石仙桃組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)研究*

蔡梅玲，李志良，蔡煜熙，張 鳳，朱昔嬌，黃 浩，饒衛(wèi)芳，唐國濤

（1.梅州市農(nóng)林科學(xué)院林業(yè)研究所，廣東 梅州 514011；2.深圳市綠雅生態(tài)發(fā)展有限公司，廣東 深圳 518000）

石仙桃（Pholidota chinensis Lindl.）又名石上蓮、石橄欖（廣州）、石穿盤（廣西）、石萸肉（福建）等，是蘭科石仙桃屬植物，主要分布在我國南方的廣東、廣西、云南等地。石仙桃是比較傳統(tǒng)的藥食同源植物，在我國南方地區(qū)，特別是在廣東、福建等地使用廣泛，它具有抗衰老、抗腫瘤、抗炎、增強(qiáng)免疫機(jī)能等功用。石仙桃植株的假鱗莖碩大似桃，青翠猶玉，葉色鮮亮，是一種雅致的室內(nèi)觀賞植物；它性味甘涼，能夠治療人體多種疾病，具有清熱舒緩、止咳潤肺、消腫祛濕等功效，主要用來治療病毒引起的發(fā)燒咳嗽，對咳血、吐血有較為明顯的治療效果，還能夠退燒消腫。

石仙桃作為藥食同源植物，廣泛應(yīng)用于民間日常餐飲（煲湯），具有較大的市場需求量。由于石仙桃一般都是野生資源，過度采伐導(dǎo)致石仙桃資源嚴(yán)重短缺。我們對石仙桃的組織培養(yǎng)離體快繁技術(shù)進(jìn)行了詳細(xì)研究，完善了石仙桃離體快繁技術(shù)體系，為解決目前石仙桃資源短缺問題提供了可行的替代途徑。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

以石仙桃的假鱗莖作為誘導(dǎo)材料，石仙桃植株采自梅州市國有梅南林場，采集的石仙桃健壯。假鱗莖使用自來水清洗干凈后先用5%洗衣粉水溶液浸泡3min，其間不斷地?fù)u動，再用過濾水清洗干凈，然后用0.1%升汞溶液在超凈工作臺上消毒8-10min，接著用無菌水沖洗干凈，再用消毒過的濾紙吸干表面水分。消毒后的假鱗莖使用接種刀在操作臺上剝?nèi)グ耐鈱悠?，露出新鮮組織，分切成莖段后將其水平放入到培養(yǎng)皿中進(jìn)行養(yǎng)殖。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗方法為外部植物體誘導(dǎo)

該方法主要以MS母液為基本培養(yǎng)條件，培養(yǎng)基中另外添加20/L香蕉果泥，同時添加植物生長調(diào)節(jié)劑 6-BA 0.5，1.0，2.0mg/L； 生 長 素 NAA 0.1mg/L；IBA 0.5，1.0mg/L；2-4-D 0.1，0.5mg/L。對比研究發(fā)現(xiàn)，同一種植物使用生長調(diào)節(jié)劑的濃度能夠?qū)χ参锩妊慨a(chǎn)生誘導(dǎo)。經(jīng)過50d誘導(dǎo)試驗后，對植物萌芽數(shù)量和接種數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計，其中誘導(dǎo)率=萌芽數(shù)/接種數(shù)×100%，增殖率=增殖芽數(shù)/接種數(shù)。

1.2.2 石仙桃植物芽增殖試驗

根據(jù)上述試驗結(jié)果選擇較為合適的石仙桃生長調(diào)節(jié)劑，保證生長調(diào)節(jié)劑的濃度以及種類符合石仙桃的培養(yǎng)需求，才能夠開展繼代培養(yǎng)，誘導(dǎo)叢芽不斷增殖。增殖培養(yǎng)以30d為一繼代培養(yǎng)周期，以MS為基本母液分別添加生長調(diào)節(jié)劑 6-BA 1.0，1.5，2.0mg/L 和 IBA 0.5，1.0mg/L。一個繼代培養(yǎng)周期結(jié)束后記錄增殖的芽苗數(shù)量，并計算增殖率。

1.2.3 生根培養(yǎng)試驗（經(jīng)上述繼代培養(yǎng)的材料）

選擇將已伸長至2～3cm的芽。這種情況下就可以對石仙桃幼芽進(jìn)行轉(zhuǎn)移，需要準(zhǔn)備三種不同濃度的MS母液，之后在將幼芽轉(zhuǎn)移到不同濃度的母液中進(jìn)行生根培養(yǎng)，還要將其中兩種母液濃度中的元素調(diào)節(jié)到1/4MS或1/2MS。全部試驗培養(yǎng)基中另外添加植物生長調(diào)節(jié)劑IBA 1.0mg/L 和 NAA 0.1，0.5mg/L，1.0mg/L，還要在培養(yǎng)基中添加活性炭1.5L。試驗培養(yǎng)40d后開始記錄石仙桃的生根株數(shù)以及根數(shù)量，計算生根率。生根率=生根株數(shù)/接種數(shù)×100%。

上述所有試驗都需要添加卡拉膠5g/L，蔗糖30g/L，香蕉果泥20/L，培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)至5.8。培養(yǎng)室溫度要達(dá)標(biāo)，使用空調(diào)，調(diào)節(jié)至25℃左右，光照使用T型管，光強(qiáng)度1500Lux左右，每天控制光照時間10h。

1.2.4 生根苗移栽

上述生根瓶苗經(jīng)室外常溫?zé)捗绾?，取出生根植株，將根部培養(yǎng)基質(zhì)清洗干凈，放于陰涼處晾干后種植到準(zhǔn)備好的容器中。種植基質(zhì)使用透氣性較好的營養(yǎng)土，種完后要在幼苗根部噴灑定根水，并保持種植區(qū)域陰涼，通過覆膜來保持土壤濕度，精心管理時間要持續(xù)1個月左右，之后就可以轉(zhuǎn)為常規(guī)管理。

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)

兩周左右的初始試驗培養(yǎng)，接種的外植體顏色逐步轉(zhuǎn)綠并有少量側(cè)芽開始萌動。經(jīng)一個月左右試驗培養(yǎng)后，培養(yǎng)基中添加了植物生長調(diào)節(jié)劑IBA的大部分外植體明顯萌芽并增殖生長，而培養(yǎng)基中添加了植物生長調(diào)節(jié)劑NAA和2-4-D的外部植物體只有60%的概率生成萌芽并實現(xiàn)增殖，還有部分植物體顏色會出現(xiàn)變色的情況。上述試驗結(jié)果表明三種濃度不同的生長調(diào)節(jié)劑中，只有IBA符合石仙桃芽苗的生長需求，并且能夠誘導(dǎo)石仙桃的生長。另外，表1的試驗結(jié)果表明，添加了濃度為1.0mg/L或2.0mg/L細(xì)胞分裂素6-BA的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，能夠促進(jìn)叢生芽的增殖以及誘導(dǎo)石仙桃幼苗的生長。

表1 外植體誘導(dǎo)試驗培養(yǎng)結(jié)果

2.2 芽苗增殖試驗培養(yǎng)

從表2的芽苗增殖試驗結(jié)果可以看出，添加了植物生長調(diào)節(jié)劑6-BA濃度為1.0mg/L或1.5mg/L的試驗培養(yǎng)條件，芽苗的增殖倍數(shù)可達(dá)到4.3～5.5，比外植體誘導(dǎo)試驗培養(yǎng)階段的增殖率高，但當(dāng)植物生長調(diào)節(jié)劑6-BA濃度達(dá)到2.0mg/L時，分化出來的芽苗出現(xiàn)數(shù)量多而細(xì)密且愈傷組織明顯增多的現(xiàn)象，說明該培養(yǎng)條件不利于芽苗的增殖繼代培養(yǎng)。培養(yǎng)基中植物生長調(diào)節(jié)劑IBA的使用濃度以0.5mg/L為宜，芽苗生長較粗且壯，也可達(dá)到4～5倍的增殖率。因此，芽苗增殖試驗培養(yǎng)結(jié)果表明添加6-BA 1.5mg/L和IBA 0.5mg/L的培養(yǎng)基適合于石仙桃芽苗的繼代和增殖培養(yǎng)。

表2 不定芽的增殖培養(yǎng)結(jié)果

2.3 生根培養(yǎng)試驗

生根培養(yǎng)試驗結(jié)果如表3所示。石仙桃在試驗環(huán)境中容易生根，三種不同環(huán)境的培養(yǎng)試驗條件下，苗木生根率可達(dá)到92%以上，其中以大量元素減少的1/2 MS基本培養(yǎng)中添加植物生長調(diào)節(jié)劑IBA 1.0mg/L和NAA 0.5mg/L的處理試驗生根率高達(dá)96%。培養(yǎng)試驗結(jié)果還表明，適當(dāng)減少培養(yǎng)基母液的大量元素用量有利于促進(jìn)石仙桃芽苗生根和小苗生長，提高試驗培養(yǎng)基中植物生長調(diào)節(jié)劑NAA的濃度時分化出的新根較粗大、質(zhì)脆且易折斷。

表3 誘導(dǎo)植株生根結(jié)果

2.4 出瓶移栽

經(jīng)10-15天室外幼苗培養(yǎng)之后，將已經(jīng)生根的石仙桃幼苗從培養(yǎng)器具中取出，并用清水沖洗干凈并洗去根部的培養(yǎng)基，放于陰涼處適當(dāng)晾干表面的水分，分別移栽到預(yù)先準(zhǔn)備好的種植袋或床。移栽基質(zhì)為市場購買的透氣營養(yǎng)土，定植后淋定根水、遮陰，遮光度75%-90%，覆膜保濕一周左右，然后每天定時揭膜透氣，每天逐步增加透氣時間，經(jīng)遮陰管理一個月后轉(zhuǎn)入常規(guī)管理。通過噴淋，控制栽培環(huán)境濕度大于50%。小苗在移栽10-15天后開始生長，總體移栽成活率達(dá)到85%以上，未出現(xiàn)病蟲害。

3 結(jié)論

（1）食藥兩用植物石仙桃組織培養(yǎng)主要是以MS作為主要培養(yǎng)基，需要配合植物生長調(diào)節(jié)劑一同使用，植物生長調(diào)節(jié)劑的種類和濃度為6-BA 1.5mg/L和IBA 0.5mg/L，在這種試驗環(huán)境下得出結(jié)論，使用MS作為石仙桃主要培養(yǎng)基能夠有效減少幼芽組織受傷，并且能夠促進(jìn)芽苗繁殖幾率，保證石仙桃幼苗較為健康。該試驗對幼苗之后的生根試驗、移栽管理都會創(chuàng)造較為有利的生長條件。試驗培養(yǎng)有利于生根的培養(yǎng)基母液大量元素減半的1/2MS，并且要配合生長調(diào)節(jié)劑IBA 1.5mg/L和NAA 0.6mg/L，這樣的培養(yǎng)環(huán)境下，能夠有效促進(jìn)苗木的分化速度，保證苗木生長的質(zhì)量，可提高出瓶移栽后的苗木成活率。

（2）石仙桃是蘭科石仙桃屬植物，不僅有極高的觀賞價值，還有相當(dāng)重要的食用和藥用價值。它含有豐富的維生素、蛋白質(zhì)以及碳水化合物，還有磷、鐵等微量元素，這些對我們身體的各個方面都有著極大的好處。通常大家都會選擇將石仙桃拿來煲湯喝，現(xiàn)如今石仙桃在市場上備受追捧，素有“仙桃”之稱。

（3）資料顯示，有關(guān)石仙桃的研究多集中在其藥理、藥效或有效成分分析方面，對于其苗木繁育及栽培技術(shù)的研究較少。本篇文章對石仙桃組織培養(yǎng)繁殖試驗分析得出，使用植物繁殖培養(yǎng)技術(shù)能夠滿足石仙桃的生長需求，加快石仙桃的成功繁殖幾率。