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      廢棄葡萄枝蔓栽培靈芝的適宜菌株篩選

      2021-04-15 07:57:18丁李春
      食藥用菌 2021年2期
      關(guān)鍵詞:三萜靈芝孢子

      丁李春

      廢棄葡萄枝蔓栽培靈芝的適宜菌株篩選

      丁李春

      (福建省寧德市農(nóng)業(yè)科學研究所,福建 福安 355003)

      為篩選適合以葡萄枝屑替代部分木屑為原料進行栽培的優(yōu)良靈芝菌株,采用果園廢棄的葡萄枝屑為主料,對8個靈芝菌株進行栽培試驗,考察產(chǎn)量和生物轉(zhuǎn)化率等指標,并檢測其子實體和孢子的靈芝多糖及三萜含量,進行綜合評分。結(jié)果:子實體和孢子產(chǎn)量、生物轉(zhuǎn)化率、子實體和孢子的三萜含量均以GH8為好,其綜合評分為83.24,也最高;子實體多糖則以圓8較高。8個菌株的多糖和三萜酸含量均超出國家藥典標準。因此GH8可作為葡萄枝屑栽培靈芝的適宜菌株。

      靈芝;廢棄葡萄枝蔓;替代木屑;優(yōu)良菌株

      靈芝()隸屬擔子菌綱、多孔菌科、靈芝屬[1],現(xiàn)代醫(yī)學研究證明靈芝含有多種藥理活性物質(zhì),是我國傳統(tǒng)名貴中藥,也是目前開發(fā)較好的藥用真菌[2, 3]。段木栽培作為我國靈芝傳統(tǒng)栽培方法[4],存在菌林矛盾問題,制約產(chǎn)業(yè)發(fā)展。農(nóng)業(yè)循環(huán)經(jīng)濟理念要求在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中減少資源與物質(zhì)投入,降低廢棄物排放,將廢物轉(zhuǎn)化為資源,以實現(xiàn)經(jīng)濟效益和生態(tài)效益的“雙贏”[5]。目前,桃樹屑、棉籽殼、桑枝、菌草都已用于靈芝代料栽培[6],拓寬了靈芝栽培原料來源。

      福建省福安市是我國葡萄主產(chǎn)區(qū)之一,每年葡萄園生產(chǎn)中都會產(chǎn)生大量的固體廢棄物,包括夏季與冬季修剪的葡萄新梢(枝條)、葉片,以及秋冬季節(jié)的落葉。其中枝條約占30%,其自身物理性狀和基本組成成分均適合食用菌的分解利用[7, 8]。為了更好地利用這些廢棄的葡萄枝蔓,本試驗在進行母種和原種適應性培養(yǎng)基礎(chǔ)上,對8個靈芝菌株進行出菇試驗,并檢測靈芝多糖及三萜含量,以篩選出適應于葡萄枝屑培養(yǎng)料配方栽培的優(yōu)良菌株,為葡萄枝蔓代料栽培靈芝提供依據(jù)。

      1 材料與方法

      1.1 供試菌株

      靈芝菌株日赤、圓8、GH8和武芝,由福建省農(nóng)業(yè)科學院生態(tài)研究所提供;菌株盆芝、美芝和韓芝H引自江都天達食用菌研究所;對照菌株紅芝為閩東地區(qū)主栽品種,由寧德市農(nóng)業(yè)科學研究所食用菌室保藏。

      1.2 培養(yǎng)基配方

      母種培養(yǎng)基配方為葡萄糖20 g、磷酸二氫鉀1.5 g、瓊脂18 g、10%葡萄枝浸出液1 L。原種和栽培種的培養(yǎng)料配方:葡萄枝屑63%、木屑27%、麩皮8%、紅糖1%、石膏1%,料水比為1∶1.5。

      1.3 試驗方法

      (1)10%葡萄枝浸出液的制備。稱取100 g 葡萄枝屑加水1 L,加熱至100 ℃,繼續(xù)煮30 min,取其濾液并用水定容至1 L,標記為 10%葡萄枝浸出液。

      (2)母種制備。按前述母種培養(yǎng)基配方準確稱取各種原料,采用試管分裝,在0.11 MPa下滅菌20 min后,擺成斜面,冷卻到室溫,分別接入8個試驗菌株,每個菌株接10管。接種后置于25 ℃下恒溫培養(yǎng)。

      (3)原種制備。按前述原種培養(yǎng)基配方準確稱取各種原料,攪拌均勻后,用容積為750 mL玻璃瓶裝料。每個菌株裝10瓶,每瓶裝干料0.2 kg,在126 ℃下滅菌2 h,冷卻后分別接入經(jīng)1.3(2)節(jié)培養(yǎng)的各菌株母種,置于25 ℃下恒溫培養(yǎng)。

      (4)栽培試驗。按前述栽培種培養(yǎng)料配方稱取各組分,攪拌均勻,用17×35×0.005(cm)的聚丙烯袋裝料,每袋裝料干重350 g,在126 ℃下滅菌2 h。待料溫降至28 ℃以下時接入1.3(3)節(jié)培養(yǎng)的原種,置于25 ℃下恒溫培養(yǎng)。每處理重復3次,每重復30袋。待菌絲滿袋后,培養(yǎng)料表面有黃色或白色小突起時,按常規(guī)方法進行出芝管理[9]。至靈芝邊緣變?yōu)辄S色或棕褐色,有少量孢子彈出時,開始收集孢子。將收集的孢子和采收的子實體烘干至恒重,統(tǒng)計兩潮靈芝產(chǎn)量和一潮孢子產(chǎn)量,并記錄子實體形態(tài)特征。

      (5)營養(yǎng)成分檢測。所有樣品均委托福建省農(nóng)業(yè)科學院生態(tài)研究所檢測。靈芝多糖含量檢測采用蒽酮-硫酸法,三萜含量檢測采用香草醛-高氯酸比色法。

      (6)優(yōu)良菌株的綜合分析。根據(jù)靈芝子實體和孢子的多糖含量、總?cè)扑岷考吧镛D(zhuǎn)化率,進行綜合分析評價,篩選出優(yōu)良菌株[10]。

      綜合評分=(多糖含量+總?cè)扑岷浚粒ㄗ訉嶓w生物轉(zhuǎn)化率+孢子生物轉(zhuǎn)化率)。

      1.4 數(shù)據(jù)分析

      所有數(shù)據(jù)均采用SPSS15.0系統(tǒng)進行整理和統(tǒng)計分析。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 葡萄枝蔓栽培的靈芝子實體形態(tài)與產(chǎn)量

      由表1可知,菌株GH8的子實體菌蓋紅褐色、厚,呈半圓形,菌柄無分枝;平均單袋產(chǎn)量較高,干重為30.3 g,比對照提高31.7%,與其他菌株比較,差異達極顯著水準;子實體生物轉(zhuǎn)化率為8.7%。韓芝H的子實體菌蓋紅褐色、較厚,呈腎形,菌柄無分枝;平均單袋產(chǎn)量較低,干重僅21.0 g,顯著低于其他7個菌株。

      靈芝孢子的平均單袋產(chǎn)量以GH8較高,為6.48 g,與盆芝、武芝、日赤3個菌株比較,差異達顯著水準,與其他菌株差異不顯著;以日赤較低,為4.38 g,與盆芝、武芝的差異不顯著,與其他菌株比較,差異達極顯著水準(表1)。孢子生物轉(zhuǎn)化率,以GH8較高,為1.85%;日赤較低,為1.25%。

      表1 葡萄枝蔓栽培的不同靈芝菌株子實體形態(tài)及產(chǎn)量比較

      注:同列數(shù)據(jù)后小寫字母不同表示差異顯著(<0.05),大寫字母不同表示差異極顯著(<0.01)。表2~4同。

      2.2 葡萄枝蔓栽培的靈芝子實體和孢子多糖含量

      2015《中國藥典》規(guī)定,靈芝多糖以無水葡萄糖計,不得少于0.9%。本試驗各樣品的含量均達到藥典標準,而各靈芝菌株的子實體多糖含量均低于其孢子的含量。其中,圓8子實體多糖含量較高,為1.79%,極顯著高于對照,而與武芝、日赤的差異則不顯著;美芝子實體多糖含量較少,僅為1.38%,除與對照和韓芝H的差異不顯著外,與其他5個菌株均有極顯著差異。GH8菌株的子實體多糖含量居中,為1.58%,與對照差異不顯著,與高含量的圓8和低含量的美芝比較,有極顯著差異;但其孢子多糖含量較高,為2.13%,與除圓8外的其他6個菌株差異均達顯著水準(表2)。

      表2 靈芝子實體和孢子的多糖含量

      2.3 葡萄枝蔓栽培的靈芝子實體和孢子三萜含量

      2015《中國藥典》規(guī)定,三萜及甾醇以齊墩果酸(C30H48O3)計,不得少于0.50%。本試驗各樣品的含量全部符合藥典標準,而不同靈芝菌株的子實體三萜含量均低于其孢子的含量。其中,GH8的子實體三萜含量較高,為1.37%,與對照和韓芝H的差異不顯著,與其他5個菌株均有極顯著差異;日赤的三萜含量較少,僅為0.52%,與其他菌株比較,差異達極顯著水準(表3)。

      GH8的孢子三萜含量也較高,為2.81%,比其子實體高出105%,與其他各菌株比差異顯著;日赤的孢子三萜含量較低,為1.68%,比其子實體高出223%。8個供試菌株的三萜含量,以日赤的子實體與孢子差異最大。

      表3 靈芝子實體和孢子三萜含量

      2.4 不同菌株的綜合分析評價

      以靈芝子實體和孢子的三萜含量、多糖含量及生物轉(zhuǎn)化率3個指標進行綜合分析的結(jié)果(表4),GH8綜合評分最高,為83.24,與其他7個菌株比較,差異極顯著,比對照高41.3%;日赤綜合評分最低,為43.99,與其他7個菌株的差異顯著,比對照低25%。各菌株綜合評分從高到低依次為:GH8>圓8>紅芝(CK)>美芝>武芝>盆芝>韓芝H>日赤。

      表4 不同靈芝菌株綜合評分結(jié)果

      3 小結(jié)與討論

      本試驗結(jié)果表明,一個好的靈芝品種不能只看單一性狀而要綜合測評各項指標。從表1~4看,除子實體多糖含量外,其他各項檢測指標均以GH8菌株表現(xiàn)較好。其子實體和孢子產(chǎn)量、生物轉(zhuǎn)化率、子實體和孢子的三萜含量,以及孢子多糖含量,在8個供試菌株中均居首位,綜合評分為83.24,也最高,與其他7個菌株比較,差異達極顯著。且GH8子實體和孢子中的活性成分多糖和三萜酸的含量均超出國家藥典規(guī)定的標準;經(jīng)多次試驗和檢測各項指標均保持較高的穩(wěn)定性,可作為葡萄枝屑栽培靈芝的優(yōu)良菌株作進一步試驗示范。葡萄枝屑富含白藜蘆醇[11],用葡萄枝屑栽培的靈芝是否也含有該活性成分有待進一步研究。

      不同靈芝菌株對葡萄枝浸出液的耐受力不同,須經(jīng)過不斷培養(yǎng)以提高其適應性,以便在栽培過程中增加葡萄枝屑添加量,減少木屑用量,為靈芝栽培開辟新的原料來源。

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      福建省科技廳項目(編號2018N0080)

      丁李春(1972—),男,高級農(nóng)藝師,主要從事食(藥)用菌研究與推廣工作。E-mail:dlc660188@126.com。

      S646

      B

      2095-0934(2021)02-148-04

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