胡 勤，徐 梅，葉 強(qiáng)，陳月華，韋 懿

四川省自貢市婦幼保健院檢驗(yàn)科，四川自貢 643000

葉酸是一種水溶性維生素，是機(jī)體代謝途徑中必不可少的輔助因子。血清葉酸水平受5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)和甲硫氨酸合成酶還原酶(MTRR)多態(tài)性的影響[1]。MTHFR基因677C>T和1298A>C突變分別誘導(dǎo)丙氨酸轉(zhuǎn)化為纈氨酸和谷氨酸，從而導(dǎo)致MTHFR活性降低，繼而降低葉酸的利用率[2]。上述突變還會(huì)增加同型半胱氨酸(Hcy)的水平，誘發(fā)血管內(nèi)皮損傷和功能障礙，破壞凝血和纖溶系統(tǒng)，繼而引起過(guò)度凝血，最終導(dǎo)致流產(chǎn)、胎兒生長(zhǎng)受限和死產(chǎn)等[3]。不良妊娠結(jié)局(APO)涉及一系列異常妊娠，在我國(guó)的發(fā)生率為10%～15%[4]。MTHFR基因的多態(tài)性被認(rèn)為是引起APO的主要遺傳因素之一。早產(chǎn)在臨床上較為常見(jiàn)，有研究認(rèn)為早產(chǎn)可能由遺傳和環(huán)境的相互作用結(jié)果導(dǎo)致，其中葉酸代謝障礙是研究的熱點(diǎn)之一[5]。本研究將分析葉酸代謝相關(guān)酶基因多態(tài)性與羊水過(guò)少、新生兒早產(chǎn)的關(guān)系。

高同型半胱氨酸血癥是代謝綜合征發(fā)展的潛在危險(xiǎn)因素。流行病學(xué)研究表明，MTHFR基因的677C>T多態(tài)性可將高血壓的風(fēng)險(xiǎn)增加24%～87%[6]。10%～15%的孕婦有發(fā)生妊娠期高血壓的風(fēng)險(xiǎn)，并可能導(dǎo)致更為嚴(yán)重的并發(fā)癥，對(duì)胎兒和自身的健康造成重大不利影響[7]。妊娠期糖尿病患者糖代謝多于產(chǎn)后恢復(fù)正常，但將來(lái)患2型糖尿病的概率增加[8]。本文回顧性分析近兩年在本院產(chǎn)檢并分娩的孕婦相關(guān)指標(biāo)，繼續(xù)深入研究妊娠期高血壓、妊娠期糖尿病與葉酸代謝相關(guān)酶基因的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年9月至2020年5月在本院接受葉酸代謝相關(guān)酶基因檢測(cè)和進(jìn)行分娩的孕婦24 864例進(jìn)行回顧性分析，其中19 211例符合納入標(biāo)準(zhǔn)，將其納入研究。研究對(duì)象基本信息：年齡18～42歲，平均(27.64±3.12)歲；體質(zhì)量指數(shù)(BMI)18.0～37.5 kg/m2，平均(24.36±2.27)kg/m2。根據(jù)研究對(duì)象妊娠期間的疾病類(lèi)型及癥狀分為正常組12 064例，羊水過(guò)少組1 480例，妊娠期糖尿病組4 506例，妊娠期高血壓組513例，早產(chǎn)(先兆早產(chǎn)但不伴分娩)組648例。其中羊水過(guò)少組、妊娠期糖尿病組、妊娠期高血壓組、早產(chǎn)組為病例組。各組年齡、BMI比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性，見(jiàn)表1。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡18～42歲；(2)男女雙方均無(wú)家族遺傳病史；(3)出院診斷為單因素導(dǎo)致的糖尿病、高血壓、早產(chǎn)、羊水過(guò)少。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)宮頸手術(shù)史；(2)合并除妊娠期糖尿病、妊娠期高血壓、早產(chǎn)、羊水過(guò)少外的其他并發(fā)癥；(3)精神和認(rèn)知異常；(4)依從性較差。

表1 各組研究對(duì)象年齡、BMI比較

1.2儀器與試劑 儀器為Fascan多通道熒光定量分析儀，試劑為測(cè)序反應(yīng)通用試劑盒(SNP-U1)，儀器及試劑均由西安天隆公司提供。

1.3方法 采用EDTA抗凝管收集研究對(duì)象2 mL靜脈血，上下顛倒10次以上混勻，取10 μL混勻后的標(biāo)本加入標(biāo)本稀釋液中，渦旋混勻5 s備用。A孔和B孔分別加入2 μL稀釋好的標(biāo)本(相鄰的A孔和B孔為1個(gè)完整檢測(cè))，加樣后蓋緊八聯(lián)管，6 000 r/min離心10 s。37 ℃溫浴 3 min，取出標(biāo)本，渦旋混勻5 s，再次離心1 min。上機(jī)，啟動(dòng)微測(cè)序程序并進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。葉酸代謝相關(guān)酶基因的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)包括MTHFR 677C>T、MTHFR 1298A>C、MTRR 66A>G。葉酸利用能力風(fēng)險(xiǎn)度分級(jí)根據(jù)西安天隆測(cè)序反應(yīng)通用試劑盒(SNP-U1)說(shuō)明書(shū)將其分為無(wú)風(fēng)險(xiǎn)、低風(fēng)險(xiǎn)、中風(fēng)險(xiǎn)、高風(fēng)險(xiǎn)。

2 結(jié) 果

2.1基因型分布 本院19 211例孕婦葉酸代謝相關(guān)酶基因MTHFR 1298A>C等位基因位點(diǎn)3種基因型(AA/AC/CC)頻率分別為62.75%、32.73%、4.52%；MTHFR 677C>T等位基因位點(diǎn)3種基因型(CC/CT/TT)頻率分別為44.22%、43.06%、12.72%；MTRR 66A>G等位基因位點(diǎn)3種基因型(AA/AG/GG)頻率分別為55.30%、37.82%、6.88%。

2.2各組孕婦葉酸利用能力風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 羊水過(guò)少組孕婦葉酸利用能力高風(fēng)險(xiǎn)人數(shù)占比高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=29.916，P<0.05)；妊娠期糖尿病組與正常組無(wú)風(fēng)險(xiǎn)人數(shù)占比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.33，P<0.05)；妊娠期高血壓組孕婦葉酸利用能力中風(fēng)險(xiǎn)和高風(fēng)險(xiǎn)人數(shù)占比均高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.131、8.627，P<0.05)；早產(chǎn)組孕婦葉酸利用能力高風(fēng)險(xiǎn)人數(shù)占比高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=23.752，P<0.05)；各病例組其他項(xiàng)目分別與正常組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

2.3MTHFR 677C>T基因型在各組中的分布及與疾病的關(guān)系 各組MTHFR 677C>T基因型分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律。各病例組的MTHFR 677C>T基因型占比和等位基因頻率分別與正常組進(jìn)行比較，羊水過(guò)少組、妊娠期高血壓組、妊娠期糖尿病組基因型占比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=13.221、8.182、7.503，P<0.05)，且這3組的MTHFR 677C>T基因的等位基因頻率與正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=511.102、8.301、5.632，P<0.05)。而早產(chǎn)組MTHFR 677C>T基因型占比和等位基因頻率與正常組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。以上結(jié)果說(shuō)明MTHFR 677C>T基因型與羊水過(guò)少、妊娠期高血壓、妊娠期糖尿病的發(fā)生有關(guān)，而早產(chǎn)的發(fā)生與MTHFR 677C>T基因型無(wú)關(guān)。見(jiàn)表3。

2.4MTHFR 1298A>C基因型在各組中的分布及與疾病的關(guān)系 通過(guò)對(duì)各組的MTHFR 1298A>C基因型占比和等位基因頻率分析發(fā)現(xiàn)，早產(chǎn)組與正常組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=12.131、8.264，P<0.05)；而羊水過(guò)少組、妊娠期高血壓組、妊娠期糖尿病組MTHFR 1298A>C基因型占比和等位基因頻率與正常組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。這說(shuō)明MTHFR 1298A>C基因型與早產(chǎn)的發(fā)生有關(guān)，而與羊水過(guò)少、妊娠期高血壓、妊娠期糖尿病的發(fā)生無(wú)關(guān)。見(jiàn)表4。

2.5MTRR 66A>G基因型在各組中的分布及與疾病的關(guān)系 通過(guò)對(duì)各組的MTRR 66A>G基因型占比和等位基因頻率分析發(fā)現(xiàn)，羊水過(guò)少組、妊娠期高血壓組、妊娠期糖尿病組MTRR 66A>G基因型占比和等位基因頻率與正常組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；早產(chǎn)組MTRR 66A>G基因型占比和等位基因頻率與正常組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.888、8.334，P<0.05)。以上結(jié)果說(shuō)明MTRR 66A>G基因型與早產(chǎn)的發(fā)生有關(guān)，而與羊水過(guò)少、妊娠期高血壓、妊娠期糖尿病的發(fā)生無(wú)關(guān)。見(jiàn)表5。

表2 各組孕婦葉酸利用能力風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估比較[n(%)]

表3 各組孕婦MTHFR基因677C>T位點(diǎn)基因型分布和等位基因頻率[n(%)]

表4 各組孕婦MTHFR基因1298A>C位點(diǎn)基因型分布和等位基因頻率[n(%)]

表5 各組孕婦MTRR基因66A>G位點(diǎn)基因型分布和等位基因頻率[n(%)]

3 討 論

葉酸是機(jī)體不可缺少的水溶性維生素，女性孕期因胃腸道生理功能變化,導(dǎo)致葉酸吸收減少,但需要量相對(duì)增加,更容易發(fā)生葉酸缺乏。如果孕婦葉酸代謝相關(guān)酶基因檢測(cè)為高風(fēng)險(xiǎn)，則機(jī)體吸收葉酸的能力較差，需要補(bǔ)充更多的葉酸來(lái)維持所需[9]。文獻(xiàn)[10]報(bào)道了MTHFR基因677C>T多態(tài)性與血壓之間的關(guān)系，TT基因型男性的平均收縮壓、舒張壓高于CT或CC基因型，這一結(jié)論與一項(xiàng)研究分析結(jié)果一致[11]，MTHFR基因677C>T多態(tài)性與妊娠期高血壓患病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性高達(dá)87%，這也與本研究的結(jié)果一致：妊娠期高血壓組孕婦檢出葉酸利用能力中風(fēng)險(xiǎn)、高風(fēng)險(xiǎn)的比例高于正常組，且與正常組相比，MTHFR 677C>T基因型占比和等位基因頻率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明MTHFR基因677C>T多態(tài)性確實(shí)增加了患妊娠期高血壓的風(fēng)險(xiǎn)。

羊水能夠直接反映胎兒的生長(zhǎng)情況，胎兒在盆腔內(nèi)的呼吸、排泄和吞咽等活動(dòng)，均直接與羊水相關(guān)，若羊水過(guò)少，孕婦易發(fā)生宮內(nèi)感染，對(duì)胎兒正常生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生嚴(yán)重影響[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，葉酸代謝相關(guān)酶基因突變與羊水過(guò)少有著直接的關(guān)系，羊水過(guò)少孕婦檢出葉酸利用能力高風(fēng)險(xiǎn)的比例增高，且MTHFR 677C>T基因型占比和等位基因頻率與正常組明顯不同，這說(shuō)明MTHFR基因677C>T多態(tài)性會(huì)增加孕婦發(fā)生羊水過(guò)少的概率。

妊娠期糖尿病受諸多因素的影響，例如糖尿病家族史、年齡、肥胖等，對(duì)妊娠結(jié)局有一定的影響[13]。有報(bào)道指出，血清Hcy可促進(jìn)妊娠期糖尿病的炎性反應(yīng)，葉酸、維生素B12水平與血清Hcy呈負(fù)相關(guān)[14]，結(jié)合該結(jié)論，筆者發(fā)現(xiàn)妊娠期糖尿病孕婦檢出葉酸利用能力無(wú)風(fēng)險(xiǎn)的比例增高，且MTHFR 677C>T基因型占比和等位基因頻率與正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，因此判斷妊娠期糖尿病的發(fā)生與葉酸代謝有關(guān)，具體的影響機(jī)制需要進(jìn)一步研究。

有研究表明，孕期攝入葉酸補(bǔ)充劑可降低自發(fā)性早產(chǎn)及早期早產(chǎn)的發(fā)生率[15],與本研究結(jié)果一致，先兆早產(chǎn)孕婦檢出葉酸利用能力高風(fēng)險(xiǎn)的比例增高且MTHFR 1298A>C和MTRR 66A>G基因型占比和等位基因頻率與正常組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這表明葉酸利用能力高風(fēng)險(xiǎn)人群，也就是對(duì)葉酸吸收能力較弱的人群更易發(fā)生早產(chǎn)。

綜上所述，葉酸代謝相關(guān)酶基因多態(tài)性與妊娠期各種相關(guān)合并癥的發(fā)生都有重要的關(guān)聯(lián)；機(jī)體葉酸利用能力風(fēng)險(xiǎn)性越高，妊娠期發(fā)生高血壓、早產(chǎn)、羊水過(guò)少等合并癥的概率越大，并且妊娠期高血壓對(duì)葉酸利用能力的變化更為敏感。MTHFR 677C>T基因型與羊水過(guò)少、妊娠期高血壓、妊娠期糖尿病的發(fā)生有關(guān)；早產(chǎn)的發(fā)生同時(shí)受MTHFR 1298A>C和MTRR 66A>G兩種基因型占比和等位基因頻率的影響。