邢 月，王寶維*，葛文華，孔 敏，王煥森，劉晨龍，凡文磊，張名愛，汪 超

（1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)優(yōu)質(zhì)水禽研究所，國家水禽產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系營養(yǎng)與飼料研究室，山東青島 266109；2.重慶市畜牧科學(xué)院，重慶 402460）

維生素D3是一種重要的營養(yǎng)元素，在種禽的鈣磷吸收、骨骼發(fā)育及蛋殼形成過程中發(fā)揮重要作用。目前，國外關(guān)于種鵝維生素D 需要量研究報道很少，美國NRC標(biāo)準(zhǔn)中種鵝維生素D3營養(yǎng)需要量的建議為200 IU/kg飼料，澳大利亞建議種鵝營養(yǎng)需要量為1 400 IU/kg 飼料。王迪[1]根據(jù)生長性能試驗結(jié)果建立的回歸方程確定鵝飼糧維生素D3最適添加量為0～4 周471.70 IU/kg、5～15 周548.63 IU/kg。解俊美[2]研究表明，添加適量維生素D3可顯著增強蛋雛鴨血清和肝臟總抗氧化能力，提高血清睪酮含量。白建[3]研究表明，蛋雞飼糧中添加240 IU/kg 維生素D+3.8%鈣可改善蛋品質(zhì)。雷立寧等[4]研究表明，海蘭褐殼蛋雞飼糧添加過量維生素D3會明顯增加軟殼蛋、破蛋的概率。何穎輝[5]研究表明，飼糧維生素D 添加量是蛋雞產(chǎn)軟殼蛋的重要影響因素之一。目前，關(guān)于種禽維生素D3的營養(yǎng)需要量主要集中于雞和鴨，種鵝的維生素D3營養(yǎng)需要量還缺乏系統(tǒng)研究。本試驗以產(chǎn)蛋期五龍鵝為研究對象，旨在研究飼糧中添加不同水平的維生素D3對種鵝繁殖性能、血液生殖激素及抗氧化力的影響，以便精準(zhǔn)確定種鵝產(chǎn)蛋期飼糧中維生素D3的適宜添加水平，為完善我國種鵝營養(yǎng)需要量數(shù)據(jù)庫提供技術(shù)支撐

1 材料與方法

1.1 試驗動物及設(shè)計 試驗選擇34 周齡體況相近的五龍鵝種鵝180 只，隨機分為6 組（0、100、200、300、400、500 IU/kg 組），每組6 個重復(fù)，每重復(fù)5 只（1公4 母）。試驗預(yù)試期1 周，正試期10 周。各組試驗鵝由青島農(nóng)業(yè)大學(xué)優(yōu)質(zhì)水禽研究所育種基地提供，飼養(yǎng)方式采用開放式鵝舍地面平養(yǎng)，試驗用維生素D3（有效成分500 000 IU/g）購自浙江博朗藥業(yè)有限公司。

1.2 試驗飼糧 試驗用基礎(chǔ)飼糧參照NRC（1994）家禽營養(yǎng)需要量中推薦的種鵝飼糧營養(yǎng)水平設(shè)計配方。種鵝的飼糧組成和營養(yǎng)成分見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗種鵝采用地面飼養(yǎng)方式，全期自由采食，自由飲水。試驗前對鵝舍進行充分沖洗和嚴(yán)格消毒，試驗期內(nèi)每周消毒2 次。

1.4 繁殖性能的測定 繁殖性能指標(biāo)測定與計算方法按照《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語和度量統(tǒng)計方法》（NY/T 823-2004）標(biāo)準(zhǔn)進行。每天08:00 撿蛋，記錄產(chǎn)蛋數(shù)、耗料量、合格蛋數(shù)。每重復(fù)隨機挑選種蛋20 個，每組挑選120 個，6 組共720 個蛋，30 d 入孵1 次，共入孵2 次，入孵蛋為最近10 d 產(chǎn)出的新鮮種蛋，分別記錄入孵蛋數(shù)、無精蛋數(shù)、死胚蛋數(shù)、出雛數(shù)、健雛數(shù)、弱雛數(shù)。計算料蛋比、產(chǎn)蛋率、種蛋合格率、受精率、受精蛋孵化率、健雛率。

1.5 血清生殖激素含量的測定 試驗結(jié)束時，各組每重復(fù)抽取體重相近的母鵝2 只，每組12 只，共72 只，翅靜脈采血，3 000 r/min 離心制得血清樣品，分裝，-40℃冷凍保存。血清雌二醇、睪酮、催產(chǎn)素、黃體生成素、孕酮、促卵泡素含量均采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗測定，所用試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.6 血清抗氧化指標(biāo)的測定 血清總抗氧化能力采用比色法測定，血清總超氧化物歧化酶活性采用羥胺法測定，血清谷胱甘肽過氧化物酶活性采用比色法測定，血清丙二醛含量采用硫代巴比妥酸反應(yīng)法測定。上述所用試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.7 統(tǒng)計分析 采用SPSS 22.0 軟件的單因素方差分析（One-Way ANOVA）和Duncan's 多重比較方法，分析飼糧不同維生素D3添加水平的影響及各項指標(biāo)間的差異。其中，P<0.05 表示差異顯著，P<0.01 表示差異極顯著。數(shù)據(jù)以均值和均值標(biāo)準(zhǔn)誤差（SEM）表示。采用SPSS 22.0 軟件的曲線估計對繁殖性能進行二次曲線擬合，獲得最適添加量。

2 結(jié)果

2.1 飼糧中添加不同水平維生素D3對種鵝繁殖性能的影響 由表2 可知，飼糧中不同水平維生素D3對種鵝的受精率、健雛率影響不顯著。300、400、500 IU/kg組的產(chǎn)蛋率高于0 IU/kg 組（P<0.01），400 IU/kg 組高于100 IU/kg 組（P<0.01），300、500 IU/kg 組高于100 IU/kg 組（P<0.05）；500 IU/kg 組的料蛋比低于0、100、200、300 IU/kg 組（P<0.01）及400 IU/kg 組（P<0.05）；300、400、500 IU/kg 組的種蛋合格率高于0 IU/kg 組（P<0.01）及100、200 IU/kg 組（P<0.05）；200、300、400、500 IU/kg 組的孵化率高于0、100 IU/kg組（P<0.05）。

對0～500 IU/kg 組產(chǎn)蛋率、種蛋合格率、孵化率（Y）分別與飼糧維生素D3添加水平（X）進行二次曲線擬合，建立回歸方程：

由上述曲線回歸方程得出，飼糧維生素D3添加水平在466 IU/kg 時，種鵝的種蛋合格率較高；而產(chǎn)蛋率和孵化率與飼糧維生素D3添加水平間的曲線擬合度低（R2<0.700），二次性關(guān)系不顯著，沒有參考價值，因此沒有選擇。另外，由于本批試驗種鵝品種且剛進入產(chǎn)蛋期，故存在受精率較低的情況。在維生素D3添加水平為400 IU/kg 時，種鵝的料蛋比、產(chǎn)蛋率、孵化率及健雛率均達最佳，此時種鵝的繁殖性能良好。

2.2 飼糧中添加不同水平維生素D3對產(chǎn)蛋期種鵝血清激素指標(biāo)的影響 如表3 所示，飼糧不同維生素D3添加水平對產(chǎn)蛋期種鵝的催乳素、黃體生成素、促卵泡素含量無顯著影響；0 IU/kg 組的孕酮含量低于其他各組（P<0.01）；400 IU/kg 組的睪酮含量高于0 IU/kg 組（P<0.01）及100、200、500 IU/kg 組（P<0.05）；300、400 IU/kg 組的雌二醇含量高于0 IU/kg 組（P<0.01）及100、200、500 IU/kg 組（P<0.05）。結(jié)果表明，隨飼糧維生素D3添加水平的增加，血清孕酮、睪酮、雌二醇均呈先增加后降低趨勢，飼糧維生素D3添加水平為400 IU/kg 時，種鵝血清孕酮和睪酮含量均能達到最高。

2.3 飼糧中添加不同水平維生素D3對產(chǎn)蛋期種鵝血清抗氧化指標(biāo)的影響 由表4 可知，飼糧中添加不同水平維生素D3對種母鵝血清丙二醛及總抗氧化能力影響不顯著；400 IU/kg 組的總超氧化物歧化酶活力高于0 IU/kg 組（P<0.01）及 100 IU/kg 組（P<0.05），200、500 IU/kg組高于0 IU/kg 組（P<0.05）；500 IU/kg 組谷胱甘肽過氧化物酶活力高于0 IU/kg 組（P<0.01）及100 IU/kg組（P<0.05），200、300、400 IU/kg 組谷胱甘肽過氧化物酶活力高于0 IU/kg 組（P<0.05）。結(jié)果表明，飼糧維生素D3添加水平為400 IU/kg 時，總超氧化物歧化酶活力及谷胱甘肽過氧化物酶活力均可達到最大值。

3 討 論

3.1 飼糧中添加不同水平維生素D3對產(chǎn)蛋期種鵝繁殖性能的影響 迄今為止，種鵝繁殖性能的研究大都集中于溫度、濕度、孵化器、種蛋的遺傳性、應(yīng)激以及飼養(yǎng)密度等方面，對于種鵝的營養(yǎng)元素，特別是維生素D3對繁殖性能的影響研究較少?？禈返萚6]研究指出，嚴(yán)重缺乏維生素D3時可導(dǎo)致產(chǎn)蛋后期蛋雞停產(chǎn)。楊麗娜[7]研究表明，維生素D 對雛雞健康孵化有重要影響。賴思純等[8]研究表明，飼料中缺乏維生素A、維生素D會導(dǎo)致蛋雞出現(xiàn)嚴(yán)重的孵化率下降。許英民[9]指出，維生素D 缺乏可導(dǎo)致母鵝產(chǎn)出薄殼、軟殼蛋，新鮮蛋內(nèi)蛋黃波動性增大，出雛率降低。Deluca 等[10]研究表明，母雞缺乏維生素D 時所產(chǎn)蛋孵化時上喙發(fā)育不全，胚胎正常率極低，向胚胎中注射25-羥基維生素D3或維生素D3，胚胎正常率大幅增加，尤其是注射維生素D3組，胚胎正常率提高80%以上。弓浩杰等[11]研究表明，添加25-羥基維生素D3也可提高產(chǎn)蛋后期蛋雞產(chǎn)蛋性能。還有研究表明，飼糧添加維生素D 對蛋雞產(chǎn)蛋率未產(chǎn)生明顯影響[12-13]。本研究結(jié)果表明，維生素D3對產(chǎn)蛋期種鵝產(chǎn)蛋率、種蛋合格率和孵化率影響顯著；隨著維生素D3添加水平的增加，種蛋受精率和健雛率也有提高趨勢，但本研究維生素D3的添加水平與NRC 標(biāo)準(zhǔn)接近，而與其他研究結(jié)果差異較大。本試驗結(jié)果表明，種鵝維生素D3添加水平在400～500 IU/kg 效果較好，對種鵝繁殖性能有明顯促進作用，是采用開放式地面鵝舍飼養(yǎng)獲得的參數(shù)，其中地面啄食及自然光照等因素或有一定影響，而密閉鵝舍維生素D3需要量還有待于繼續(xù)研究。

表2 飼糧中添加不同水平維生素D3對產(chǎn)蛋期種鵝繁殖性能的影響

表3 飼糧中添加不同水平維生素D3對產(chǎn)蛋期種鵝生殖激素的影響

表4 飼糧中添加不同水平維生素D3對產(chǎn)蛋期種鵝血清抗氧化指標(biāo)的影響

3.2 不飼糧中添加不同水平維生素D3對產(chǎn)蛋期種鵝血清生殖激素含量的影響 趙珍麗等[14]研究指出，維生素D3可能在禽類的生殖周期中發(fā)揮一定的重要作用。解俊美[2]對蛋雛鴨的研究表明，隨維生素D3添加水平的增加，血清睪酮含量呈先增加后降低的趨勢，550 IU/kg 添加組睪酮含量顯著高于110、220、1 000 IU/kg 組。邱凌云[15]研究指出，添加25-羥基維生素D3使羅曼粉殼蛋雞血清促卵泡素含量顯著增加。本試驗也研究表明，隨飼糧維生素D3添加水平的增加，血清孕酮、睪酮、雌二醇均呈先增加后降低趨勢。維生素D3本身不具有生物學(xué)活性，經(jīng)肝臟中的25-羥化酶、腎臟中的1-α羥化酶進行2 次羥基化形成活化形式1,25-二羥基維生素D3。Deluca 等[10]發(fā)現(xiàn)，雌二醇對成熟雄雞的1-α羥化酶有明顯的促進作用，若同時加入睪酮、孕酮、雌二醇能夠最大程度地促進1-α羥化酶發(fā)揮作用。這表明成熟種禽的生殖激素在維持自身生殖系統(tǒng)的同時，也可促進維生素D3的代謝，保證機體攝入足量的鈣來滿足產(chǎn)蛋等需求。

3.3 飼糧中添加不同水平維生素D3對產(chǎn)蛋期種鵝抗氧化指標(biāo)的影響 在機體抗氧化方面，劉禹辰等[16]研究表明，產(chǎn)蛋后期蛋雞應(yīng)用含維生素D3液態(tài)維生素制劑會使總抗氧化能力下降，丙二醛含量增加。解俊美[2]研究表明，添加220、550 IU/kg 維生素D3可顯著增強蛋雛鴨血清超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶的活性及血清和肝臟總抗氧化能力。張淑云等[17]研究指出，隨維生素D3添加水平增加，生長肉雞血清總超氧化物歧化酶、總抗氧化能力、丙二醛活力變化不顯著。MukhopaDhyay 等[18]研究指出，維生素D3可以提高谷胱甘肽過氧化物酶和還原性酶類活力。李萬佳等[19]研究指出，飼糧維生素D 添加水平對生長獺兔血清總超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶活力影響極顯著，隨維生素D 添加水平增加呈先升高后降低的趨勢。本試驗發(fā)現(xiàn)添加不同水平維生素D3對血清總超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶活力有影響。結(jié)合前人結(jié)論，添加適量的維生素D 對總超氧化物歧化酶及谷胱甘肽過氧化物酶活性有一定誘導(dǎo)力，參與維持體內(nèi)自由基產(chǎn)生與消除的動態(tài)平衡。

4 結(jié) 論

本試驗條件下，飼糧中添加適宜水平的維生素D3能夠顯著提高產(chǎn)蛋期種鵝產(chǎn)蛋率、種蛋合格率和孵化率，降低料蛋比；飼糧中適宜維生素D3添加水平能夠顯著提高產(chǎn)蛋期種鵝血清孕酮、睪酮、雌二醇含量；飼糧中適宜維生素D3添加水平可提高種鵝血清抗氧化指標(biāo)；建議種鵝產(chǎn)蛋期飼糧中維生素D3添加水平為400～500 IU/kg。