其在適用領(lǐng)域的高性能生物催化作用.

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（責(zé)任編輯：郁慧，顧浩然）