非酒精性脂肪性肝病患者血清Chemerin和頸動脈內(nèi)膜中層厚度的相關(guān)性

高海麗 楊道坤 梁海軍 王新偉 王燕平 陳寶鑫

非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)是指除酒精及其他確定因素導(dǎo)致的以肝細(xì)胞內(nèi)大量甘油三酯沉積為特征的慢性肝臟疾病[1]。NAFLD對肝臟的危害基本得到共識，但近年來研究發(fā)現(xiàn)[2-3]，NAFLD患者心腦血管疾病的發(fā)病風(fēng)險顯著升高，而動脈粥樣硬化是心腦血管疾病發(fā)病的基本病理生理基礎(chǔ)[4]，如何早期識別NAFLD患者是否發(fā)生動脈粥樣硬化并盡早給予干預(yù)是提高其遠(yuǎn)期預(yù)后的關(guān)鍵。Chemerin為一種脂肪細(xì)胞因子，與頸動脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)[5]，頸動脈內(nèi)膜中層厚度(carotid intima-media thickness, CIMT)增厚是評估亞臨床動脈粥樣硬化的一項(xiàng)指標(biāo)，本研究通過回顧性收集新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院NAFLD患者，探討NAFLD患者血清Chemerin水平與CIMT的關(guān)系，現(xiàn)將具體內(nèi)容報道如下。

資料與方法

一、研究對象

納入2019年1月1日至2020年5月1日于新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院感染科就診的96例NAFLD患者和體檢中心35例健康體檢者(對照組)作為研究對象，NAFLD患者中男56例，女40例，平均年齡(42.56±5.22)周歲；對照組男20例，女15例，平均年齡(43.58±4.95)周歲，兩組研究對象在性別和年齡上相比無顯著差異。所有NAFLD患者均為住院后通過肝臟組織病理初次診斷，符合《非酒精性脂肪性肝病診療指南(2010年修訂版)》中的標(biāo)準(zhǔn)[6]，且年齡超過18周歲，入院后臨床資料完整；排除酒精性脂肪肝、病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、藥物性肝損傷、遺傳性肝病及合并其他惡性腫瘤、嚴(yán)重感染性疾病患者。入院后采用Philips IE33彩色多普勒超聲診斷儀對所有研究對象進(jìn)行CIMT檢查，參考中國醫(yī)師協(xié)會超聲醫(yī)師分會制定的《血管和淺表器官超聲檢查指南[7]》，CIMT≥1.0 mm定義為內(nèi)膜增厚，本研究中CIMT≥1.0 mm共41例(ACIMT組)，男20例，女21例，平均年齡(42.02±4.23)周歲，其余CIMT<1.0 mm共55例(NCIMT組)，其中男36例，女19例，平均年齡(42.86±4.19)周歲。所有研究對象均知情同意且簽署知情同意協(xié)議書，本課題經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會同意并批準(zhǔn)(批準(zhǔn)號：2181102)。

二、研究方法

(一)基本臨床特征及生化指標(biāo) 所有研究對象的基本情況如性別、年齡、BMI(body mass index)、吸煙史、合并糖尿病病史、高血壓病史、收縮壓、舒張壓等均來源于住院病歷；清晨空腹抽取外周靜脈血，生化指標(biāo)如總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triacylglycerol，TG)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-c)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-c)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、空腹血糖(fasting blood glucose，F(xiàn)PG)、空腹胰島素(fasting insulin，F(xiàn)INS)、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR=FPG*FINS/22.5)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase，ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)、尿酸(uric acid，UA)等均通過醫(yī)院檢驗(yàn)科進(jìn)行檢測。

(二)CIMT的檢查 由1名高年資超聲科醫(yī)師對患者進(jìn)行CIMT檢查，儀器為Philips IE33彩色多普勒超聲診斷儀，頻率為10 MHz，分別檢查頸總、頸內(nèi)動脈和分叉部。CIMT距離為腔內(nèi)膜交界面到外膜上層的距離，以后壁值為標(biāo)準(zhǔn)，檢測6個點(diǎn)，取平均值。

(三) Chemerin表達(dá)水平的檢測 所有研究對象均于清晨空腹抽取外周靜脈血3 mL在4 ℃離心機(jī)離心，收集上層血清置于-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?。血清Chemerin濃度采用ELISA法檢測，具體操作步驟按照ELISA試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行(美國，R&D公司)，最終研究對象血清Chemerin水平按照酶標(biāo)儀(thermo酶標(biāo)儀，美國Thermo Fisher Scientific公司)在450 nm波長下測定吸光度(OD值)。

三、統(tǒng)計學(xué)分析

結(jié) 果

一、一般資料的比較

對照組、NCIMT組和ACIMT組三組研究對象在性別、年齡、BMI、吸煙史、高血壓病史、糖尿病病史、收縮壓、舒張壓、TC、HDL-c、HbA1c上相比較均無顯著差異(P>0.05)；TG、LDL-c、FINS、HOMA-IR、ALT、AST、Chemerin在對照組、NCIMT組和ACIMT組中依次升高，組組比較均存在顯著差異(P<0.05)；FPG、UA和CIMT在對照組和NCIMT組中相比較均無顯著差異(P>0.05)；與對照組和NCIMT組相比較，ACIMT組中FPG、UA和CIMT均顯著升高(P<0.05)。結(jié)果見表1。

二、相關(guān)性分析

96例NAFLD患者CIMT水平與TG、LDL-c、HOMA-IR、UA和Chemerin均呈現(xiàn)顯著正相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)分別為0.322、0.474、0.354、0.365和0.489，而與其他指標(biāo)無明顯相關(guān)性。結(jié)果見表2。

表1 NAFLD患者和對照組基線資料的比較

表2 NAFLD患者CIMT與臨床參數(shù)的相關(guān)性分析

三、NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的危險因素

以CIMT為因變量(CIMT<1.0 mm為0，CIMT≥1.0 mm為1)，以表1中性別、年齡、吸煙史、合并糖尿病病史、高血壓病史、BMI、收縮壓、舒張壓、FBG、TC、TG、HDL-c、LDL-c、HbA1c 、FPG、FINS、HOMA-IR、ALT、AST和UA等指標(biāo)為自變量進(jìn)行Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，TG(OR=4.221)、HOMA-IR(OR=1.353)、LDL-c(OR=5.548)和Chemerin(OR=8.015)是NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的危險因素。結(jié)果見表3。

四、血清Chemerin診斷NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的ROC曲線

ROC曲線結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血清中Chemerin表達(dá)水平診斷NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的曲線下面積為0.885(95%CI:0.813～0.942，P<0.000)，當(dāng)截斷值為265.29 ng/mL時，診斷敏感度和特異度分別為 93.24%和95.25%。ROC曲線見圖1。

討 論

研究認(rèn)為NAFLD屬于代謝綜合征的肝臟表現(xiàn)[8]，NAFLD患者不僅發(fā)生肝臟損傷，也是心腦血管疾病發(fā)病的一項(xiàng)獨(dú)立危險因素。meta分析結(jié)果顯示[9]，相對于非NAFLD患者，NAFLD患者發(fā)生致命性和(或)非致命性心血管疾病的風(fēng)險顯著升高(OR=1.64，95%CI：1.26～2.13)。此外，Ekstedt M等[2]對88例NAFLD患者進(jìn)行長達(dá)13.7年左右的隨訪后發(fā)現(xiàn)，NAFLD患者發(fā)生心腦血管疾病的風(fēng)險高達(dá)29%，而肝癌的發(fā)病風(fēng)險僅僅為10%。動脈粥樣硬化是心腦血管疾病發(fā)病的基礎(chǔ)[4]，而NAFLD也會促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)生[10]，因此，動脈粥樣硬化可能是連接NAFLD和心腦血管疾病的“橋梁”，近年來尋找能反映NAFLD患者發(fā)生頸動脈粥樣硬化的生物學(xué)標(biāo)志物已成為研究的重點(diǎn)。

Chemerin屬于一種脂肪細(xì)胞因子，由163個氨基酸構(gòu)成，由肝臟和脂肪組織分泌，研究認(rèn)為血清中Chemerin主要來源于肝臟的分泌[11]。大量研究報道認(rèn)為，Chemerin與NAFLD的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。呂驥等[12]研究顯示，NAFLD患者血清中Chemerin水平顯著升高，且與HOMA-IR及TG等呈現(xiàn)顯著正相關(guān)性；Krautbauer S等[13]同樣證實(shí)NAFLD患者肝臟組織中Chemerin表達(dá)水平升高，且Docke S等[14]認(rèn)為肝臟的脂肪變性、肝小葉炎癥、氣球樣變及肝纖維化等與肝臟組織中Chemerin高表達(dá)有關(guān)。上述結(jié)果提示，Chemerin在NAFLD患者肝臟病變進(jìn)展中可能扮演了重要作用。Chemerin在動脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制中同樣扮演了重要作用，Liu H等[15]構(gòu)建動脈粥樣硬化小鼠模型后發(fā)現(xiàn)，小鼠血清中Chemerin及其他炎癥因子如NF-κB、IL-1β等水平顯著升高，但Chemerin基因表達(dá)被抑制后，小鼠動脈粥樣硬化得到明顯改善，NF-κB和IL-1β表達(dá)水平顯著降低；Dimitriadis

表3 Logistic回歸分析NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的影響因素

圖1 血清Chemerin診斷NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的ROC曲線

GK等[16]證實(shí)Chemerin通過上調(diào)NF-κB和IL-1β的表達(dá)參與血管內(nèi)皮細(xì)胞的異?；罨鲋?、功能障礙和收縮異常，從而加速動脈粥樣硬化的發(fā)展。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，相對于對照組和NCIMT組，ACIMT組患者Chemerin表達(dá)水平顯著升高，且與CIMT呈現(xiàn)顯著正相關(guān)性，提示NAFLD患者血清Chemerin表達(dá)水平在一定程度上反映了頸動脈粥樣硬化的嚴(yán)重程度；其他研究也進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)頸動脈粥樣斑塊不穩(wěn)定組患者血清Chemerin表達(dá)水平高于斑塊穩(wěn)定組，且與斑塊指數(shù)呈現(xiàn)顯著正相關(guān)性(r=0.301)[17]，Zhao D等[18]證實(shí)血清Chemerin是中國人群頸動脈斑塊不穩(wěn)定的危險因素。因此，本研究結(jié)果提示血清Chemerin表達(dá)水平與NAFLD患者CIMT密切相關(guān)，Logistic回歸分析也證實(shí)Chemerin(OR=8.015)是NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的一項(xiàng)獨(dú)立危險因素，而Lachine NA等[19]也同樣證實(shí)Chemerin是2型糖尿病患者CIMT的獨(dú)立危險因素；另一方面，本研究發(fā)現(xiàn)其他指標(biāo)如TG(OR=4.221)、HOMA-IR(OR=1.353)、LDL-c(OR=5.548)同樣是NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的獨(dú)立危險因素，NAFLD患者TG、LDL-c水平均顯著高于對照組，與王萍等[20]研究結(jié)果基本一致，說明NAFLD患者常常發(fā)生血脂水平紊亂，而血脂水平異常升高導(dǎo)致大量脂質(zhì)沉積于動脈內(nèi)皮下，被平滑肌及巨噬細(xì)胞等吞噬形成泡沫細(xì)胞，最終引起CIMT增厚。胰島素抵抗早已被證實(shí)屬于動脈粥樣硬化的獨(dú)立危險因素之一，胰島素抵抗與炎癥反應(yīng)、內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂、脂質(zhì)代謝異常等均密切相關(guān)，共同參與了動脈粥樣硬化的發(fā)生[21]，馮南山[22]證實(shí)HOMA-IR是腦卒中患者動脈粥樣硬化的獨(dú)立危險因素。

為進(jìn)一步探討Chemerin是否可以作為NAFLD患者動脈粥樣硬化的一項(xiàng)血清學(xué)指標(biāo)，本研究發(fā)現(xiàn)，血清Chemerin在診斷NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的AUC高達(dá)0.885，診斷敏感度和特異度分別為 93.24%和95.25%，提示血清中Chemerin可作為診斷NAFLD患者動脈粥樣硬化的一項(xiàng)血清學(xué)標(biāo)志物。

綜上所述，NAFLD患者血清中Chemerin表達(dá)水平顯著升高，可作為NAFLD患者動脈粥樣硬化的一項(xiàng)血清學(xué)標(biāo)志物，但本研究為一項(xiàng)橫斷面研究，存在著樣本量不足等缺陷，以后可開展大型隊列研究探討血清中Chemerin表達(dá)水平與NAFLD患者心腦血管疾病發(fā)生風(fēng)險的相關(guān)性。