相德才 張斌 韓敏 劉韶娜 趙智勇 吳國(guó)權(quán)

摘要：【目的】從分子遺傳學(xué)角度分析不同基因型迪慶藏豬群體不同組織中ADFP基因的表達(dá)差異，為迪慶藏豬的選育工作提供參考依據(jù)?！痉椒ā坷肞CR擴(kuò)增測(cè)序方法對(duì)113頭迪慶藏豬ADFP基因進(jìn)行擴(kuò)增測(cè)序，利用DNASTAR 5.0對(duì)序列進(jìn)行比對(duì)分析及多態(tài)性位點(diǎn)（SNPs）檢測(cè);同時(shí)利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對(duì)迪慶藏豬不同組織中ADFP基因相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)，并運(yùn)用SPSS 20.0分析ADFP基因多態(tài)性對(duì)迪慶藏豬群體不同組織中ADFP基因表達(dá)水平的影響?！窘Y(jié)果】在迪慶藏豬ADFP基因外顯子6上發(fā)現(xiàn)3個(gè)SNPs，分別為SNP1（C→T）、SNP2（C→T）和SNP3（T→C），其中SNP1和SNP2位點(diǎn)屬于低度多態(tài)（PIC/He<0.25），SNP3位點(diǎn)屬于中度多態(tài)（0.25<PIC/He<0.5）。迪慶藏豬不同組織中ADFP基因相對(duì)表達(dá)量存在顯著差異（P<0.05，下同），皮下脂肪中相對(duì)表達(dá)量最高，其次為肺臟、肝臟、脾臟、腎臟、腿肌和背肌，心臟中相對(duì)表達(dá)量最少;另外，ADFP基因SNPs不同基因型迪慶藏豬群體中各組織的相對(duì)表達(dá)量也存在顯著差異，尤其在SNP2位點(diǎn)雜合基因型群體腎臟中相對(duì)表達(dá)量顯著高于純合基因型群體腎臟中相對(duì)表達(dá)量，表明ADFP基因SNPs變異對(duì)迪慶藏豬組織中ADFP基因表達(dá)具有影響?！窘Y(jié)論】ADFP基因SNPs變異對(duì)迪慶藏豬組織中ADFP基因會(huì)產(chǎn)生差異表達(dá)，進(jìn)而影響機(jī)體脂肪沉積，ADFP基因可作為迪慶藏豬肌內(nèi)脂肪沉積的候選基因。

關(guān)鍵詞：迪慶藏豬;ADFP基因;多態(tài)性;脂肪沉積

中圖分類號(hào)：S828.89? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2021）10-2872-08

Abstract：【Objective】This study aimed to analyze the expression difference of ADFP gene in different tissues of Diqing Tibetan pig with different genotypes from the perspective of molecular genetics， so as to provide a reference for breeding of Diqing Tibetan pig. 【Method】In this study， the ADFP gene of 113 Diqing Tibetan pigs were amplified using PCR and sequenced， and the sequence alignment and the polymorphic sites（SNPs） were detected with DNASTAR 5.0. Meanwhile， the real-time fluorescence quantitative PCR（qPCR） was used to detect the relative expression of the ADFP gene in tissues of Diqing Tibetan pigs， and the SPSS 20.0 was used to analyze the effect of ADFP gene polymorphism on its expression in the tissues of Diqing Tibetan pigs. 【Result】Three SNP1（C→T）， SNP2（C→T） and SNP3（T→C） were found on exon 6 of ADFP gene in Diqing Tibetan pig， and SNP1 and SNP2 were low polymorphic（PIC/He<0.25） and SNP3 was moderate polymorphic（0.25<PIC/He<0.5）. There were significant differences in the relative expression levels of ADFP gene in different tissues of Diqing Tibetan pigs（P<0.05， the same below）. Subcutaneous fat had the highest relative expression level， followed by lung， liver， spleen， kidney， leg muscle and back muscle， heart had the lowest expression level. In addition， there were also significant differences in the relative expression levels of ADFP gene polymorphisms among different genotypes in the Diqing Tibetan pig. Especially， the relative expression of the gene in the heterozygous genotype groups at SNP2 was significantly higher than that in the homozygous genotype groups， the results showed that the polymorphisms of ADFP gene had an effect on the expression of ADFP gene in tissues of Diqing Tibetan pig. 【Conclusion】The difference of ADFP gene polymorphism sites can cause differential expression of ADFP gene in tissues of Diqing Tibetan pig， and then affect fat deposition in the body， ADFP gene can be used as a candidate gene for fat deposition in Diqing Tibetan pig。

Key words： Diqing Tibentan pig;ADFP gene;polymorphism;fat deposition

Foundation item：Major Science and Technology Project of Yunnan （202102AE090039）;Yunnan Applied Basic Research Project（2017FD055，2018FD001）;Yunnan Animal Science and Veterinary Institute Applied Basic Research Project（2019RW008）

0 引言

【研究意義】脂肪沉積受肌肉中脂肪細(xì)胞數(shù)量或脂肪細(xì)胞沉積速度的影響，其中，脂肪分化相關(guān)蛋白（Adipose differentiation-related protein，ADFP）可能是脂肪沉積性狀的候選基因（Desruisseaux et al.，2007）。豬ADFP基因由8個(gè)外顯子組成，全長(zhǎng)約13 kb，位于1號(hào)染色體q2.3～q2.7上、微衛(wèi)星標(biāo)記SW2185和SW974之間（Nie et al.，2005）。豬ADFP基因cDNA（1848 bp）含有一個(gè)1377 bp的開(kāi)放閱讀框，編碼一個(gè)由459個(gè)氨基酸組成的蛋白（Kim et al.，2005）。脂肪分化相關(guān)蛋白（ADFP）覆蓋在磷脂蛋白脂滴表面，其參與巨噬細(xì)胞的脂質(zhì)代謝（Wang et al. 1999），可上調(diào)脂肪酸的生成（Imamura et al.，2002），同時(shí)參與脂質(zhì)轉(zhuǎn)移（Schultz et al.，2002），促進(jìn)脂滴的形成并儲(chǔ)存脂肪酸（Listenberger et al.，2007）。因此，研究與肌內(nèi)脂肪沉積相關(guān)的候選基因及其分子機(jī)制已成為合理提高肌內(nèi)脂肪含量的重要方向?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】ADFP基因的遺傳變異可能與背脂厚度（BF）和肌內(nèi)脂肪（IMF）性狀的表型變異有關(guān)（Imamura et al.，2002），奶山羊ADFP基因過(guò)表達(dá)也會(huì)顯著促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞中的脂質(zhì)積累（余康，2014）;ADFP基因在地方雞不同組織的表達(dá)量變化在脂肪沉積過(guò)程中發(fā)揮調(diào)控作用（張斌等，2016;相德才等，2017;Li et al.，2018）。奶牛ADFP基因超表達(dá)會(huì)促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞中脂滴含量的顯著增加（龐坤等，2019）。大量相關(guān)研究表明，ADFP基因與肌內(nèi)脂肪沉積有關(guān)，可將ADFP基因作為調(diào)控豬肌內(nèi)脂肪沉積的一個(gè)候選基因。Kim等（2005）研究發(fā)現(xiàn)ADFP基因可作為豬肌內(nèi)脂肪沉積和大理石紋特征的候選基因。ADFP基因多態(tài)性與酮體性狀具有相關(guān)性，且ADFP基因表達(dá)量在脂肪含量較高的組織中呈升高趨勢(shì)（Davoli et al.，2010）。顧麗菊等（2016）研究表明ADFP基因在地方豬不同組織中的差異表達(dá)與脂肪沉積有關(guān)。Cui等（2016）研究3個(gè)豬品種肌肉中ADFP基因相對(duì)表達(dá)量時(shí)，發(fā)現(xiàn)ADFP基因在豬的脂肪沉積和調(diào)節(jié)中存在相關(guān)性。Zhao等（2020）發(fā)現(xiàn)ADFP基因表達(dá)水平差異與豬肌內(nèi)脂肪含量高低有關(guān)?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】迪慶藏豬為云南地方良種，屬于典型的高原藏豬種，具有抗逆性強(qiáng)、耐高寒、耐缺氧、耐粗飼、瘦肉率高及肉鮮嫩等優(yōu)點(diǎn)，且香味特殊、營(yíng)養(yǎng)豐富（國(guó)家畜禽資源委員會(huì)，2011）。肌內(nèi)脂肪（Intramuscular fat， IMF）含量是評(píng)價(jià)豬肉品質(zhì)的一個(gè)重要指標(biāo)，與肉的嫩度、含水量和口感呈正相關(guān)（Wood et al.，2004;Lu et al.，2008;Hausman et al.，2009），但至今有關(guān)ADFP基因調(diào)控迪慶藏豬肌內(nèi)脂肪沉積過(guò)程及脂肪沉積遺傳規(guī)律的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】利用PCR擴(kuò)增測(cè)序和實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析ADFP基因多態(tài)性變化對(duì)ADFP基因在迪慶藏豬各組織中相對(duì)表達(dá)量的影響，從分子遺傳學(xué)方面闡述迪慶藏豬不同基因型在不同組織中脂肪沉積過(guò)程中的影響，為建立迪慶藏豬的分子標(biāo)記篩選和分子標(biāo)記輔助育種提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料的采集和保存

隨機(jī)挑選6月齡的迪慶藏豬共113頭，采集耳組織，置于裝有75%酒精的凍存管中，-70 ℃保存。挑選其中13頭迪慶藏豬進(jìn)行屠宰試驗(yàn)，采集其心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腿肌、胸肌和皮下脂肪等組織樣品，立即置于裝有RNA Save液的凍存管中，-70 ℃保存。

1. 2 基因組DNA的提取、擴(kuò)增及多態(tài)性檢測(cè)

1. 2. 1 基因組DNA提取 使用組織/血液基因組DNA提取試劑盒提取迪慶藏豬耳組織DNA，提取步驟參見(jiàn)試劑盒說(shuō)明書(shū)，1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA提取效果。

1. 2. 2 引物設(shè)計(jì) 利用Primer Premier 5.0，參考GenBank已發(fā)布的豬ADFP全基因序列（NC_010443.5），對(duì)迪慶藏豬ADFP基因設(shè)計(jì)1對(duì)特異性引物（F：5'-CCCTATCTCCCCATGAAAATATGC-3';R：5'-CAGT GGTGTTCTAGAAGCTAAGAG-3'），目的片段為1262 bp，委托英濰捷基（上海）貿(mào)易有限公司合成。

1. 2. 3 PCR擴(kuò)增及測(cè)序 使用Master Mix試劑對(duì)113頭迪慶藏豬耳組織DNA樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增，25.0 μL擴(kuò)增體系：Master Mix 12.5 μL，10 μmol/L上、下游引物各1.0 μL，DNA模板（約50 ng）2.0 μL，補(bǔ)ddH2O至25.0 μL。擴(kuò)增反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性3 min;94 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 45 s，進(jìn)行40個(gè)循環(huán);72 ℃延伸7 min;4 ℃保存。使用1.5%瓊脂糖凝膠電泳對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)合格后送至中美泰和生物技術(shù)（北京）有限公司進(jìn)行單向（正向）測(cè)序。

1. 2. 4 多態(tài)性位點(diǎn)（SNPs）檢測(cè)及遺傳分析 使用DNASTAR 5.0進(jìn)行序列比對(duì)檢測(cè)SNPs，SeqMan軟件分析SNPs。參考張斌等（2020）的方法計(jì)算：多態(tài)性（SNP）位點(diǎn)的基因型頻率Xa=（2Naa+Nab）/2N，式中，Xa為等位基因a的頻率，Naa為基因型aa的個(gè)體數(shù)，Nab為基因型ab的個(gè)體數(shù)，N為個(gè)體總數(shù);等位基因頻率Xaa=Naa/N，式中，Xaa為基因型aa的頻率，Naa為基因型aa的個(gè)體數(shù)，N為總的個(gè)體數(shù);雜合度He=1-Σ（Pi）2，式中，Pi表示某群體第i個(gè)等位基因的基因頻率;多態(tài)信息含量PIC=1?[i=1nP2i?i=1n=1j=i+1n2P2iP2j]，式中，Pi和Pj分別表示第i和第j個(gè)等位基因在群體中的頻率，n為等位基因數(shù)。

1. 3 基因表達(dá)量檢測(cè)

1. 3. 1 總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄 總RNA提取采用天根TRNzol-A+總RNA試劑直接從組織中提取總RNA。利用超微量核酸蛋白分析儀檢測(cè)RNA純度（OD260/OD280=1.8～2.0）。使用天根FastQuant cDNA第一鏈合成試劑盒中的反轉(zhuǎn)錄試劑合成cDNA，反應(yīng)條件參見(jiàn)試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1. 3. 2 引物設(shè)計(jì) 利用Primer Premier 5.0針對(duì)目的基因ADFP（XM_005660075.3）mRNA區(qū)域設(shè)計(jì)了1對(duì)引物，內(nèi)參基因GAPDH（NM_205518.1）基因引物參考前人已發(fā)表的引物（張斌等，2020）（表1）。

1. 3. 3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 使用SuperReal PreMix Plus（SYBR Green）試劑盒進(jìn)行熒光實(shí)時(shí)定量PCR試驗(yàn)，優(yōu)化后的反應(yīng)體系（20.0 μL）： 2×SuperReal PreMix 10.0 μL，上、下游引物（10 μmol/L）各0.6 μL;cDNA 1.0 μL;補(bǔ)ddH2O至20.0 μL。每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)重復(fù)。定量擴(kuò)增條件：95 ℃ 3 s;60 ℃ 30 s;72 ℃ 20 s，循環(huán)40次，最后增加熔解曲線。

1. 4 統(tǒng)計(jì)分析

使用Excel 2010計(jì)算各樣品Ct值，利用2-ΔΔCt法進(jìn)行相對(duì)定量分析。運(yùn)用SPSS 20.0完成目的基因相對(duì)表達(dá)量間的多重比較（Duncan法）。

2 結(jié)果與分析

2. 1 迪慶藏豬ADFP基因PCR擴(kuò)增及序列分析結(jié)果

迪慶藏豬ADFP基因目的片段PCR擴(kuò)增結(jié)果如圖1，擴(kuò)增產(chǎn)物無(wú)非特異性擴(kuò)增。且擴(kuò)增片段與引物設(shè)計(jì)片段大小一致。

對(duì)113份PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序分析，測(cè)序結(jié)果與GenBank已公布的豬ADFP基因序列一致。在測(cè)序序列中發(fā)現(xiàn)3個(gè)SNPs（SNP1、SNP2和SNP3），均位于外顯子6上，均只存在2種基因型（圖2），分別是SNP1（C→T）、SNP2（C→T）和SNP3（T→C）。

2. 2 迪慶藏豬ADFP基因SNPs位點(diǎn)的遺傳分布情況

由表2可知，在迪慶藏豬群體中，ADFP基因SNP1、SNP2和SNP3位點(diǎn)的優(yōu)勢(shì)基因型分別為CC型（0.70）、CC型（0.85）和CT型（0.74），優(yōu)勢(shì)等位基因分別為C（0.88）、C（0.92）和T（0.63）。通過(guò)計(jì)算各SNPs位點(diǎn)的He和PIC，發(fā)現(xiàn)迪慶藏豬群體中SNP1和SNP2位點(diǎn)屬于低度多態(tài)（PIC/He<0.25），而SNP3位點(diǎn)屬于中度多態(tài)（0.25<PIC/He<0.5），說(shuō)明迪慶藏豬ADFP基因SNP1和SNP2位點(diǎn)自然選擇和人工選擇程度較大，而SNP3位點(diǎn)自然選擇和人工選擇程度較小。

2. 3 迪慶藏豬不同組織中ADFP基因的相對(duì)表達(dá)量

對(duì)13頭迪慶藏豬不同組織樣品進(jìn)行目的基因和內(nèi)參基因相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)，通過(guò)觀察熔解曲線（圖3）可看出，目的基因和內(nèi)參基因的實(shí)時(shí)熒光定量PCR熔解曲線單一，沒(méi)有產(chǎn)生引物二聚體和非特異性產(chǎn)物，說(shuō)明2個(gè)基因的實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增效果良好。

以編號(hào)892迪慶藏豬心臟組織中ADFP基因Ct值的平均值為對(duì)照，計(jì)算其余迪慶藏豬各組織中ADFP基因的相對(duì)表達(dá)量。由圖4可知，ADFP基因在迪慶藏豬心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、背肌、腿肌和皮下脂肪等組織均有表達(dá)，皮下脂肪中ADFP基因的相對(duì)表達(dá)量顯著高于其他組織中ADFP基因的相對(duì)表達(dá)量（P<0.05，下同），肺臟中ADFP基因的相對(duì)表達(dá)量顯著高于心臟、背肌和腿肌中ADFP基因的相對(duì)表達(dá)量。

2. 4 不同基因型對(duì)迪慶藏豬群體中ADFP基因表達(dá)的影響

由圖5可知，在13頭迪慶藏豬3個(gè)SNPs位點(diǎn)純合和雜合群體中，皮下脂肪中ADFP基因相對(duì)表達(dá)量都是最高的，且顯著高于其他組織中ADFP基因相對(duì)表達(dá)量。如圖5-A所示，在迪慶藏豬SNP1位點(diǎn)純合（CC）群體中，肝臟和肺臟中ADFP基因相對(duì)表達(dá)量顯著高于心臟、背肌和腿肌中ADFP基因相對(duì)表達(dá)量;在雜合（CT）群體中，肝臟和肺臟中ADFP基因相對(duì)表達(dá)量顯著高于心臟、背肌和腿肌中ADFP基因相對(duì)表達(dá)量。如圖5-B所示，在迪慶藏豬SNP2位點(diǎn)純合（CC）群體中，肝臟和肺臟中ADFP基因相對(duì)表達(dá)量顯著高于其他組織（除皮下脂肪）中ADFP基因相對(duì)表達(dá)量;在雜合（CT）群體中，肝臟和腎臟中ADFP基因相對(duì)表達(dá)量顯著高于心臟、脾臟、肺臟、背肌和腿肌中ADFP基因相對(duì)表達(dá)量。在迪慶藏豬SNP3位點(diǎn)純合（CC）群體中，ADFP相對(duì)表達(dá)量趨勢(shì)與SNP2位點(diǎn)純合（TT）群體中表達(dá)量趨勢(shì)相同;在雜合（CT）群體中，肺臟和腎臟中ADFP基因相對(duì)表達(dá)量顯著高于其他組織（除皮下脂肪）中ADFP基因相對(duì)表達(dá)量。

迪慶藏豬不同基因型群體不同組織中ADFP基因相對(duì)表達(dá)量如圖6所示。由圖6-A和圖6-C可知，在迪慶藏豬SNP1和SNP3位點(diǎn)不同基因型群體中，ADFP基因相對(duì)表達(dá)量在純合基因型群體和雜合基因型群體各組織中均無(wú)顯著差異（P>0.05，下同）。由圖6-B可知，在迪慶藏豬SNP2位點(diǎn)不同基因型群體中，雜合基因型群體腎臟中ADFP基因相對(duì)表達(dá)量顯著高于純合基因型群體腎臟中ADFP基因相對(duì)表達(dá)量，在2個(gè)基因型群體其他組織中ADFP基因相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著差異。

3 討論

在許多不同類型的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，細(xì)胞內(nèi)的中性脂質(zhì)儲(chǔ)存在由三酰基甘油和膽固醇酯核心組成的離散脂滴中（Brasaemle et al.，1997）。ADFP是一種脂滴相關(guān)蛋白，最初在脂肪分化早期時(shí)作為誘導(dǎo)蛋白被發(fā)現(xiàn)。Kim等（2005）研究發(fā)現(xiàn)在多個(gè)豬種中ADFP基因均存在多態(tài)性，并推測(cè)ADFP可能是豬脂肪沉積的候選基因。趙雪蓮（2005）克隆獲得梅山豬第4、第5和第7內(nèi)含子序列，在與韓國(guó)本土豬ADFP基因結(jié)構(gòu)比較時(shí)發(fā)現(xiàn)，梅山豬在第4內(nèi)含子和第7內(nèi)含子上均發(fā)生了SINE缺失。顧麗菊等（2015）在2個(gè)豬種ADFP基因中篩查到5個(gè)SNPs，其引起ADFP基因mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)、編碼蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)及三級(jí)結(jié)構(gòu)變化。本研究對(duì)迪慶藏豬ADFP基因進(jìn)行了多態(tài)性檢測(cè)，在第6外顯子上檢測(cè)出3個(gè)SNPs位點(diǎn)，分別是SNP1（C→T）、SNP2（C→T）和SNP3（T→C），針對(duì)不同基因型的迪慶藏豬群體進(jìn)行了不同組織中ADFP基因相對(duì)表達(dá)量分析。

脂肪沉積過(guò)程中ADFP基因主要調(diào)控甘油三酯的形成，所以不同組織中ADFP基因表達(dá)水平也可從另一個(gè)方面反映該組織脂肪沉積潛力。已有研究表明，在大多數(shù)的脂質(zhì)聚集細(xì)胞中均發(fā)現(xiàn)了ADFP表達(dá)（Mishra et al.，2004），且ADFP表達(dá)是脂質(zhì)聚集的標(biāo)志（Jiang et al.，1992）。ADFP基因在畜禽不同組織中均有表達(dá)，不同組織中也存在差異表達(dá)（崔景香，2011;Xiang et al.，2017;Li et al.，2018;Zhang et al.，2019）。ADFP表達(dá)水平可調(diào)控多種細(xì)胞內(nèi)的脂肪含量，ADFP基因過(guò)表達(dá)或欠表達(dá)能增加或降低細(xì)胞內(nèi)脂肪含量（Chang et al.，2006）。趙雪蓮（2005）利用半定量RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)ADFP基因在梅山豬腦和脂肪組織中的表達(dá)量最高，其次為睪丸、肝臟、心臟、脾臟、腸和肌肉組織，在腎臟中的表達(dá)量最低。顧麗菊等（2016）研究發(fā)現(xiàn)ADRP基因在地方豬不同組織中均有表達(dá)，且不同組織中的差異表達(dá)可能與脂肪沉積有關(guān)。本研究利于實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)迪慶藏豬不同組織中ADFP基因表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)在8種組織中均有表達(dá)且存在一定差異，在皮下脂肪中的表達(dá)量最高，具體表現(xiàn)為皮下脂肪>肺臟>肝臟>脾臟>腎臟>腿肌>背肌>心臟，與前人研究結(jié)果存在一些差異。ADFP基因在豬前體脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中起到促進(jìn)作用，同時(shí)與脂滴的形成相關(guān)，能上調(diào)脂滴的含量（趙永艷，2014）。Davoli等（2010）研究表明意大利杜洛克豬ADFP基因多態(tài)性與酮體性狀具有相關(guān)性，且肌間脂肪含量較高的豬ADFP基因表達(dá)水平較高。Zhao等（2020）研究發(fā)現(xiàn)ADFP基因在肌內(nèi)脂肪含量較高的組織中表達(dá)量比在肌內(nèi)脂肪含量較低的組織中表達(dá)量高，且存在顯著性差異，說(shuō)明ADFP基因可能與豬肌內(nèi)脂肪含量高低有關(guān)。本研究分析了ADFP基因多態(tài)性在不同迪慶藏豬群體中對(duì)ADFP基因相對(duì)表達(dá)量的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同基因型迪慶藏豬ADFP基因在不同組織中也存在顯著差異表達(dá);另外，ADFP基因在SNP2位點(diǎn)雜合群體腎臟中相對(duì)表達(dá)量顯著高于純合群體腎臟中相對(duì)表達(dá)量，表明ADFP基因SNPs變異對(duì)迪慶藏豬組織中ADFP基因表達(dá)具有影響。

4 結(jié)論

ADFP基因在迪慶藏豬不同組織中均有表達(dá)，并存在差異表達(dá)。ADFP基因SNPs變異對(duì)迪慶藏豬組織中ADFP基因表達(dá)會(huì)產(chǎn)生差異表達(dá)，進(jìn)而影響機(jī)體脂肪沉積，SNP2位點(diǎn)可作為迪慶藏豬選育工作的一個(gè)分子遺傳標(biāo)記。

參考文獻(xiàn)：

崔景香. 2011. 豬肌內(nèi)脂肪沉積相關(guān)基因的mRNA表達(dá)及功能分析[D]. 泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué). [Cui J X. 2011. Intramuscular fat deposition related genes mRNA expression and functional analysis in pigs[D]. Tai’an：Shandong Agricultural University.]

國(guó)家畜禽遺傳資源委員會(huì). 2011. 中國(guó)畜禽遺傳資源志 豬志[M]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社：364-368. [China National Commission of Animal Genetic Resources. 2011. Animal genetic resources in China（pigs）[M]. Beijing：China Agriculture Press：364-368.]

顧麗菊，任麗群，燕志宏，張依裕，宋高翔，田松軍，劉華鈞，楊秀江，楊通斌. 2015. 宗地花豬和從江香豬ADRP基因多態(tài)性及生物信息學(xué)分析[J]. 基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，34（11）：2395-2401. [Gu L J， Ren L Q， Yan Z H， Zhang Y Y， Song G X， Tian S J， Liu H J， Yang X J， Yang T B. 2015. Ploymorphism and bioinformatics analysis of ADRP gene in pigs of Zongdihua and Congjiangxiang[J]. Geno-mics and Applied Biology，34（11）：2395-2401.] doi：10. 13417/ j.gab.034.002395.

顧麗菊，燕志宏，林鵬飛，任麗群，李平，田松軍，魏小紅，張蕓. 2016. ADRP基因在宗地花豬及其雜交豬不同組織中的表達(dá)分析[J]. 基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，35（8）：1939-1943. [Gu L J， Yan Z H， Lin P F， Ren L Q， Li P， Tian S J， Wei X H， Zhang Y. 2016. Expression analysis of ADRP gene in different tissues from Zongdihua pig and bi-crossbreeding pig[J]. Genomics and Applied Biology，35（8）：1939-1943.] doi：10.13417/j.gab.035.001939.

龐坤，朱松波，常磊，孫婭莉，韓立強(qiáng). 2019. 奶牛ADRP基因超表達(dá)細(xì)胞株的建立及對(duì)細(xì)胞脂滴的影響[J]. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，39（8）：1604-1608. [Pang K， Zhu S B，Chang L，Sun Y L，Han L Q. 2019. Establishment of bovine ADRP overexpression cell line and its effect on lipid droplet[J]. Chinese Journal of Veterinary Science，39（8）：1604-1608.] doi：10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.08.30.

相德才，趙智勇，張斌，饒軍，覃興合，李晶. 2017. 鹽津?yàn)豕请uADFP、FATP1和ApoB基因表達(dá)量變化及其與脂肪性狀的相關(guān)分析[J]. 中國(guó)畜牧雜志，53（9）：33-37. [Xiang D C，Zhao Z Y，Zhang B，Rao J，Qin X H，Li J. 2017. Expression of ADFP，F(xiàn)ATP1，ApoB and correlation analysis of relative quantity and fat depositionin Yanjin Black-bone chicken[J]. Chinese Journal of Animal Science，53（9）：33-37.] doi：10.19556/j.0258-7033.2017-09-033.

余康. 2014. 奶山羊ADRP基因?qū)MEC脂滴的影響及其分子機(jī)制的初步研究[D]. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué). [Yu K. 2014. Effects of ADRP gene of Dairy goat to lipid droplets in GMEC（goat mammary gland epithelial cells） and its preliminary molecular mechanism exploration[D]. Yang-ling： Northwest A&F University.]

張斌，韓敏，相德才，劉韶娜，沙茜，張桂生，趙智勇，趙彥光. 2020. 滇陸豬Nramp1基因多態(tài)性對(duì)其在組織中表達(dá)的影響[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，51（1）：202-208. [Zhang B，Han M，Xiang D C，Liu S N，Sha Q，Zhang G S，Zhao Z Y，Zhao Y G. 2020. Effects of Nramp1 gene polymorphism on its expression in the tissues of Dianlu pig[J]. Journal of Southern Agriculture，51（1）：202-208.] doi：10.3969/j.issn.2095-1191.2020.01.026.

張斌，趙智勇，相德才，王啟華，段天才，王傳禹，張興旺，李晶. 2016. 武定雞APOB、ADFP、FATP1基因表達(dá)量變化及其與脂肪沉積的相關(guān)性[J]. 中國(guó)家禽，38（24）：11-17. [Zhang B，Zhao Z Y，Xiang D C，Wang Q H，Duan T C，Wang C Y，Zhang X W，Li J. 2016. Correlation analysis on expression of ADFP， FATP1 and APOB genes and fat deposition in Wuding chicken[J]. China Poultry，38（24）：11-17.] doi：10.16372/j.issn.1004-6364.2016.24.003.

趙雪蓮. 2005. 豬ADFP基因的克隆、染色體定位及其生物學(xué)功能研究[D]. 武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué). [Zhao X L. 2005. Cloning， chromosome mapping and study on the functions of pig ADFP gene[D]. Wuhan： Huazhong Agricultural University.]

趙永艷. 2014. 脂肪分化相關(guān)蛋白（ADRP）基因?qū)ωiIMF含量影響的研究[D]. 南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué). [Zhao Y Y. 2014. Study on the effect of adipose differention related proten gene of porcine IMF content[D]. Nanjing： Nanjing Agricultural University.]

Brasaemle D L，Barber T，Wolins N E，Serrero G，Blanchette-Mackie E J，Londos C. 1997. Adipose differentiation-related protein in an ubiquitously expressed lipid storage droplet-associated protein[J]. Journal of Lipid Research，38（11）：2249-2263. doi：10.1016/S0022-2275（20）34939-7.

Chang H J，Li L，Paul A，Taniguchi S，Nannegari V，Heird W C，Chan L. 2006. Protection against fatty liver but normal adipogenesis in mice lacking adipose differentiation-related protein[J]. Molecular and Cellular Biology，26（3）：1063-1076. doi：10.1128/MCB.26.3.1063-1076.2006.

Cui J X，Chen W，Liu J，Xu T，Zeng Y Q. 2016. Study on quantitative expression of PPARγ and ADRP in muscle and its association with intramuscular fat deposition of pig[J]. SpringerPlus，5：1501. doi：10.1186/s40064-016-3187-0.

Davoli R，Gandolfi G，Braglia S，Comella M，Zambonelli P，Buttazzoni L，Russo V. 2010. New SNP of the porcine Perilipin 2（PLIN2） gene， association with carcass traits and expression analysis in skeletal muscle[J]. Molecular Biology Reports，38：1575-1583. doi：10.1007/s11033-010-0266-0.

Desruisseaux M S，Nagajyothi，Trujillo M E，Tanowitz H B，Scherer P E. 2007. Adipocyte， adipose tissue， and infectious disease[J]. Infection and Immunity，75（3）：1066-1078. doi：10.1128/IAI.01455-06.

Hausman G J，Dodson M V，Ajuwon K M，Azain M J， Barnes K M，Guan L L，Jiang Z H，Poulos S， Sainz R， Smith S B， Spurlock M，Novakofski J，F(xiàn)ernyhough Culver M E， Bergen W G. 2009. Board-invited review： The biology and regulation of preadipocytes and adipocytes in meat animals[J]. Journal of Animal Science，87（4）：1218-1246. doi：10.2527/jas.2008-1427.

Imamura M，Inoguchi T，Ikuyama S，Taniquchi S，Kobayashi K，Nakashima N，Nawata H. 2002. ADRP stimulates lipid accumulation and lipid droplet formation in murine fibroblasts[J]. AJP Endocrinology and Metabolism，283（4）：775-783. doi：10.1152/ajpendo.00040.2002.

Jiang H P，Harris S E，Serrero G. 1992. Molecular cloning of a differentiation-related mRNA in the adipogenic cell line 1246[J]. Cell Growth & Differentiation，3：21-30. doi：10.1.1.962.3791.

Kim T H，Choi B H，Chang G W，Lee K T，Lee H Y，Lee J H，Kim K S，Park C K，Moran C. 2005. Molecular characterization and chromosomal mapping of porcine adipose differentiation-related protein（ADRP）[J]. Journal of Animal Breeding and Genetics，122（4）：240-246. doi：10. 1111/j.1439-0388.2005.00518.x.

Li J，Zhao Z Y，Xiang D C，Zhang B，Xiong F. 2018. Expression of APOB， ADFP and FATP1 and their correlation with fat deposition in Yunnan’s top six famous chicken breeds[J]. British Poultry Science，59（5）：494-505. doi：10.1080/00071668.2018.1490494.

Listenberger L L，Ostermeyer-Fay A G，Goldberg E B，Brown W J，Brown D A.? 2007. Adipocyte differentiation-related protein reduces lipid droplet association of adipose triglyceride lipase and slows triacylglycerol turnover[J]. Journal of Lipid Research，48（12）：2751-2761. doi：10.1194/ jlr.M700359-JLR200.

Lu P，Li D F，Yin J D，Zhang L Y，Wang Z Y. 2008. Flavour differences of cooked longissimus muscle from Chinese indigenous pig breeds and hybrid pig breed（Duroc×Landrace×Large White）[J]. Food Chemistry，107（4）：1529-1537. doi：10.1016/j.foodchem.2007.10.010.

Mishra R，Emancipator SN，Miller C，Kern T，Simonson M S. 2004. Adipose differentiation-related protein and regulators of lipid homeostasis identified by gene expression profiling in the murine db/db diabetic kidney[J]. American Journal of Physiology，286（5）：913-921. doi：10.1152/ajprenal.00323.2003.

Nie T，Zhao X L，Qiu H，Xia T，Chen X D，Gan L，F(xiàn)eng S Q，Lei T，Dai M H，Yang Z Q. 2005. Sequence analysis and map assignment of pig SREBF2 and ADFP[J]. Animal Genetics，36（5）：455-457. doi：10.1111/j.1365-2052.2005. 01344.x.

Schultz C J，Torres E，Londos C，Torday J S. 2002. Role of adipocyte differentiation-related protein in surfactant phospholipid synthesis by type II cells[J].American Journal of Physiology. Lung Cellular and Molecular Physiology，283（2）：L288-L296. doi：10.1152/ajplung.00204.2001.

Wang X K，Reape T J，Li X，Rayner K，Webb C L，Burnand K G，Lysko P G. 1999. Induced expression of adipophilin mRNA in human macrophagcs stimulated with oxidized low-density lipoprotein and in atherosclerotic lesions[J].FEBS Letters，462（1-2）：145-150. doi：10.1016/S0014-5793（99）01521-5.

Wood J D，Nute G R，Richardson R I，Whittington F M，Southwood O，Plastow G，Mansbridge R，da Costa N，Chang K C. 2004. Effects of breed， diet and muscle on fat deposition and eating quality pigs[J]. Meat Science，67（4）：651-667. doi：10.1016/j.meatsci.2004.01.007.

Xiang D C，Zhao Z Y，Zhang B，He Z C，Wan Q S，Li J. 2017. Correlation analysis of relative expression of APOB， ADFP and FATP1 with lipid metabolism in daweishan mini chickens[J]. Brazilian Journal of Poultry Science，19（1）：151-158. doi：10.1590/1806-9061-2016-0357.

Zhao Y Y，Lin X S，Liu K Q，Tian Y，Zhang L F，Wei W，Chen J. 2020. Promoter CpG methylation status affects ADRP gene expression level and intramuscular fat content in pigs[J]. Italian Journal of Animal Science，19（1）：783-791. doi：10.1080/1828051X.2020.1729261.

Zhang B，Xiang D，Yang R，Yang L，Li J， Zhao Z. 2019. Varia-tions in tissue-specific expression of adipose differentiation-related protein gene in two native Yunnan chicken breeds[J]. Brazilian Journal of Poultry Science，21（1）：1-7. doi：10.1590/1806-9061-2017-0780.

（責(zé)任編輯 鄧慧靈）