牛結(jié)核病的防控

江 波

山東省沂水縣動物疫病預(yù)防控制中心，山東臨沂 276400

0 引言

牛結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的一種嚴重威脅人類健康和畜牧業(yè)健康發(fā)展的人畜共患慢性傳染病，以組織器官的結(jié)核結(jié)節(jié)性肉芽腫和干酪樣、鈣化的壞死病灶為特征，奶牛最易感，水牛、黃牛、牦牛、鹿等多種動物也易感[1]。世界衛(wèi)生組織（WHO）于1993年宣布“全球結(jié)核病緊急狀態(tài)”，確定每年3月24日為“世界防治結(jié)核病日”。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將該病列為必須報告的疫病。我國將本病列為二類動物疫病，二類人的疫病。WHO在《2020年全球結(jié)核病報告》中指出，2019年全球估算新發(fā)結(jié)核病患者996 萬例，新發(fā)患者數(shù)居前3位的是印度（264 萬例）、印度尼西亞（84.5 萬例）和中國（83.3 萬例）。我國5%～10%的人結(jié)核病是由牛結(jié)核分支桿菌引起的，所以WHO專家委員會指出：除非消滅牛結(jié)核病，否則人結(jié)核病是不會徹底得到控制的。

1 病原特點

對人、畜有致病力的結(jié)核分枝桿菌主要有牛型、人型和禽型3 種類型，引起牛結(jié)核病的病原主要是牛型結(jié)核分枝桿菌；人型、禽型也可引起本病。結(jié)核分枝桿菌菌體長1.5～5 μm、寬0.2～0.5 μm，不同類型的結(jié)核分枝桿菌形態(tài)略有差異，人型結(jié)核分枝桿菌較直或微彎，細長，棍棒狀，多呈單獨或平行相聚排列，間有分枝狀排列；牛型結(jié)核分枝桿菌比人型稍短粗，著色不均勻；禽型結(jié)核分枝桿菌短而小，呈多形性[2]。

結(jié)核分枝桿菌無芽孢、鞭毛和莢膜，也無運動性；為嚴格的需氧菌，革蘭氏染色陽性，但不易著色；生長最適pH值為：牛型結(jié)核分枝桿菌5.9～6.9、人型結(jié)核分枝桿菌7.4～8.0、禽型結(jié)核分枝桿菌7.2；最適生長溫度37～38 ℃。

結(jié)核分枝桿菌的細胞壁中含有豐富的蠟質(zhì)成分，對外界有很強的抵抗力，自然環(huán)境中生存能力較強，耐干燥、耐濕冷。在干燥的痰中能存活10個月，在土壤、糞便中可存活5～7 個月，在常水中可存活5 個月，在奶中可存活90 天。但對直射陽光和濕熱的抵抗力較差，直射陽光下數(shù)小時死亡，在60 ℃ 30 min、70 ℃ 10～15 min、100 ℃水中立即死亡。常規(guī)消毒劑如5%來蘇兒、3%～5%福爾馬林、70%酒精、10%漂白粉溶液等均對其有可靠的消殺作用。對常規(guī)抗菌藥物，如鏈霉素、異煙肼、對氨基水楊酸、環(huán)絲氨酸等敏感，但對青霉素、磺胺類藥物及其他廣譜抗生素不敏感。

2 流行病學

結(jié)核分枝桿菌可感染人及多種家畜、家禽，家畜中以牛，尤其是奶牛最易感，水牛易感性也很高，黃牛和牦牛次之?；疾游?，尤其是開放性結(jié)核病動物，結(jié)核分枝桿菌廣泛存在于機體各個器官的病灶內(nèi)，是主要的傳染源。牛結(jié)核分枝桿菌可通過消化道、呼吸道，由糞便、乳汁、尿、痰等，擴散，污染周圍環(huán)境和水源，流入土地，通過呼吸、吮乳等途徑被人和動物吸入而感染。農(nóng)村散養(yǎng)牛以散發(fā)為主，規(guī)模化養(yǎng)牛以區(qū)域性發(fā)病多見。

本病一年四季均可發(fā)生。一般說來，舍飼的牛因通風差，牛之間可相互接觸，因而更容易發(fā)病，且傳播速度更快。牛舍過度擁擠、陰暗潮濕、污穢不潔；役牛過度使役、奶牛過度擠乳；飼料營養(yǎng)缺乏維生素和礦物質(zhì)，飼養(yǎng)條件不良等，可促進本病的發(fā)生和傳播。

3 臨床癥狀

本病的潛伏期一般為20～45 天，有的可長達數(shù)月甚至數(shù)年。臨床呈慢性經(jīng)過，病程長，癥狀多不明顯，主要表現(xiàn)為體表淋巴結(jié)尤其是頭部和胸部淋巴結(jié)腫大、營養(yǎng)不良、漸進性消瘦等，役牛勞動能力下降，奶牛泌乳能力降低。因發(fā)病部位不同，臨床上有多種類型，分別表現(xiàn)發(fā)病器官受損的相應(yīng)臨床癥狀。奶牛感染結(jié)核病后主要表現(xiàn)肺結(jié)核、乳腺結(jié)核、淋巴結(jié)核、腸結(jié)核，偶爾出現(xiàn)生殖器結(jié)核、腦結(jié)核、全身結(jié)核。其中，肺結(jié)核最常見[3]。

3.1 肺結(jié)核

肺結(jié)核是牛結(jié)核病最常見的臨床類型。發(fā)病初期病牛易疲勞，出現(xiàn)短促的干咳，以后逐漸加重并變成濕咳；清晨、飲水后咳嗽加重，呼吸增數(shù)，鼻孔流出淡黃色黏液或膿性鼻液；肺區(qū)聽診為啰音，胸膜結(jié)核時有摩擦音，叩診為濁音；進行性（病情仍在繼續(xù)發(fā)展）病例中，肩前淋巴結(jié)、頜下淋巴結(jié)、咽部及頸部淋巴結(jié)等多處淋巴結(jié)腫大，可導(dǎo)致空氣流通受阻，食道或血管堵塞，有時，頭、頸部淋巴結(jié)腫大后可出現(xiàn)破潰和淋巴液外滲；病牛食欲減退，漸進性消瘦、貧血，產(chǎn)奶量下降。病牛在感染后期極度消瘦，出現(xiàn)急性呼吸窘迫。

3.2 乳腺結(jié)核

牛的乳腺結(jié)核常發(fā)生在后方乳腺區(qū)。發(fā)病初期，乳腺腫大，之后在后方乳腺區(qū)出現(xiàn)許多小結(jié)節(jié)，觸摸無熱無痛，有硬塊；產(chǎn)奶量減少，嚴重者停止泌乳；乳汁稀薄如水，?；煊袦啙岬哪閴K和絮狀物。

3.3 腸結(jié)核

多見于犢牛。食欲不振，消化不良，便秘、腹瀉交替發(fā)作；之后發(fā)展為頑固性下痢，便中帶血或混有膿汁，腥臭，快速脫水、消瘦。

4 診斷

發(fā)現(xiàn)牛群中有咳嗽、漸進性消瘦、體表淋巴結(jié)慢性腫脹、慢性乳腺炎、頑固性下痢等臨床表現(xiàn)時，應(yīng)視為疑似病例，需結(jié)合流行病學特點等情況，進行必要的實驗室檢查。

4.1 涂片染色鏡檢法

采集病牛的病灶（如腫脹的淋巴結(jié)）、排泄物（如尿、糞）及分泌物（如痰、乳），直接涂片或集菌處理后涂片，熒光抗酸染色法染色后鏡檢。如發(fā)現(xiàn)存在被染成紅色的結(jié)核分枝桿菌（非結(jié)核分枝桿菌抗酸染色呈藍色），即可確診為陽性。這種檢查結(jié)核分枝桿菌的方法敏感性較差，而且也很難將結(jié)核分枝桿菌同其他非典型結(jié)核分枝桿菌區(qū)別開來[4]?，F(xiàn)代臨床診斷中較少應(yīng)用。

4.2 細菌分離培養(yǎng)法

應(yīng)用Lowenstesin-Jensen培養(yǎng)基，或直接接種到瓊脂培養(yǎng)基上[5]。牛結(jié)核分枝桿菌一般在培養(yǎng)3～6周后出現(xiàn)生長物。根據(jù)其特征性的生長菌落和形態(tài)，可作出初步診斷，用PCR和分子分型技術(shù)可進行確診。因結(jié)核分枝桿菌生長慢，耗費時間長，加上各種條件限制，檢出率也較低，有20%左右的陽性病例檢測失敗[4]，已很難滿足現(xiàn)代臨床診斷的需要，應(yīng)用較少。

4.3 結(jié)核菌素試驗

提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗（結(jié)核菌素試驗）是檢測牛結(jié)核病的標準方法，也是OIE推薦的國際貿(mào)易中指定的試驗方法。

可疑病牛頸中部剪毛，卡尺測量皮膚厚度，消毒，皮內(nèi)接種牛結(jié)核菌素純化蛋白衍生物（PPD），72 h后測量注射部位的腫脹（遲發(fā)性過敏）程度。接種時，可單獨使用牛結(jié)核菌素，也可使用牛型結(jié)核菌素或禽型結(jié)核菌素進行比較試驗，以提示被檢疑似病牛是牛結(jié)核病還是非特異的遲發(fā)性超敏反應(yīng)。具體方法如下。

疑似病牛保定好以后，在左側(cè)頸中部上1∕3處（3月齡內(nèi)犢牛在肩胛部）剪毛，直徑10 cm左右；用游標卡尺連續(xù)測量術(shù)部皮褶厚度3 次，取平均值；術(shù)部碘酊消毒，75%酒精脫碘；用注射用水（或生理鹽水）將提純牛型結(jié)核菌素稀釋成每毫升含10 萬U，不論牛只大小，皮內(nèi)注射0.1 mL。注射后72 h，觀察局部有無熱痛腫脹等炎性反應(yīng)，并再次測量術(shù)部皮皺厚度平均值，計算皮厚差。

如局部有明顯的炎性反應(yīng)，皮厚差等于或大于4 mm，則為陽性反應(yīng)；如局部炎性反應(yīng)較輕，皮厚差在2.1～3.9 mm之間，則為疑似反應(yīng)；如局部無炎性反應(yīng)，皮厚差在2 mm以下，則為陰性反應(yīng)。只要有一定炎性腫脹，即使皮厚差在2 mm以下者，仍應(yīng)判為疑似病例。

凡被判為疑似反應(yīng)的牛只，應(yīng)立刻在頸部另一側(cè)以同一批、同一劑量的提純牛型結(jié)核菌素進行重復(fù)注射，再經(jīng)72 h觀察反應(yīng)，如仍為疑似，則按陽性牛處置。

這種方法雖然操作過程簡單，但敏感性較差，常出現(xiàn)假陽性和假陰性反應(yīng)，因此在進行流行病學調(diào)查時不推薦使用此法[6]。

4.4 γ 干擾素（IFN-γ）測定法

這是一種血液檢測試驗。該法通過測定全血培養(yǎng)系統(tǒng)中淋巴因子IFN-γ的釋放，以間接檢測牛結(jié)核病。IFN-γ測定法已被用于檢測牛、山羊等動物，可檢出早期感染病例，雖敏感性高，但因操作復(fù)雜、費用高，通常僅作為輔助試驗[7]。

4.5 聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）

這是一種分子生物學檢測方法，已被廣泛用于疑似結(jié)核病人的痰液等臨床病料的檢測和動物結(jié)核病的診斷。

5 疫情處置

5.1 疫情報告

任何單位和個人發(fā)現(xiàn)疑似病牛，應(yīng)當及時向當?shù)貏游镄l(wèi)生監(jiān)督機構(gòu)報告。動物衛(wèi)生監(jiān)督機構(gòu)在接到疫情報告并經(jīng)確認后，按《動物疫情報告管理辦法》及有關(guān)規(guī)定及時上報。

5.2 疫情處置

5.2.1 疑似疫情的處置

當發(fā)現(xiàn)疑似疫情時，畜主應(yīng)立即對疑似病牛進行隔離飼養(yǎng)，并限制其移動。當?shù)貏游镄l(wèi)生監(jiān)督機構(gòu)在接到疫情報告后，應(yīng)及時安排專人抵達現(xiàn)場進行流行病學調(diào)查和相應(yīng)臨床癥狀檢查，同時采集病料樣品送實驗室檢查診斷，根據(jù)診斷結(jié)果采取相應(yīng)措施。

5.2.2 確診疫情的處置

（1）劃定疫點、疫區(qū)和受威脅區(qū)。

把病牛所在的棟舍、戶或其他有關(guān)屠宰場（點）、經(jīng)營單位劃定為疫點；把病牛所在的飼養(yǎng)場、自然村范圍區(qū)域劃定為疫區(qū)；與疫區(qū)相毗鄰的飼養(yǎng)場、自然村的范圍區(qū)域則要劃定為受威脅區(qū)。

（2）隔離、封鎖。

零星散發(fā)時，可采用圈養(yǎng)和固定草場放牧方式，對病牛的同群牛實施隔離。隔離所用的草場，要遠離交通要道、居民點或人畜密集的地區(qū)，場地周圍最好有自然屏障或人工柵欄。當一個自然村、飼養(yǎng)場結(jié)核病陽性率在3%以上或病牛10 頭以上時，應(yīng)對疫區(qū)實施封鎖，禁止病牛和疑似病牛、易感動物及其產(chǎn)品調(diào)出；對易感動物實行圈養(yǎng)或指定地點隔離飼養(yǎng)，役牛限制在疫區(qū)內(nèi)使役、耕作。

（3）撲殺及無害化處理。

對病牛全部進行撲殺；對病死和撲殺的病牛，按照《GB 16548—2006 病害動物和病害動物產(chǎn)品生物安全處理規(guī)程》進行無害化處理。

5.2.3 緊急監(jiān)測

疫區(qū)和受威脅區(qū)內(nèi)的所有牛只，要進行緊急監(jiān)測，緊急接種PPD進行皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗。

5.2.4 消毒

使用5%～10%熱堿水、10%漂白粉、3%福爾馬林、3%苛性鈉、3%～5%來蘇兒等消毒液，對病牛和陽性牛污染的場所、用具、物品等進行嚴格消毒。

5.2.5 解除封鎖

當疫區(qū)內(nèi)最后一頭病牛及陽性牛被撲殺并經(jīng)無害化處理后，繼續(xù)監(jiān)測45 天以上，未見新發(fā)病例；對被污染的場所、用具等進行徹底消毒，經(jīng)當?shù)貏游镄l(wèi)生監(jiān)督機構(gòu)檢驗合格后，可解除封鎖。

6 防控措施

6.1 監(jiān)測凈化

各地畜牧獸醫(yī)行政主管部門要加大對奶牛結(jié)核病的疫情監(jiān)測力度，及時準確地掌握奶牛結(jié)核病病原分布及疫情動態(tài)，科學進行疫情風險評估，及時發(fā)布預(yù)警信息。同時，制定切實可行的疫情控制、凈化方案，分區(qū)域、分階段統(tǒng)籌推進防控工作。集中養(yǎng)殖地區(qū)，要選擇一定數(shù)量的奶牛養(yǎng)殖場（戶）、屠宰場、交易市場作為固定的監(jiān)測點，持續(xù)性開展疫情監(jiān)測。所有奶牛養(yǎng)殖場，都要按照“一病一案、一場一策”的總體要求，從本場實際出發(fā)，制定切實可行的結(jié)核病控制凈化方案，并有計劃地組織實施；及時撲殺結(jié)核病陽性牛，著力開展奶牛結(jié)核病陰性群的培育工作[8]。

6.2 加強防疫檢疫和監(jiān)管

疫區(qū)飼養(yǎng)的健康牛群，使用牛型提純結(jié)核菌素對牛群檢疫時，檢出的陽性奶牛應(yīng)立即隔離；結(jié)合臨床檢查情況，必要時進行細菌學檢查，發(fā)現(xiàn)開放性結(jié)核病奶牛時，應(yīng)立即進行撲殺?；加薪Y(jié)核病的奶牛產(chǎn)下的犢牛，只吃3～5 天的初乳，而后由檢疫無結(jié)核病的健康奶牛代哺；犢牛在生長過程中，分別在滿月齡、3～4月齡、6月齡各進行一次檢疫，陽性者一律淘汰，3 次檢疫均為陰性且無結(jié)核病的可疑臨床表現(xiàn)時，可混入假定健康牛群（污染牛群經(jīng)結(jié)核變態(tài)反應(yīng)為陰性的牛群）飼養(yǎng)。

假定健康牛群，第一年每隔3 個月檢疫一次，直至無陽性牛出現(xiàn)，如果在以后的1～1.5 年內(nèi)連續(xù)進行3 次檢疫均為陰性，則可以轉(zhuǎn)為健康牛群。

引進的牛，必須進行產(chǎn)地檢疫，并隔離觀察1 個月以上，再進行1 次檢疫，確認健康后才能混群飼養(yǎng)。

各地動物衛(wèi)生監(jiān)督機構(gòu)在強化奶牛的產(chǎn)地檢疫和屠宰檢疫的基礎(chǔ)上，要逐步建立以實驗室檢測，動物衛(wèi)生風險評估為依托的產(chǎn)地檢疫機制，不斷提升結(jié)核病的檢疫科學化水平；同時，要嚴格執(zhí)行《跨省調(diào)運乳用、種用動物產(chǎn)地檢疫規(guī)程》，切實做好跨省調(diào)運奶牛的產(chǎn)地檢疫和流通監(jiān)管工作。

6.3 重視生物安全措施

6.3.1 隔離飼養(yǎng)

檢出的疑似病牛應(yīng)嚴格隔離飼養(yǎng)。對檢出的疑似結(jié)核病牛，應(yīng)在1 個月后再進行復(fù)檢，如仍為疑似，經(jīng)25～30 天后可再進行第3次檢疫，再次被檢為疑似時，可視疑似牛的飼養(yǎng)價值等情況酌情處理。

6.3.2 有效消毒

輪換使用有效消毒劑，做好經(jīng)常性的消毒工作，嚴防病原散播。糞便收集，集中進行生物熱處理等無公害處理[9]。

6.4 應(yīng)急處置

一旦發(fā)生疫情，要本著“早、快、嚴、小”的原則，立即按照相關(guān)的應(yīng)急預(yù)案和防控技術(shù)規(guī)范及時處置。