荷葉化學(xué)成分研究

楊亞輝，吳昊旻，戚 進(jìn)

(中國(guó)藥科大學(xué) 中藥學(xué)院, 江蘇 南京 211198)

荷葉為睡蓮科植物蓮Nelumbo nuciferaGaertn.的干燥葉。夏、秋二季采收，曬至七八成干時(shí)，除去葉柄，折成半圓形或折扇形，干燥即得[1]。荷葉在我國(guó)分布范圍極廣，主要集中在黃河、長(zhǎng)江、珠江三大流域及淡水湖泊的淺水區(qū)，種質(zhì)資源豐富[2]。

荷葉始載于《食療本草》，化學(xué)成分主要為生物堿、黃酮、多糖、揮發(fā)性物質(zhì)等幾大類[3]，具有清暑化濕、升發(fā)清陽、散瘀止血的功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，荷葉具有降脂減肥、抑菌消炎、抗氧化、抗病毒、鎮(zhèn)靜、抗驚厥、護(hù)肝、抗骨質(zhì)疏松等生物學(xué)功能[3-6]。作為一種藥食俱佳的天然植物資源，荷葉也被廣泛應(yīng)用于食品及保健品等行業(yè)，1991 年荷葉已被列入中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)公布的藥食兩用和可用于保健食品的中藥名單中[7-8]。為進(jìn)一步豐富荷葉的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，更好地開發(fā)利用荷葉資源，本課題對(duì)荷葉75%乙醇提取物進(jìn)行了研究，其中，化合物10、12、14、15、20、21、23 為首次從該屬植物中分離得到，化合物9 為首次從荷葉中分離得到。

1 材料

1.1 儀器與試劑

島津LC-2010C HT 型高效液相色譜儀（日本島津公司）；Agilent 1260 Infinity 型半制備高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫科技公司）；Waters X-bridge 型色譜柱 （250 mm × 10 mm，5 μm，美國(guó)沃特世公司）；閃式層析柱（300 mm × 30 mm，北京欣維爾玻璃儀器公司）；Agilent 1260-6530 型HPLC-Q-TOF 液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)（美國(guó)安捷倫科技公司）；Beucker AV-300型核磁共振儀（德國(guó)布魯克科技有限公司）。

100 ～ 200 目、200 ～ 300 目、300 ～ 400 目柱層析硅膠（青島海洋化工廠）；薄層硅膠GF254（煙臺(tái)市化工研究所）；聚酰胺30 ～ 60 目（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；反相ODS 硅膠（日本維美希公司）；羥丙基葡聚糖凝膠Sephadex LH-20（日本三菱化學(xué)公司）；中壓色譜分離樹脂（MCI） （日本三菱化學(xué)公司）；試劑均為市售分析純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；高效液相用流動(dòng)相（甲醇、乙腈）為色譜純（德國(guó)默克公司）。

1.2 藥材

荷葉樣品于2017 年7 月購于安徽省亳州市，經(jīng)中國(guó)藥科大學(xué)中藥學(xué)院戚進(jìn)教授鑒定為睡蓮科植物蓮Nelumbo nuciferaGaertn.的干燥葉。

2 提取與分離

取干燥荷葉10 kg，加入10 倍量的75%乙醇回流提取3 次，每次1.5 h，合并提取液，減壓濃縮。濃縮液經(jīng)水分散后依次使用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、水飽和的正丁醇進(jìn)行萃取，最終將荷葉粗提物分為石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取部位，分別記為Fr.Ⅰ、Fr.Ⅱ、Fr.Ⅲ、Fr.Ⅳ。氯仿部位（Fr.Ⅱ）經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-二氯甲烷 = 100 ∶0 ～0 ∶100、二氯甲烷-甲醇 = 100 ∶0 ～ 1 ∶1）依次進(jìn)行洗脫，得到餾分Fr.Ⅱa-Fr.Ⅱh。

餾分Fr.Ⅱb 經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-乙酸乙酯 =100 ∶0 ～ 0 ∶100） 洗脫得到餾分Fr.Ⅱba -Fr.Ⅱbe。餾分Fr.Ⅱbb 利用硅膠柱色譜（石油醚-乙酸乙酯 = 20 ∶1）等度洗脫，得到化合物21 （200 mg），化合物22 （200 mg）。餾分Fr.Ⅱbc 經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-乙酸乙酯 = 10 ∶1）等度洗脫，得到5 個(gè)餾分Fr.Ⅱbca-Fr.Ⅱbcd。Fr.Ⅱbcb 經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，純化得到化合物5 （20 mg）。Fr.Ⅱbcc 經(jīng)ODS 柱色譜（90%甲醇）洗脫，得到化合物11 （5 mg）。餾分Fr.Ⅱbd 與Fr.Ⅱbe 分別經(jīng)ODS 柱色譜 （90%甲醇）等度洗脫，得到化合物6 （8 mg）、20 （4 mg）、23 （2 mg）。

餾 分Fr. Ⅱd 利 用MCI 柱 色 譜（甲 醇- 水 =0 ∶100 ～ 100 ∶0）梯度洗脫，得到餾分Fr.Ⅱda-Fr.Ⅱde。Fr.Ⅱdd通過重結(jié)晶得到化合物1 （500 mg）。餾分Fr.Ⅱdc 經(jīng)硅膠柱色譜（二氯甲烷-甲醇 =100 ∶1 ～ 1 ∶1）梯度洗脫，得到餾分Fr.Ⅱdca-Fr.Ⅱdce。餾分Fr.Ⅱdcc 與Fr.Ⅱdcd 經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，得到化合物3 （20 mg）、2 （25 mg）。餾分Fr.Ⅱdce 采用硅膠柱色譜（二氯甲烷-甲醇 =30 ∶1）等度洗脫，再重結(jié)晶得到化合物9 （14 mg）。餾分Fr.Ⅱde 經(jīng)ODS 柱色譜 （甲醇-水 = 60 ∶40）洗脫，得到化合物15 （8 mg）。

餾 分Fr. Ⅱe 使 用MCI 柱 色 譜（甲 醇- 水=0 ∶100 ～ 100 ∶0）梯度洗脫，得到餾分Fr.Ⅱea-Fr.Ⅱee。餾分Fr.Ⅱeb 經(jīng)硅膠柱色譜（二氯甲烷-甲醇= 100 ∶1 ～ 1 ∶1）洗脫，得到餾分Fr.Ⅱeba-Fr.Ⅱebe。Fr.Ⅱebb 用甲醇溶解后，上樣于Sephadex LH-20，甲醇等度洗脫，得到化合物4（40 mg）、7（35 mg）。Fr. Ⅱebc 與Fr. Ⅱebd 經(jīng)pHPLC（ 甲醇-水= 40 ∶60 ～ 60 ∶40）梯度洗脫得到化合物8（10 mg）、10（30 mg）。餾分Fr.Ⅱec 采用pHPLC（甲醇-水= 60 ∶40）洗脫得到化合物12（5 mg）。餾分Fr.Ⅱee 經(jīng)ODS 柱色譜（甲醇-水= 10 ∶90 ～70 ∶30）洗脫，得到化合物13（5 mg）、14（10 mg）。

乙酸乙酯部位經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-二氯甲烷= 100 ∶0 ～ 0 ∶100，二氯甲烷-甲醇= 100 ∶0 ～1 ∶1）依次梯度洗脫，得到餾分Fr.Ⅲa-Fr.Ⅲf。餾分Fr.Ⅲd 經(jīng)MCI 柱色譜（甲醇-水= 0 ∶100 ～100 ∶0），再經(jīng)硅膠柱色譜（二氯甲烷-甲醇=30 ∶1 ～ 1 ∶1）洗脫，最后通過Sephadex LH-20柱色譜得到化合物16（40 mg）、19（25 mg）。餾分Fr. Ⅲf 經(jīng)MCI 柱 色 譜（甲 醇- 水= 0 ∶100 ～100 ∶0），ODS 柱 色 譜（ 甲 醇- 水= 10 ∶90 ～100 ∶0），pHPLC 純化得到化合物18 （15 mg）。

正丁醇部位經(jīng)MCI 柱（甲醇-水= 0 ∶100 ～70 ∶30），薄層色譜檢識(shí)合并為餾分Fr. Ⅳa-Fr. Ⅳe。Fr. Ⅳa 經(jīng) 硅 膠 柱 （二 氯 甲 烷- 甲 醇=10 ∶1 ～ 1 ∶1），薄層色譜檢測(cè)合并為餾分Fr.Ⅳaa-Fr.Ⅳad，餾分Fr.Ⅳac 經(jīng)ODS 柱、pHPLC 純化得到化合物17（40 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 白色結(jié)晶，易溶于氯仿。碘化鉍鉀顯色劑顯色呈橘紅色斑點(diǎn)，推斷其為生物堿類化合物。HR-ESI-MS m/z：296.165 4 [M+H]+（計(jì)算值：296.164 5），確定該化合物分子式為C19H21NO2。1H-NMR （300 MHz, DMSO-d6） δH：6.77 （1H, s,H-3），7.19 ～ 7.32 （3H, m, H-8, 9, 10），8.17 （1H, d,J= 7.3 Hz, H-11），3.57 （3H, s, 1-OCH3），3.81 （3H,s, 2-OCH3），2.42 （3H, s, 6-NCH3）；13C-NMR （75 MHz, DMSO-d6） δC: 144.43（C-1），151.5（C-2），111.87（C-3），28.64（C-4），52.54（C-5），34.36（C-7），127.98（C-8），127.52（C-9），127.19（C-10），127.98（C-11），125.76（C-1a），128.73（C-1b），127.60（C-3a），61.90（C-6a）， 136.34（C-7a），131.56（C-11a），59.61（1-OCH3），55.63（2-OCH3），43.52（6-NCH3），與文獻(xiàn)[9]的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比基本一致，鑒定其為荷葉堿（nuciferine）。

化合物2 黃色粉末，易溶于三氯甲烷。碘化鉍鉀顯色劑顯色呈橘紅色斑點(diǎn)，推斷其為生物堿類化合物。HR-ESI-MS m/z：282.150 3 [M+H]+（計(jì)算值：282.148 9），確定該化合物分子式為C18H19NO2。

1H-NMR （300 MHz, CDCl3） δH：6.59（1H, s, H-3），2.58 （2H, t,J= 13.3 Hz, H-4），3.01 （2H, m, H-5），2.96（2H, m, H-7），7.14 ～ 7.24 （3H, m, H-8, 9, 10），8.19（1H, d,J= 7.9 Hz, H-11），3.49 （3H, s, 1-OCH3），2.46（3H, s, 6-NCH3）；13C-NMR （75 MHz, CDCl3） δC：143.19（C-1），148.39（C-2），114.31（C-3），28.88（C-4），53.48（C-5），34.98（C-7），128.20（C-8），127.65（C-9），125.90（C-10），127.65（C-11），127.45（C-1a），127.33（C-1b），127.45（C-3a），62.47（C-6a），136.45（C-7a），132.00（C-11a），60.49（1-OCH3），43.93（6-NCH3），與文獻(xiàn)[10]的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比基本一致，鑒定為2-羥基-1-甲氧基阿樸菲（2-hydroxy-1-methoxyaporphine）。

化合物3 黃色粉末，易溶于三氯甲烷。碘化鉍鉀顯色劑顯色呈橘紅色斑點(diǎn)，推斷其為生物堿類化合物。HR-ESI-MS m/z：282.150 2 [M+H]+（計(jì)算值：282.148 9），確定該化合物分子式為C18H19NO2。1H-NMR （300 MHz, CDCl3） δH：6.57（1H, s, H-3） ，7.14 ～ 7.26 （3H, m, H-8, 9, 10）， 8.31（1H, d,J= 7.7 Hz, H-11），3.95 （1H, s, H-6a），3.60（3H, s, 1-OCH3），3.81 （3H, s, 2-OCH3）；13C-NMR（75 MHz, CDCl3） δC：144.06（C-1），151.17（C-2），110.87（C-3），27.49（C-4），41.82（C-5），35.86（C-7），127.81（C-8），126.86（C-9），127.45（C-10），126.49（C-11），126.12（C-1a），131.09（C-1b），127.90（C-3a），52.48（C-6a），134.64（C-7a），133.34（C-11a），59.25（1-OCH3），54.95（2-OCH3），與文獻(xiàn)[11]的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比基本一致，鑒定為N-去甲荷葉堿（N-nornuciferine）。

化合物4 白色結(jié)晶，易溶于甲醇。碘化鉍鉀顯色劑顯色呈橘紅色斑點(diǎn)，推斷其為生物堿類化合物。HR-ESI-MS m/z：268.134 3 [M+H]+（計(jì)算值：268.133 2），確定該化合物分子式為C17H17NO2。1H-NMR （300 MHz, DMSO-d6） δH：6.70（1H, s,H-3），7.20-7.30 （3H, m, H-8, 9, 10）， 8.31 （1H, d,J= 7.7 Hz, H-11），3.53 （3H, s, 1-OCH3）；13C-NMR（75 MHz, DMSO-d6） δC：144.67（C-1），150.72（C-2），115.68（C-3），24.50（C-4），40.13（C-5），32.98（C-7），127.45（C-8），127.67（C-9），127.77（C-10），128.22（C-11），125.70（C-1a），120.49（C-1b），126.50（C-3a），51.68（C-6a），133.44（C-7a），131.33（C-11a），59.49（1-OCH3），與文獻(xiàn)[12]的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比基本一致，鑒定為巴婆堿（asimilobine）。

化合物5 黃色結(jié)晶，易溶于三氯甲烷。碘化鉍鉀顯色劑顯色呈橘紅色斑點(diǎn)，推斷其為生物堿類化合物。HR-ESI-MS m/z：294.145 5 [M+H]+（計(jì)算值：294.148 9），確定該化合物分子式為C19H19NO2。1H-NMR （300 MHz, CDCl3） δH：7.07（1H, s, H-3），3.32 （2H, dd,J= 12.1, 6.0 Hz, H-4），3.42 （2H, dd,J=12.1, 6.0 Hz, H-5），6.66 （1H, s, H-7），9.52 （1H, d,J=7.4 Hz, H-8），7.40 （1H, m, H-9），7.50 （1H, t,J=7.4 Hz, H-10）， 7.70 （1H, d,J= 7.4 Hz, H-11），4.06（3H, s, 1-OCH3），3.95 （3H, s, 2-OCH3），3.14 （3H,s, 6-NCH3）；13C-NMR （75 MHz, CDCl3） δC：145.94（C-1），151.21（C-2），111.60（C-3），31.32（C-4），59.88（C-5），126.49（C-7），126.93（C-8），124.66（C-9），124.52（C-10），126.93（C-11），119.43（C-1a），125.93（C-1b），127.89（C-3a），123.62（C-6a），135.08（C-7a），129.48（C-11a），56.55（1-OCH3），50.53（2-OCH3），40.57（6-NCH3），與文獻(xiàn)[10]的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比基本一致，鑒定為去氫荷葉堿（dehydronuciferine）。

化合物6 紫色粉末，易溶于三氯甲烷。碘化鉍鉀顯色劑顯色呈橘紅色斑點(diǎn)，推斷其為生物堿類化合物。HR-ESI-MS m/z：280.133 2 [M+H]+（計(jì)算值：280.133 2），確定該化合物分子式為C18H17NO2。

1H-NMR （300 MHz, CDCl3） δH：6.96 （1H, s, H-3），3.16 （2H, t,J= 6.1 Hz, H-4），3.29 （2H, t,J= 6.1 Hz,H-5,），6.53 （1H, s, H-7），7.58 （1H, d,J= 7.7 Hz,H-8），7.38 （1H, t,J= 7.7 Hz, H-9）， 7.25（1H, t,J=7.7 Hz, H-10）， 9.12 （1H, d,J= 7.7 Hz, H-11），3.74（3H, s, 1-OCH3），3.01 （3H, s, 6-NCH3）；13C-NMR（75 MHz, CDCl3） δC：142.63（C-1），146.63（C-2），112.89（C-3），29.82（C-4），49.34（C-5），35.86（C-7），125.36（C-8），125.36（C-9），121.45（C-10），125.80（C-11），123.66（C-1a），117.88（C-1b），127.90（C-3a），141.38（C-6a），133.84（C-7a），122.40（C-11a），59.06（1-OCH3），39.40（6-NCH3），與文獻(xiàn)[13]的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比基本一致，鑒定為睡蓮堿（nelumnucine）。

化合物7 白色結(jié)晶，易溶于甲醇。碘化鉍鉀顯色劑顯色呈橘紅色斑點(diǎn)，推斷其為生物堿類化合物。HR-ESI-MS m/z：314.176 7 [M+H]+（ 計(jì) 算 值：314.175 1），確定該化合物分子式為C19H23NO3。1H-NMR （300 MHz, CD3OD） δH：4.63 （1H, dd,J= 9.9,4.5 Hz, H-1），6.90 （1H, s, H-5），6.04 （1H, s, H-8），6.85 （1H, d,J= 8.1 Hz, H-3,），6.85 （1H, d,J= 8.1 Hz,H-5,），3.57 （3H, s, H-8a），3.56 （3H, s,6-OCH3），3.90（3H, s, 7-OCH3），3.07（3H, s, 2-NCH3）；13C-NMR（75 MHz, CD3OD） δC：63.94（C-1），44.23（C-3），20.97（C-4），111.58（C-5），146.41（C-6），148.30（C-7），111.26（C-8），130.87（C-1'），126.04（C-2'），115.19（C-3'），156.41（C-4'），115.19（C-5'），126.04（C-6'），39.32（C-α），121.51（C-4a），121.85（C-8a），55.48（6-OCH3），54.80（7-OCH3），與文獻(xiàn)[14]的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比基本一致，鑒定為杏黃罌粟堿（armepavine）。

化合物8 黃色粉末，易溶于甲醇。遇碘化鉍鉀顯橘紅色，推斷其為生物堿類化合物。HR-ESIMS m/z：300.161 6 [M+H]+（計(jì)算值：300.159 4），確定該化合物分子式為C18H21NO3。1H-NMR （300 MHz, CD3OD） δH：4.14 （1H, t,J= 6.6 Hz, H-1），3.26（1H, m, H-3a），2.80 （1H, m, H-3b），2.94 （1H, m,H-4），6.73 （1H, s, H-5），6.65 （1H, s, H-8），7.12 （1H,d,J= 8.2 Hz, H-2'），6.82 （1H, d,J= 8.2 Hz, H-3'），6.82 （1H, d,J= 8.2 Hz, H-5'），7.12 （1H, d,J= 8.2 Hz,H-6'），3.16 （1H, dd,J= 13.8, 6.0 Hz, H-αa），2.80 （1H,m, H-αb），3.75 （3H, s, 6-OCH3）；13C-NMR（75MHz,CD3OD） δC：57.98（C-1），42.46（C-3），29.48（C-4），113.42（C-5），148.44（C-6），149.14（C-7），111.73（C-8），130.60（C-1'），131.55（C-2'），116.46（C-3'），157.25（C-4'），116.46（C-5'），131.55（C-6'），40.95（C-α），128.24（C-4a），131.12（C-8a），56.48（6-OCH3），56.44（7-OCH3）。與文獻(xiàn)[15]的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比，鑒定為N-去甲杏黃罌粟堿（N-norarmepavine）。

化合物9 黃色粉末，易溶于甲醇。遇碘化鉍鉀顯橘紅色，推斷其為生物堿類化合物。HR-ESIMS m/z：286.144 2 [M+H]+（計(jì)算值：286.143 8），確定該化合物分子式為C17H19NO3。1H-NMR （300 MHz, CD3OD） δH：4.08（1H, t,J= 6.9 Hz, H-1）, 3.18（1H, m, H-3a），2.86 （1H, m, H-3b），2.68 （1H, m,H-4），6.54（1H, s, H-5），6.54（1H, s, H-8），7.05（1H, d,J= 8.0 Hz, H-2'），6.76 （1H, d,J= 8.0 Hz,H-3'），6.76 （1H, d,J= 8.0 Hz, H-5'），7.05 （1H, d,J= 8.0 Hz, H-6'），3.10 （1H, dd,J= 13.8, 5.7 Hz, H-αa ），2.86 （1H, m, H-αb），3.70 （3H, s, 7-OCH3）；13C-NMR （75 MHz, CD3OD） δC：57.99（C-1），42.39（C-3），29.05（C-4），116.33（C-5），146.23（C-6），147.20（C-7），111.28（C-8），129.45（C-1'），130.47（C-2'），116.49（C-3'），157.22（C-4'），116.49（C-5'），130.47（C-6'），40.93（C-α），128.00（C-4a），131.56（C-8a），56.40（7-OCH3）。與文獻(xiàn)[16]的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比，鑒定為異衡州烏藥堿（isococlaurine）。

化合物10 黃色粉末，易溶于甲醇。遇碘化鉍鉀顯橘紅色，推斷其為生物堿類化合物。HR-ESIMS m/z：312.162 5 [M+H]+（計(jì)算值：312.159 4），確定該化合物分子式為C19H21NO3。1H-NMR （300 MHz, CD3OD） δH：6.84 （1H, s, H-3） ，3.10 （1H, d,J= 5.3 Hz, H-4a），2.91 （1H, t,J= 12.9 Hz, H-4b），3.63 （1H, dd,J= 12.9, 5.3 Hz, H-5a），3.55 （1H, dd,J= 12.9, 5.3 Hz, H-5b），4.32 （1H, dd,J= 14.3, 3.6 Hz,H-7），7.37 （1H, d,J= 8.0 Hz, H-8），7.25-7.32 （2H,m, H-9, 10），8.25 （1H, d,J= 8.0 Hz, H-11），3.73 （1H,dd,J= 12.2, 6.3 Hz, H-6a），3.87 （3H, s, 1-OCH3），3.66（3H, s, 2-OCH3），3.07 （3H, s, 6-NCH3）；13C-NMR（75 MHz, CD3OD） δC：147.49（C-1），154.98（C-2），112.52（C-3），28.05（C-4），49.85（C-5），75.88（C-7），128.14（C-8），128.57（C-9），129.26（C-10），129.29（C-11），123.83（C-1a），126.35（C-1b），129.31（C-3a），67.77（C-6a），134.80（C-7a），132.54（C-11a），60.73（1-OCH3），56.43（2-OCH3），49.30（6-NCH3）。與文獻(xiàn)[12]的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比，鑒定為nuciferidine。

化合物11 黃色粉末，易溶于甲醇。遇碘化鉍鉀顯橘紅色，推斷其為生物堿類化合物。HR-ESIMS m/z：292.098 0 [M+H]+（計(jì) 算 值：292.096 8），確定該化合物分子式為C18H13NO3。1H-NMR （300 MHz, CDCl3） δH：7.17 （1H, s, H-3），7.74 （1H, d,J=5.2 Hz, H-4），8.85 （1H, d,J= 5.2 Hz, H-5），8.53（1H, dd,J= 7.5, 1.4 Hz, H-8），7.52 （1H, t,J= 7.5 Hz, H-9），7.71 （1H, m, H-10），9.12 （1H, d,J=7.5 Hz, H-11），4.04 （3H, s, 1-OCH3），3.96 （3H, s,2-OCH3）；13C-NMR （75MHz, CDCl3） δC：145.24（C-1），157.03（C-2），106.62（C-3），123.71（C-4），145.24（C-5），182.87（C-7），128.60（C-8），128.9（C-9），134.48（C-10），129.08（C-11），120.08（C-1a），122.39（C-1b），135.69（C-3a），152.23（C-6a），129.87（C-7a），132.31（C-11a），60.83（1-OCH3），56.38（2-OCH3）。與文獻(xiàn)[17]的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比，鑒定為觀音蓮明堿（lysicamine）。

化合物12 黃色粉末，易溶于甲醇。遇碘化鉍鉀顯橘紅色，推斷其為生物堿類化合物。HR-ESIMS m/z：296.164 5 [M+H]+（計(jì) 算 值：296.164 5），確定該化合物分子式為C19H21NO2。1H-NMR （300 MHz, DMSO-d6） δH：7.44 （1H, brs, H-2），9.50 （1H,dd,J= 8.7 Hz, H-5），7.57 （1H, m, H-6），7.57 （1H,m, H-7），7.65 （1H, d,J= 8.7 Hz, H-8），7.87-7.97（2H, m, H-9, 10），3.94 （3H, s, 3-OCH3），3.79 （3H, s,4-OCH3），2.48 （3H, s, β-NCH3），3.37 （2H, m, H-α），3.07 （2H, m, H-β）；13C-NMR （75MHz, DMSO-d6）δC：129.32（C-1）， 115.74（C-2）， 150.63（C-3），145.48（C-4），122.40（C-5），126.65（C-6），126.54（C-7），125.56（C-8），128.21（C-9），127.33（C-10），125.42（C-1a），124.22（C-1b），132.39（C-5a），130.89（C-8a），56.32（3-OCH3），59.23（4-OCH3），49.50（β-NCH3），62.79（C-α），32.78（C-β）。與文獻(xiàn)[18]的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比，鑒定為N-去甲基芒籽寧（N-noratherosperminine）。

化合物13 黃色粉末，易溶于甲醇。遇碘化鉍鉀顯橘紅色，推斷其為生物堿類化合物。HR-ESIMS m/z：298.145 5 [M+H]+（計(jì)算值：298.143 8），確定該化合物分子式為C18H19NO3。1H-NMR （300 MHz, CD3OD） δH：6.82 （1H, s, H-3），3.12 （2H, m,H-4），2.60 （1H, dd,J= 11.1, 6.3 Hz, H-7a），2.46（1H, t,J= 11.1 Hz, H-7b），7.01 （1H, dd,J= 10.1, 2.7 Hz, H-8），6.39 （1H, d,J= 10.1 Hz, H-9），6.30 （1H,d, J = 10.1 Hz, H-11），7.13 （1H, dd,J= 10.1, 2.7 Hz,H-12），3.85 （3H, s, 2-OCH3），2.84 （3H, s, 6-NCH3）；13C-NMR （75 MHz, CD3OD） δC：143.93（C-1），151.00（C-2），111.48（C-3），26.21（C-4），56.99（C-5），45.21（C-7），155.29（C-8），129.49（C-9），188.31（C-10），128.24（C-11），152.53（C-12），125.67（C-1a），128.24（C-1b），127.89（C-3a），66.52（C-6a），51.95（C-7a），56.99（2-OCH3）。與文獻(xiàn)[19]的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比，鑒定為glaziovine。

化合物14 棕色固體，易溶于甲醇。遇碘化鉍鉀顯橘紅色，推斷其為生物堿類化合物。HR-ESIMS m/z：310.181 7 [M]+（計(jì)算值：310.180 2），確定該化合物分子式為C20H24NO2+。1H-NMR （300 MHz,CDCl3） δH：6.70 （1H, s, H-3），7.38 （1H, d,J= 8.1 Hz, H-8），7.19-7.29 （2H, m, H-9, 10），8.25 （1H, d,J= 8.1 Hz, H-11），3.88 （3H, s, 1-OCH3），3.66 （3H,s, 2-OCH3），3.26 （3H, s, 6α-NCH3），3.78 （3H, s,6β-NCH3）；13C-NMR （75 MHz, CDCl3） δC：146.72（C-1），154.07（C-2），111.34（C-3），24.29（C-4），61.13（C-5），30.10（C-7），128.57（C-8），128.64（C-9），128.53（C-10），128.27（C-11），127.27（C-1a），119.82（C-1b），124.64（C-3a），69.55（C-6a），131.72（C-7a），130.94（C-11a），60.59（1-OCH3），56.14（2-OCH3），43.32（6α-NCH3），54.17（6β-NCH3） 與 文 獻(xiàn)[20] 的NMR 數(shù) 據(jù) 對(duì)比，鑒定為5,6,6a,7-tetrahydro-1,2-dimethoxy-6,6-dimethyl-4H-dibenzo[de,g]quinolinium。

化合物15 紅色粉末，易溶于三氯甲烷。遇碘化鉍鉀顯橘紅色，推斷其為生物堿類化合物。HRESI-MS m/z：334.106 9 [M+H]+（計(jì)算值：334.107 4），確定該化合物分子式為C20H15NO4。1H-NMR （300 MHz, CDCl3） δH：7.17 （1H, s, H-3），3.35 （2H, t,J= 6.1 Hz, H-5），8.64 （1H, d,J= 7.7 Hz, H-8），7.51 （1H, t,J= 7.7 Hz, H-9），7.64 （1H, t,J= 7.7 Hz, H-10），9.42（1H, d,J= 7.7 Hz, H-11），4.10 （3H, s, 1-OCH3），3.95（3H, 2-OCH3）；13C-NMR （75 MHz, CDCl3） δC：146.82（C-1），157.29（C-2），112.45（C-3）， 27.83（C-4）， 36.67（C-5），103.35（C-7），123.90（C-8），130.88（C-9），125.76（C-10），128.47（C-11），160.48（C-12），180.13（C-13），129.88（C-1a），112.34（C-1b），129.52（C-3a），153.51（C-6a），127.72（C-7a），126.03（C-11a），60.12（1-OCH3），56.75（2-OCH3）。與文獻(xiàn)[21]的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比，鑒定為telisatin A。

化合物16 黃色粉末，易溶于甲醇。遇三氯化鐵顯墨綠色，Molish 反應(yīng)呈陰性，推斷其為黃酮苷元類化合物。HR-ESI-MS m/z：301.036 3 [M-H]-（計(jì)算值：301.038 1），確定該化合物分子式為C15H10O7。

1H-NMR （300 MHz, CD3OD） δH：6.18 （1H, d,J= 1.8 Hz, H-6），6.39 （1H, d,J= 1.8 Hz，H-8），7.74 （1H, d,J= 2.0 Hz, H-2'），6.89 （1H, d,J= 8.8 Hz, H-5'），7.65（1H, dd,J= 8.8, 2.0 Hz，H-6'）；13C-NMR （75 MHz,CD3OD） δC：147.98（C-2），137.24（C-3），177.33（C-4），162.50（C-5），99.24（C-6），165.57（C-7），94.41（C-8），158.22（C-9），104.52（C-10），124.15（C-1'），115.99（C-2'），146.21（C-3'），148.75（C-4'）， 116.21（C-5'），121.67（C-6'）。與文獻(xiàn)[22] 的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比，鑒定為槲皮素（quercetin）。

化合物17 黃色粉末，易溶于甲醇。遇三氯化鐵顯墨綠色，Molish 反應(yīng)呈陽性，推斷其為黃酮苷 類 化 合 物。HR-ESI-MS m/z：609.1445 [M-H]-（計(jì)算值：609.142 9），確定該化合物分子式為C27H30O16。1H-NMR （300 MHz, CD3OD）δH：6.28 （1H,d,J= 2.1 Hz, H-6），6.47 （1H, d,J= 2.1 Hz, H-8），7.74 （1H, d,J= 2.1 Hz, H-2'），6.95 （1H, d,J= 8.3 Hz,H-5'），7.70 （1H, dd,J= 8.3, 2.1 Hz, H-6'），5.17 （1H,d,J= 7.8 Hz, H-1''），4.59 （1H, s, H-1'''），1.19 （3H,d,J= 6.3 Hz, H-6'''）；13C-NMR （75 MHz, CD3OD）δC：158.49（C-2），135.61（C-3），179.39（C-4），162.93（C-5），99.99（C-6），166.03（C-7），94.91（C-8），159.34（C-9），105.63（C-10），123.14（C-1'），116.09（C-2'），145.82（C-3'），149.78（C-4'），117.72（C-5'），123.57（C-6'），104.68（C-1''），75.72（C-2''），78.18（C-3''），71.41（C-4''），77.20（C-5''），68.56（C-6''），102.40（C-1'''），72.26（C-2''''），72.08（C-3'''）， 73.94（C-4'''），69.70（C-5'''），17.86（C-6'''）。與文獻(xiàn)[22]的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比，鑒定為蘆?。╮utin）。

化合物18 黃色粉末，易溶于甲醇。遇三氯化鐵顯墨綠色，Molish 反應(yīng)呈陽性，推斷其為黃酮苷類化合物。HR-ESI-MS m/z：463.088 4 [M-H]-（計(jì)算值：463.090 9），確定該化合物分子式為C21H20O12。1H-NMR （300 MHz, DMSO-d6） δH：6.24（1H, d,J= 1.5 Hz, H-6），6.44 （1H, d,J= 1.5 Hz,H-8），7.56 （1H, d,J= 1.6 Hz, H-2'），6.85（1H, d,J= 8.1 Hz, H-5'），7.70（1H, dd,J= 8.1, 1.6 Hz, H-6'），5.40 （1H, d,J= 7.4 Hz, H-1''），12.65 （1H, s, 5-OH），4.82 （1H, d,J= 5.9 Hz, Glc-OH）， 4.43 （1H, d,J= 5.9 Hz, Glc-OH），4.40 （1H, d,J= 5.0 Hz, Glc-OH）；13C-NMR （75 MHz, DMSO-d6） δC：156.20（C-2），133.47（C-3），177.45（C-2），161.19（C-5），98.47（C-6），164.01（C-7），93.43（C-8），156.25（C-9），103.89（C-10），121.94（C-1'），115.13（C-2'），144.31（C-3'），148.05（C-4'），115.92（C-5'），121.07（C-6'），101.80（C-1''），71.17（C-2''），73.16（C-3''），67.88（C-4''），75.79（C-5''），60.09（C-6''）。與文獻(xiàn)[23]的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比，鑒定為異槲皮苷（isoquercitrin）。

化合物19 黃色粉末，易溶于甲醇。遇三氯化鐵顯墨綠色，Molish 反應(yīng)呈陰性，推斷其為黃酮苷元類化合物。HR-ESI-MS m/z：285.040 3[M-H]-（計(jì)算值：285.043 1），確定該化合物分子式為C15H10O6。1H-NMR （300 MHz, CD3OD） δH：6.13（1H, d,J= 2.1 Hz, H-6），6.45 （1H, d,J= 2.1 Hz,H-8），8.14 （1H, d,J= 8.9 Hz, H-2'），6.95 （1H, d,J=8.9 Hz, H-3'），6.95 （1H, d,J= 8.9 Hz, H-5'），8.14 （1H,d,J= 8.9 Hz, H-6'）；13C-NMR （75 MHz, CD3OD）δC：157.98（C-2），136.98（C-3），177.10（C-4），162.21（C-5），98.99（C-6），165.27（C-7），94.19（C-8），157.98（C-9），104.27（C-10），124.14（C-1'），130.79（C-2'），116.35（C-3'），160.45（C-4'），116.40（C-5'），131.20（C-6'）。與文獻(xiàn)[22]的NMR數(shù)據(jù)對(duì)比，鑒定為山柰酚（kaempferol）。

化合物20 黃色粉末，易溶于三氯甲烷。遇三氯化鐵顯墨綠色，Molish 反應(yīng)呈陰性，推斷其為黃酮苷元類化合物。HR-ESI-MS m/z：299.092 4[M+H]+（計(jì)算值：299.094 1），確定該化合物分子式為C17H14O5。1H-NMR （300 MHz, CDCl3） δH：6.60（1H, s, H-3），6.39 （1H, d,J= 2.2 Hz, H-6），6.51（1H, d,J= 2.2 Hz, H-8），7.86 （1H, d,J= 8.7 Hz,H-2'），7.04 （1H, d,J= 8.7 Hz, H-3'），7.04 （1H, d,J= 8.7 Hz, H-5'），7.86 （1H, d,J= 8.7 Hz, H-6'），3.91（3H, s, 7-OCH3），3.90 （3H, s, 4'-OCH3），12.82 （1H, s,5-OH）；13C-NMR （75 MHz, CDCl3） δC：162.20（C-2），104.55（C-3），182.62（C-4），162.37（C-5），98.20（C-6），165.49（C-7），92.80（C-8），157.88（C-9），104.55（C-10），123.77（C-1'），128.21（C-2'），114.67（C-3'），162.76（C-4'），114.67（C-5'），128.21（C-6'），55.94（7-OCH3），55.64（4'-OCH3）。與文獻(xiàn)[24]的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比，鑒定為芹菜素-7,4'-二甲醚（apigenin-7,4'-dimethy ether）。

化合物21 白色粉末，易溶于吡啶。HRESI-MS m/z：453.343 7 [M+H]+（計(jì)算值：453.344 9），確定該化合物分子式為C31H64O。1H-NMR （300 MHz, C5D5N） δH：3.91 （1H, brs），1.74 （4H, brs），1.41（52H, brs）， 0.96 （6H, dd,J= 6.7, 5.2 Hz, -CH3）；13C-NMR （75 MHz, C5D5N） δC：39.01（-CH2），32.69，30.82，30.80，30.62，30.60，30.55，30.47，30.46，30.14，26.90 為其余亞甲基的碳信號(hào)。與文獻(xiàn)[25]的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比，鑒定為16-三十一烷醇（16-hentriacontanol）。

化合物22 白色結(jié)晶，易溶于三氯甲烷。以β-谷甾醇為對(duì)照品，使用3 種展開系統(tǒng)展開，10%硫酸香草醛105℃加熱，結(jié)果在與對(duì)照品相應(yīng)的位置顯相同的紫紅色斑點(diǎn)，故鑒定為β-谷甾醇（β-sitosterol）。

化合物23a 黃色粉末，易溶于三氯甲烷。遇碘化鉍鉀顯橘紅色，推斷其為生物堿類化合物。HRESI-MS m/z：310.142 9 [M+H]+（計(jì)算值：310.143 8），確定該化合物分子式為C19H19NO3。1H-NMR （300 MHz, CDCl3） δH：6.71 （1H, s, H-3），3.21 （2H, m,H-4），3.47 （1H, d,J= 12.5 Hz, H-7a），2.98 （1H, d,J= 12.5 Hz, H-7b），8.44-8.50 （2H, m, H-8, 11），7.34-7.41 （2H, m, H-9, 10），3.96 （3H, s, 1-OCH3），3.73 （3H, s, 2-OCH3），8.32 （1H, s, -CHO）；13C-NMR （75 MHz, CDCl3） δC：146.20（C-1），152.54（C-2），111.65（C-3），31.14（C-4），42.21（C-5），34.26（C-7），127.99（C-8），128.05（C-9），128.59（C-10），128.77（C-11），127.27（C-1a），129.66（C-1b），125.46（C-3a），49.59（C-6a），136.28（C-7a），131.59（C-11a），56.16（1-OCH3），60.21（2-OCH3），162.29（-CHO）。與 文 獻(xiàn)[26]的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比，鑒定為N-formylnornuciferine（Z）。

化合物23b 黃色粉末，易溶于三氯甲烷。遇碘化鉍鉀顯橘紅色，推斷其為生物堿類化合物。HRESI-MS m/z：310.142 9 [M+H]+（計(jì)算值：310.143 8），確定該化合物分子式為C19H19NO3。1H-NMR （300 MHz, CDCl3） δH：6.71 （1H, s, H-3），3.21 （2H, m,H-4），3.47 （1H, d,J= 12.5 Hz, H-7a），2.98 （1H, d,J=12.5 Hz, H-7b），8.44-8.50 （2H, m, H-8, 11），7.34-7.41 （2H, m, H-9, 10），3.96 （3H, s, 1-OCH3），3.73（3H, s, 2-OCH3），8.32 （1H, s, -CHO）；13C-NMR （75 MHz, CDCl3） δC：146.20（C-1），152.77（C-2），111.94（C-3），29.79（C-4），36.28（C-5），38.11（C-7），127.68（C-8），128.31（C-9），128.70（C-10），128.85（C-11），127.27（C-1a），129.66（C-1b），125.46（C-3a），53.65（C-6a），135.59（C-7a），131.78（C-11a），56.16（1-OCH3），60.21（2-OCH3），162.09（-CHO）。與文獻(xiàn)[26]的NMR 數(shù)據(jù)對(duì)比，鑒定為N-formylnornuciferine（E）。

4 討論

本研究從荷葉中共分離鑒定了23 個(gè)化合物，多數(shù)為阿樸菲類和單芐基異喹啉類生物堿成分。其中，化合物9 為首次從荷葉中分離得到，相關(guān)研究表明其具有較好的神經(jīng)阻斷與平滑肌松弛[27-28]等生物活性，該研究為荷葉在鎮(zhèn)靜止痙、降脂、降壓等方面的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供了數(shù)據(jù)補(bǔ)充與理論依據(jù)。

首次從蓮屬中分離得到的7 個(gè)化合物，主要為阿樸菲類生物堿成分，與該屬植物所含的次生代謝產(chǎn)物相符，提示以生物堿類成分作為該屬特征成分具有一定的科學(xué)依據(jù)。結(jié)合目前這類化合物在抗瘧疾、抗病毒、抗風(fēng)濕及抗乙酰膽堿酯酶[29]等多種藥理活性方面的研究，后期將對(duì)每個(gè)單體成分的相關(guān)生物活性進(jìn)行探討與驗(yàn)證。

對(duì)荷葉化合物的分離流程進(jìn)行總結(jié)，發(fā)現(xiàn)大部分化合物來自氯仿萃取部位，對(duì)荷葉的乙酸乙酯與正丁醇萃取部位的化學(xué)成分研究尚不充足，僅分離得到4個(gè)黃酮類成分，考慮到黃酮類成分具有調(diào)節(jié)血脂、抗氧化、抗病毒、抑菌等廣泛的生理活性，因此，對(duì)荷葉的物質(zhì)基礎(chǔ)研究還有待繼續(xù)補(bǔ)充與完善，以期深入挖掘其潛在的藥用價(jià)值，為蓮屬植物的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)與作用特點(diǎn)研究提供一定理論支撐，也為荷葉及蓮屬其它植物的質(zhì)量控制，藥用范圍的擴(kuò)大及藥用資源的深度開發(fā)和利用等提供一定參考。

5 結(jié)論

本研究利用溶劑萃取結(jié)合硅膠、凝膠、半制備高效液相色譜等多種方法對(duì)荷葉75%乙醇提取物進(jìn)行分離純化，再結(jié)合核磁共振圖譜與質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析與鑒定，共分離鑒定了23 個(gè)化合物，包括生物堿16 個(gè)、黃酮5 個(gè)、脂肪醇1 個(gè)、甾醇1 個(gè)。其中，化合物10、12、14、15、20、21、23 為首次從該屬植物中分離得到，化合物9 為首次從荷葉中分離得到。為豐富荷葉及蓮屬植物的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)提供了一定的數(shù)據(jù)支撐，同時(shí)也為富含生物堿類成分的中藥或天然藥物的提取、分離提供了方法借鑒。