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      淺談豬冷凍精液制作技術要點

      2021-03-27 13:54:08姜樹林寧財余華陽鐘志勇
      江西畜牧獸醫(yī)雜志 2021年2期
      關鍵詞:細管液氮稀釋液

      姜樹林,寧財,余華陽,鐘志勇

      (江西省農業(yè)技術推廣中心,江西南昌330046)

      生豬生產過程中采用本交或常溫精液稀釋后配種繁育,在儲存、運輸、利用效率、基因質量、生物安全等方面存在諸多問題。尤其在傳染病流行期采取封閉防控措施的情況下,在很大程度上限制了優(yōu)秀種公豬的運輸和利用,影響了生豬產業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展。豬冷凍精液有保存時間長、成本低、易于運輸?shù)葍?yōu)點,在生豬生產中起著非常重要的作用。應用豬冷凍精液可以杜絕公母豬直接接觸,降低病毒垂直傳染的概率,有利于生物安全防控,解決種豬跨地區(qū)調運及運輸難題,實現(xiàn)跨區(qū)域聯(lián)合育種,打破時間和空間限制,利于集中復產配種等[1]。同時,豬冷凍精液技術可高效擴繁優(yōu)秀基因,大幅度提升種公豬的遺傳效益,降低公豬飼養(yǎng)數(shù)量,提高養(yǎng)殖場收益。

      自2018年開始,筆者通過數(shù)十次冷凍精液制作試驗,并成功運用到地方豬冷凍精液生產實踐,形成了較完善的豬冷凍精液操作規(guī)程生產工藝。利用這種生產工藝進行冷凍精液制作,可有效保證精液的凍后活力。

      1 種公豬飼養(yǎng)管理

      1.1 種豬要求

      供精種公豬具有種用性能,符合國家有關規(guī)定。

      1.2 免疫

      種公豬在供精前要進行全面檢疫,并在供精前進行程序性免疫,完成免疫程序15d后方可采精。

      1.3 飼養(yǎng)管理

      1.3.1 能量飼料。種公豬采精期間要注意營養(yǎng)均衡,但要適當控制能量飼料,防止種公豬過肥,影響性欲和精液質量。

      1.3.2 蛋白質需求。精液中蛋白質占14%,所以供精種公豬飼料必須保證充足的蛋白質(不低于17%),特別是在采精期間要適當增加飼料蛋白質水平。有條件的養(yǎng)殖場,采精期間每頭公豬每天可補充1~2枚雞蛋。

      1.3.3 維生素。維生素對種公豬的生殖保健有重要作用,如維生素A不足會引起睪丸萎縮,維生素D和E不足會影響精液質量。采精期間要適當補充維生素,每日添加飼喂胡蘿卜和魚肝油[2]。

      1.3.4 適當運動。種公豬要適當增加運動,保證正常的新陳代謝和旺盛的性欲,避免發(fā)生肢蹄病,影響爬跨。

      1.4 采精調教

      種公豬10月齡、體重100kg左右開始進行爬跨調教,形成射精反應。種公豬采精頻率為每周2~3次。

      2 采精前準備

      2.1 采精欄準備

      2.1.1 采精前對采精欄進行全面清潔,沖洗干凈,自然干燥后,再用紫外線消毒30min以上。

      2.1.2 假臺畜后方放橡膠防滑墊,調整好位置,以保證公豬爬跨時,站立舒適。

      2.1.3 采精室應保證冬暖夏涼,控制在16℃~25℃之間。

      2.2 種公豬準備

      2.2.1 采精前將種公豬趕到采精欄,刷拭掉種公豬體表尤其是下腹及側腹的灰塵和污物。

      2.2.2 種公豬的陰毛不能過長,以免粘附污物。采精前,修整公豬的陰毛,一般以不超過2cm為宜。

      2.2.3 先用0.1%高錳酸鉀溶液清洗種公豬陰莖包皮,再用滅菌生理鹽水清洗,并用消毒的干凈毛巾擦拭包皮部位,避免采精時殘液混入精液中污染精液。

      2.3 集精杯準備

      2.3.1 將塑料袋放入集精杯中,然后將塑料袋外翻。將濾紙蓋在集精杯口上,將橡皮筋撐開濾紙固定在集精杯外沿上。濾紙安裝好后,濾紙面向下陷3cm左右,放在35℃~37℃的恒溫箱中預熱備用。

      2.3.2 將消毒紙巾盒、P E手套、集精杯放在實驗室與采精欄之間的壁櫥內,關上壁櫥門。

      2.3.3 采精時拿出集精杯并蓋上蓋子,然后傳遞給采精人員。

      2.3.4 當處理室距采精欄較遠時,應將集精杯放入泡沫保溫箱中,然后帶到采精欄。

      2.4 精液營養(yǎng)液、冷凍稀釋液、BTS解凍液配制

      2.4.1 營養(yǎng)液配制。葡萄糖1.5g,乳糖3g,甘氨酸0.8g,加雙蒸餾水至100mL。

      2.4.2 冷凍稀釋液配方。葡萄糖6.12g、EDTA 0.3g、雙蒸餾水75mL、蛋黃20mL、甘油5mL、乙二醇0.83mL、青鏈霉素各10萬U、咖啡因0.2mg/mL。

      2.4.3 BTS解凍液配方。葡萄糖3.7g、無水檸檬酸鈉0.6g、碳 酸 氫 鈉0.125g、EDTA 0.125g、氯 化 鉀0.075g、雙蒸餾水100mL。

      3 采精

      3.1 采精引導

      采精員右手戴兩層手套,站在假臺畜的頭部,輕輕敲擊假臺畜以引起公豬的注意,并通過模仿發(fā)情母豬聲音或在假臺畜上灑發(fā)情母豬尿液等方式引導公豬爬跨。當公豬爬跨有交配行為時,采精員迅速用右手按摩擠壓公豬包皮囊,將其中的包皮積液擠凈,然后用消毒紙巾將包皮口擦干凈。

      3.2 精液采集

      3.2.1 采精方法。當公豬爬跨假臺畜時,采精員應輔助公豬保持正確的姿勢,避免側向爬或陰莖壓在假臺畜上。手握龜頭呈節(jié)奏性松緊給予壓力進行刺激,鎖定龜頭,脫去右手的外層手套,右手呈空拳,當龜頭從包皮口伸入空拳后,用中指、無名指、小指鎖定龜頭,并向左前上方拉伸,龜頭一端略向左下方。為了防止未擠凈的包皮積液順著陰莖流入集精杯中,采精時要保證陰莖龜頭端的最高點高于包皮口。

      3.2.2 精液收集。最初射出的精液不含精子不能收集,當公豬射出乳白色的精液時,左手將集精杯口向上接近右手小指正下方。最后的精液稀薄基本不含精子,不要收集。要保證公豬的射精過程完整。采精過程中,即使最后射出的精液不收集,也不要中止采精,直到公豬陰莖軟縮,試圖爬下假母豬,再慢慢松開公豬的陰莖。取掉集精杯上的濾紙,蓋好集精杯蓋,標明公豬耳號,送入化驗室櫥窗。

      4 品質檢測

      用帶有恒溫設施的顯微鏡進行檢測,載溫臺溫度應恒溫維持在37℃。檢測指標主要有:外觀(淡乳白色或灰白色,均勻一致,無雜質)、氣味(略帶腥味,無異味)、活力(≥70%。)、畸形率(≤15%)。

      5 鮮精處理

      5.1 精液稀釋要求

      最終稀釋密度為4億/mL。

      5.2 預稀釋

      營養(yǎng)液先預熱到32℃。將活力檢測合格的鮮精,記錄好精液密度、劑量等相關數(shù)據(jù),按1:1比例與營養(yǎng)液混合均勻。預稀釋后的精液放入17℃恒溫箱內,等同溫至17℃后,進行離心操作。

      5.3 離心

      將預稀釋精液裝入100mL的離心管內,在恒溫17℃和重力900g條件下離心15min。精液離心后,吸走離心管的上清液。

      5.4 稀釋

      冷凍稀釋液預熱至17℃。以每毫升4億的最終稀釋濃度,計算出需要的冷凍稀釋液。將2/3冷凍稀釋液加到離心管中,以吸吐方式充分混合均勻、合并,再用剩下的1/3冷凍稀釋液洗滌離心管底,合并。

      5.5 平衡

      將稀釋好的精液放至17℃水浴杯中,一同放進4℃冰箱,平衡4h。

      5.6 分裝

      細管上應用字母標明生產場、公豬品種、公豬號、生產日期。檢查灌裝好的細管精液,將有氣泡、未灌滿的不合格的細管精液撿出。將分裝好的細管精液鋪放在冷凍支架上。

      6 冷凍

      6.1 冷凍方式

      6.1.1 程序冷凍。在程控冷凍儀的冷凍柜里,以每分鐘下降30℃的速度填充液氮將精液冷凍。

      6.1.2 熏蒸冷凍。采用自制冷凍箱或泡沫箱冷凍,可以降低生產成本,冷凍效果較理想。冷凍箱的深度應該在50cm以上,使用前先倒入液氮冷卻10min以上。冷凍支架與液氮面保持2cm,冷凍8min即可。

      6.2 包裝

      將冷凍好的細管精液包裝好,外包裝上標明品種、豬號、支數(shù)、生產日期等。

      6.3 質量檢測

      6.3.1 解凍。BTS解凍液預熱至26℃。從液氮罐中取出2~3支細管精液,迅速放到38℃水中,解凍15s,或50℃水中,解凍7s。剪開細管精液封口端,擠入數(shù)滴精液至1mLBTS解凍液中,攪勻,回溫到37℃,靜置20min。在37℃載溫臺上,檢測精液活力。

      6.3.2 凍精品質要求?;盍Α?0%,精子畸形≤18%,密度≥4億/mL,每支(0.25mL規(guī)格細管)菌落數(shù)≤800個。

      7 討論

      7.1 種公豬飼養(yǎng)管理

      種公豬飼養(yǎng)管理至關重要,特別是營養(yǎng)均衡方面,要根據(jù)種公豬的生產需要進行調配飼料及添加營養(yǎng)物質,保證種公豬的能持續(xù)提供符合冷凍制作的優(yōu)質精液。種公豬從體重70kg開始就要飼喂專門的種公豬飼料[4],控制能量飼料的投入,防止過胖影響生產性能。運動對種公豬的健康十分重要,不僅能保持種公豬的性欲,還能有效提高精液質量,根據(jù)不同情況合理安排種公豬的運動量及運動方式[5]。合理的采精頻率是保障精液質量和延長種公豬利用年限的重要措施,根據(jù)種公豬不同的年齡合理安排每周采精頻率,后備種公豬1~2次/周,青年種公豬2~3次/周[5],具體采精頻率還要根據(jù)鮮精品質進行調整,一旦發(fā)現(xiàn)精液量減少或精子密度下降,應該適當減少采精頻率或停采一段時間。

      7.2 采精時間

      種公豬精液品質不僅受營養(yǎng)水平、年齡等因素影響,而且受季節(jié)氣溫因素影響。通常夏季高溫高濕,冬季低溫天氣都會對種公豬精液質量有影響,難以制作成功,外界氣溫超過35℃或低于5℃時,建議停采。另外天氣突變,如大幅升降溫對種公豬的精液質量也會有影響,但這種影響通常是短暫的,幾天就能恢復正常。

      7.3 溫度控制

      溫度控制在豬凍精生產中至關重要。采精及處理鮮精時,所用的器具應保持同等溫度,減少溫差帶來對精子的打擊。在進行4℃平衡時,應放置在17℃水中,同步降溫,減少降溫帶來的冷打擊[6]?,F(xiàn)在大多數(shù)企業(yè)生產生豬凍精多采取程序冷凍,控溫效果較好。但部分企業(yè)為了節(jié)省成本采用自制冷凍箱或泡沫箱熏蒸冷凍,采用這種方式冷凍時,應該提前倒入液氮,靜置10min以上,讓冷凍箱能充分均溫,才能保證冷凍效果。凍精凍制成功后,應該全部浸沒在液氮中,避免回溫帶來的影響。檢測精液活力時,應確保載溫臺在37℃,才能準確觀察精子活力,溫度過高或過低都會影響判斷。

      7.4 凍精保存

      凍精制作好后,應該及時投入液氮罐進行深度冷凍。冷凍1~2周后,應該再進行一次凍精質量檢查,將合格精液入庫保存。每罐凍精裝2/3左右,充滿液氮,每周定期檢查,及時補充液氮。凍精庫房應該保持涼爽、干燥、避風、避光,液氮罐外標注品種名、豬號、支數(shù)、生產日期等信息,盡量減少不必要的開罐查找精液。

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