石 異，喻 勇，何偉先

（1.四川齊全紅動物藥業(yè)有限公司，四川遂寧 629000；2.齊全農(nóng)牧集團(tuán)股份有限公司，四川遂寧 629000）

白頭翁口服液由白頭翁、黃連、秦皮、黃柏四味中藥材經(jīng)過提取配制而成，主治濕熱泄瀉、下痢膿血。由于白頭翁口服液在臨床運(yùn)用中有抗炎、抗?jié)?、抗?nèi)毒素、抗菌、止瀉、抗腫瘤以及殺蟲等作用，且符合我國食用性動物藥品的低毒、無殘留、高效藥物發(fā)展方向，在禽畜業(yè)中的使用越來越廣泛[1～3]。但在《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2017年版中藥卷相關(guān)規(guī)定中，白頭翁口服液主要通過鹽酸小檗堿的薄層色譜法進(jìn)行定性鑒別，定性成分單一，且沒有針對白頭翁口服液的定量檢測方法[4]。此外，白頭翁口服液中含有生物堿類、香豆素類、皂苷類、甾醇類和檸檬苦素類多種化合物[5]。因此，按照《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2017年版中藥卷相關(guān)規(guī)定對白頭翁口服液進(jìn)行檢查鑒定不能全面評定白頭翁口服液的質(zhì)量。

由于白頭翁湯煎煮中所發(fā)生的復(fù)方化學(xué)變化屬于物理的配伍變化[6]。仲曉寧[7]等通過運(yùn)用高效液相色譜法（HPLC）對白頭翁湯組方各單味藥材，各藥材陰性對照和白頭翁湯提取液的HPLC 圖進(jìn)行對比鑒別，各藥材HPLC 特征峰明顯，推論出HPLC色譜圖能較好監(jiān)控白頭翁湯的質(zhì)量。賈婭倩[8]等運(yùn)用高效液相色譜法（HPLC），建立了測定白頭翁湯中4 味中藥（白頭翁、黃連、黃柏及秦皮）的6種成分含量方法，并驗(yàn)證了該方法的可靠性、操作性。張璐[9]等選擇黃連中關(guān)鍵指標(biāo)鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿為含量測定成分，根據(jù)《中國獸藥典》2015年版二部中相關(guān)規(guī)定，結(jié)合轉(zhuǎn)移率，考慮藥廠大規(guī)模生產(chǎn)轉(zhuǎn)移率低于實(shí)驗(yàn)室小試轉(zhuǎn)移率，運(yùn)用高效液相色譜法對市售白頭翁口服液進(jìn)行了有效的質(zhì)量評價。由此可見，白頭翁口服液可以采用高效液相色譜法（HPLC）進(jìn)行質(zhì)量控制。

由于白頭翁口服液中黃連含鹽酸小檗堿，對痢疾桿菌、大腸桿菌、金葡菌、傷寒桿菌及阿米巴原蟲等有抑制作用，是治療腸道感染及菌痢的重要藥物。而白頭翁湯中鹽酸小檗堿會發(fā)生沉淀，導(dǎo)致含量降低，且鹽酸小檗堿含量降低的多少與藥材種類、數(shù)量等因素有關(guān)[10]。因此，白頭翁口服液的組方比例是影響其質(zhì)量的重要因素。為了提高白頭翁口服液的質(zhì)量，分別以黃連重量為定量，按照《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2017 版中藥卷中白頭翁口服液組方比例（白頭翁：黃連：秦皮：黃柏=4:2:4:3）、丁林生[11]等組方比例（白頭翁：黃連：秦皮：黃柏=5:2:4:4）、《傷寒論》[12]原方中白頭翁湯組方比例（白頭翁：黃連：秦皮：黃柏=2:3:3:3）進(jìn)行組方提取，比較3 個比例組方提取后黃連中關(guān)鍵指標(biāo)鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的含量，對白頭翁口服液進(jìn)行質(zhì)量對比。

1 材料

1.1 主要儀器

SPD-20A 型高效液相色譜儀（島津企業(yè)管理（中國）有限公司）；AE-240 型電子分析天平（梅特勒-托利多國際貿(mào)易（上海）有限公司）。

1.2 試劑

乙腈（色譜純）；乙醇、鹽酸、甲醇（分析純）均購于遂寧淇銳實(shí)驗(yàn)儀器化工有限公司。

1.3 藥品

鹽酸小檗堿對照品、鹽酸巴馬汀對照品（中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所）；白頭翁、黃連、黃柏、秦皮藥材（四川全泰堂中藥科技有限公司）。

2 方法

2.1 色譜條件

依據(jù)《中華人民共和國獸藥典》2015年版二部黃連的含量測定中條件。

2.2 供試品溶液的制備

按照《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2017 版中藥卷中白頭翁湯口服液比例，取白頭翁12g、黃連6g、秦皮12g、黃柏9g，每次加水100ml 煎煮，煎煮3 次，合并煎液，濾過，加入乙醇，使含醇量達(dá)75%，靜置12h，濾取上清液回收乙醇，加水調(diào)至39ml，即得，標(biāo)為A1。

按照丁林生等組方比例，取白頭翁15g、黃連6g、秦皮12g、黃柏12g，每次加水100ml 煎煮，煎煮3 次，合并煎液，濾過，加入乙醇，使含醇量達(dá)75%，靜置12h，濾取上清液回收乙醇，加水調(diào)至39ml，即得，標(biāo)為A2。

按照《傷寒論》中白頭翁湯原方比例，取白頭翁4g、黃連6g、秦皮6g、黃柏6g，每次加水100ml 煎煮，煎煮3 次，合并煎液，濾過，加入乙醇，使含醇量達(dá)75%，靜置12h，濾取上清液回收乙醇，加水調(diào)至39ml，即得，標(biāo)為A3。

分別精密量取以上3 種供試品2ml，置于50ml量瓶中，加入甲醇—鹽酸（100:1）的混合溶液適量，超聲10min，室溫放置，加甲醇—鹽酸（100:1）的混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，分別按照原先的順序標(biāo)記為A1、A2、A3。

2.3 對照品溶液的制備

取鹽酸巴馬汀對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml 含10μg 的溶液，即得。

取鹽酸小檗堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml 含10μg 的溶液，即得。

2.4 測定方法

利用高效液相色譜儀，依據(jù)《中華人民共和國獸藥典》2015年版二部黃連的含量測定方法依次對A1、A2、A3 進(jìn)行測定。在黃連藥材重量、理化條件一致的情況下，各組方比例中，《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2017年版中藥卷白頭翁口服液組方比例中鹽酸小檗堿含量最高，效果最好。結(jié)果見表1。

表1 3 種供試品溶液測定結(jié)果（mg/g）

3 討論

本試驗(yàn)僅測定了在黃連藥材重量一定的情況下鹽酸小檗堿的含量，其他情況下的組方比例影響還待進(jìn)一步探討。