林夏，黃友，楊莎莎，魏馨怡，傅超美，李銳，張臻

(西南特色中藥資源國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，四川 成都 611137)

《靈樞》云：“邪在脾胃，則病肌痛。陽氣有余，陰氣不足，則熱中善饑；陽氣不足，陰氣有余，則寒中腸鳴腹痛?！盵1]《素問》曰：“清氣在下，則生飧泄。”[2]故脾胃虛弱，中陽不健，脾運(yùn)化升清功能失司，水谷糟粕混雜而下，則致泄瀉。由于現(xiàn)代環(huán)境、生活方式、工作節(jié)奏的改變，勞倦過度、飲食失節(jié)、過食生冷辛辣等現(xiàn)象常見，致使胃腸道疾病在現(xiàn)代疾病譜中占據(jù)極其重要的地位。目前最常見的功能性胃腸病是腹瀉型腸易激綜合征(Diarrhea-predominant irritable bowel syndrome，IBS-D)，其以反復(fù)發(fā)作的腹痛、腹瀉、大便溏薄為臨床主要表現(xiàn)，該病屬于中醫(yī)泄瀉范疇，主要病機(jī)為脾陽虛[3-6]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對IBS-D的發(fā)病機(jī)制并未完全明確，但大量研究表明IBS-D與腸道菌群紊亂密切相關(guān)[7-10]。

腸道菌群可以通過和宿主進(jìn)行共代謝參與到機(jī)體的各項(xiàng)生理活動(dòng)中，是機(jī)體不可缺少的一個(gè)“器官”，被稱為“人體第二基因組”[11-12]。在長期進(jìn)化過程中，腸道菌群與宿主形成了能相互交流物質(zhì)和信息的腸道微生態(tài)，腸道微生態(tài)紊亂是各種疾病的誘發(fā)因素[13-14]。研究發(fā)現(xiàn)，IBS-D機(jī)體的腸道菌群密集度、多樣性明顯降低，具體表現(xiàn)有腸桿菌數(shù)量升高，乳桿菌、雙歧桿菌、類桿菌數(shù)量降低[7]。

附子理中丸出自宋代《太平惠民和劑局方》，溫中健脾，溫腎助陽，多用于脾胃虛寒所致脘腹冷痛，嘔吐泄瀉，手足不溫等癥，是治療脾陽虛泄瀉的經(jīng)典方劑[15]。近年來，附子理中丸常用于IBS-D的臨床治療，且療效確切[16-18]，然而其作用機(jī)制尚未完全明確，其對脾陽虛泄瀉疾病腸道菌群的影響也未見報(bào)道。因此，本文采用高通量測序技術(shù)，研究附子理中丸對復(fù)合法誘導(dǎo)的脾陽虛IBS-D模型大鼠腸道菌群的影響。

1 材料

1.1 藥材與試劑

附子(批號(hào)：1804038)、干姜(批號(hào)：1806012)、炒白術(shù)(批號(hào)：1803009)、甘草(批號(hào)：1807031)、黨參(批號(hào)：1806128)、番瀉葉(批號(hào)：1711080)均購自四川新荷花中藥飲片股份有限公司，以上藥材由成都中醫(yī)藥大學(xué)陳江副教授分別鑒定為毛茛科植物烏頭AconitumcarmichaeliiDebx.的子根炮制加工品，姜科植物姜ZingiberofficinaleRosc.的干燥根莖，菊科植物白術(shù)AtractylodesmacrocephalaKoidz.的干燥根莖的炮制加工品，豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.的干燥根及根莖，桔?？浦参稂h參Codonopsispilosula(Franch.) Nannf.的干燥根，豆科植物狹葉番瀉CassiaangustifoliaVahl的干燥小葉。羧甲基纖維素鈉(CMC-Na，批號(hào)：2018022601)購自成都市科隆化學(xué)品有限公司，HiPure Soil DNA Kit B試劑盒(批號(hào)：180920，Axygen Biosciences)，SOD生化試劑盒(批號(hào)：20181105)和MDA生化試劑盒(批號(hào)：20181026)均購自南京建成生物工程研究所。精煉豬油、高脂高糖飼料、普通飼料均由四川達(dá)碩生物科技有限公司提供。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 2100生物分析儀(美國Agilent公司)；Qubit3.0 Fluorometer(加拿大Invitrogen公司)；Illumina miseq測序儀(美國Illumina公司)含MiSeq Control軟件；5424R高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)(德國Eppendorf公司)；QL-866微型漩渦混合儀(美國Thermo公司)；HGC-12A氮吹儀(恒奧科技發(fā)展有限公司)；Nanodrop 2000超微量分光光度計(jì)(美國Thermo公司)；Qubit3.0 Qubit熒光計(jì)(德國Life公司)；Tecan酶標(biāo)儀(瑞士F200公司)；Covaris M220超聲波破碎儀(美國Covaris公司)；7900HT熒光定量PCR測定儀(美國Thermo公司)；ARSS4CN十萬分之一分析天平(美國Ohaus公司)；Arium mini超純水儀(德國Sartorius公司)；DZ-20半自動(dòng)中藥制丸機(jī)(青州市精誠醫(yī)藥裝備制造有限公司)；DL-720D超聲機(jī)(上海之信儀器有限公司)。

1.3 灌胃液制備

取附子、干姜、甘草、炒白術(shù)、黨參5種飲片(1∶1∶1∶1.5∶2)，按照2015年版《中國藥典》一部附子理中丸制法項(xiàng)下規(guī)定，粉碎成細(xì)粉，過篩，混勻。按比例加煉蜜，趁熱混勻制成小蜜丸[19]。取適量附子理中丸置于研缽中，加入適量0.5%CMC-Na溶液，研磨成糊狀，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，繼續(xù)加入0.5%CMC-Na溶液研磨，如此3～4次，待附子理中丸轉(zhuǎn)移完全后，加0.5%CMC-Na稀釋至刻度，分別制備成合生藥量為0.05、0.15 g/mL的混懸液。

將番瀉葉浸漬于純凈水中，每100 mL含生藥量100 g，于70 ℃恒溫水浴鍋浸漬過夜，濾過，濾液置4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

60只SD大鼠(250±20)g，SPF級(jí)，雄性，由四川達(dá)碩生物科技有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(川)2015-030。將60只大鼠隨機(jī)分為空白組，模型組，附子理中丸低、高劑量組，每組15只。于室溫20～25 ℃，相對濕度65%～69%環(huán)境下適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，期間自由進(jìn)食進(jìn)水。本文涉及的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究獲得成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(批準(zhǔn)號(hào)：2014DL-024)。

2 方法

2.1 造模與給藥

按照復(fù)合因素法“飲食失節(jié)+勞倦過度+番瀉葉灌胃”建立病證結(jié)合的大鼠脾陽虛IBS-D模型[20-22]：第一階段(第1～6天)，單日喂飼甘藍(lán)10 g/只，雙日喂高脂混合飼料10 g/只；每日下午，38 ℃溫水中游泳至疲勞(疲勞的標(biāo)準(zhǔn)為全身下沉至沒頸，不能堅(jiān)持游泳)。第二階段(第7～21天)，在第一階段施加因素的基礎(chǔ)上，每日加灌番瀉葉水浸液10 mL/kg。每日稱量并記錄各組大鼠體質(zhì)量。在造模第21天，每組隨機(jī)選擇6只大鼠，眼眶取血，進(jìn)行MDA、SOD指標(biāo)檢測[23-25]，同時(shí)結(jié)合腹瀉癥狀、體征與行為改變情況[26]，發(fā)現(xiàn)造模大鼠出現(xiàn)大便稀溏，體質(zhì)量明顯下降、喜扎堆、食欲不振、毛稀疏枯槁無光澤、游泳時(shí)間明顯縮短、肛門周圍污濁等現(xiàn)象，則可判定造模已成功。

造模成功后，模型組,附子理中丸低、高劑量組仍按復(fù)合因素法繼續(xù)造模。空白組、模型組每日于造模后5 h灌胃等量生理鹽水，附子理中丸低、高劑量組每日分別灌胃0.5、1.5 g/kg附子理中丸混懸液，各組連續(xù)灌胃給藥3周。

2.2 樣品采集與制備

42 d實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將大鼠處死，迅速取出直腸中內(nèi)容物至對應(yīng)編號(hào)的無菌凍存管中，置-80 ℃冰箱凍存，待測。

2.3 DNA提取與PCR擴(kuò)增

根據(jù)HiPure Soil DNA Kit B試劑盒說明書進(jìn)行總DNA提取，PCR擴(kuò)增細(xì)菌16S rRNA基因的V3～V4可變區(qū)(擴(kuò)增條件：94 ℃解鏈3 min，94 ℃ 5 s，57 ℃ 90 s，72 ℃ 10 s，24個(gè)循環(huán)，72 ℃終延伸5 min)，采用引物5'-CCTACGGRRBGCASCAGKVRGAAT-3'和5'-GGACTACNVGGGTWTCTAATCC-3'。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測進(jìn)行擴(kuò)增結(jié)果鑒定，根據(jù)Illumina MiSeq平臺(tái)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程構(gòu)建文庫。使用Agilent 2100生物分析儀檢測文庫質(zhì)量，Qubit 3.0 Fluorometer檢測文庫濃度，將文庫定量到10 nmol/L，Illumina MiSeq測序儀進(jìn)行PE250/FE300雙端測序，MiSeq Control Software讀取序列信息。

2.4 生物信息學(xué)分析

質(zhì)量過濾，去除嵌合體序列的有效序列用Vsearch(1.9.6)軟件聚類生成操作分類單元(OTU)，相似度為97%。參考數(shù)據(jù)庫Silva 132 16S rRNA database(http://www.arb-silva.de/)比對16S rRNA，用RDP classifier對代表性序列進(jìn)行物種分類學(xué)分析。隨機(jī)抽樣進(jìn)行α多樣性指數(shù)分析，作出稀釋曲線。用R語言軟件進(jìn)行PCoA分析，基于Brary-Curtis距離矩陣，提取數(shù)據(jù)中最“主要”的元素和結(jié)構(gòu)，對一系列的特征值和特征向量進(jìn)行排序，選擇排在前幾位的特征值，做主坐標(biāo)圖，可視化展示樣本β多樣性。LEfSe采用LEfSE在線分析工具(http://huttenhower.sph.harvard.edu/galaxy/root?tool_id=lefse_uploa)揭示基因組特征，識(shí)別高維生物標(biāo)識(shí)，篩選差異物種(LDA>3)。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 脾陽虛IBS-D模型的建立

造模21 d后，在體征與行為表現(xiàn)方面，所有造模大鼠均存在體質(zhì)量明顯下降，食欲不振，喜扎堆，蜷伏懶動(dòng)，毛稀疏枯槁無光澤，游泳時(shí)間明顯縮短，大便稀溏，肛門周圍污濁等現(xiàn)象，初步判定造模成功。測定MDA含量和SOD活力，如表1所示，造模大鼠(模型組和附子理中丸給藥組)較空白大鼠MDA含量顯著升高(P<0.05)，SOD活性顯著降低(P<0.05)，綜合判斷造模已成功。

表1 造模后各組大鼠MDA含量和SOD活力比較

3.2 樣本量合理性考察

如圖1所示，稀釋曲線和物種累積曲線結(jié)果顯示各樣本的有效序列(>40 000)和總的樣本數(shù)量(40)都能使菌群得到有效的檢測和覆蓋。同時(shí)，所有樣本的Good's coverage指數(shù)均達(dá)到99.8%以上，全部待測樣本的測序覆蓋率好，能代表糞便菌群中絕大部分細(xì)菌。

注：A1～A10.空白組10個(gè)樣本；B1～B10.模型組10個(gè)樣本；C1～C10.附子理中丸低劑量組10個(gè)樣本；D1～D10.附子理中丸高劑量組10個(gè)樣本圖1 稀釋曲線圖(a)和物種累積曲線圖(b)

3.3 菌群的多樣性分析

采用α和β多樣性分析，描述和評價(jià)菌群的整體結(jié)構(gòu)。對α多樣性指數(shù)進(jìn)行SPSS統(tǒng)計(jì)分析(表2)，表征菌群豐度的ACE(P<0.01)、Chao1(P<0.01)和多樣性的Shannon(P<0.01)在空白組與模型組之間具有顯著性差異，表明模型組的菌群豐度和多樣性較空白組顯著下降(P<0.01)，模型組菌群整體結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化。相較于模型組，附子理中丸給藥組的ACE、Chao1、Shannon指標(biāo)有上升趨勢，表明附子理中丸對菌群的豐度和多樣性有一定的調(diào)節(jié)作用。β多樣性分析中Unweighted unifrac距離矩陣熱圖(圖2)顯示空白組與模型組之間的顏色普遍較深，相異系數(shù)較大?？瞻捉M與附子理中丸低、高劑量組之間也有較深色塊，但少于空白組與模型組之間，提示脾陽虛IBS-D造成了較大的菌群差異，而附子理中丸的干預(yù)有助于減少這種差異。

表2 α多樣性指數(shù)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表

根據(jù)信息的提取和特征值的排列，PCoA主坐標(biāo)分析結(jié)果中第一主坐標(biāo)(PC1)、第二主坐標(biāo)(PC2)和第三主坐標(biāo)(PC3)的貢獻(xiàn)率分別為28.31%、11.62%、9.98%。圖2中樣品點(diǎn)距離的遠(yuǎn)近代表了樣品中功能分類分布的相似性，距離越近，相似度越高。4個(gè)組組內(nèi)聚集性良好，同組樣本內(nèi)部菌群結(jié)構(gòu)的相似性明顯?？瞻捉M和模型組之間的菌群結(jié)構(gòu)有明顯的差異；附子理中丸給藥組呈現(xiàn)出明顯的與模型組分離，向正常組靠近的趨勢。

注：FLZP.附子理中丸;A1～A10.空白組10個(gè)樣本；B1～B10.模型組10個(gè)樣本；C1～C10.附子理中丸低劑量組10個(gè)樣本；D1～D10.附子理中丸高劑量組10個(gè)樣本圖2 距離矩陣熱圖和主坐標(biāo)分析圖

3.4 菌群的豐度變化

3.4.1 脾陽虛IBS-D模型大鼠的腸道菌群變化 門水平：與空白組相比，模型組的擬桿菌門(Bacteroidetes)相對豐度顯著降低(P<0.05)。綱水平：模型組的擬桿菌綱(Bacteroidia)相對豐度顯著降低(P<0.05)。科水平：模型組的梭菌_1(Clostridiaceae_1)相對豐度顯著升高(P<0.01)，Muribaculacea相對豐度顯著降低(P<0.01)。屬水平：模型組的狹義梭菌屬(Clostridium_sensu_stricto_1)、蘇黎世桿菌屬(Turicibacter)、布勞特氏菌屬(Blautia)、乳桿菌屬(Lactobacillus)的相對豐度均顯著升高(P<0.01)，如圖3所示。

3.4.2 附子理中丸對脾陽虛IBS-D模型大鼠腸道菌群的影響 門水平：與模型組比較，附子理中丸給藥組的擬桿菌門(Bacteroidetes)相對豐度顯著增高(P<0.05,P<0.01)。綱水平：附子理中丸給藥組的擬桿菌綱(Bacteroidia)相對豐度顯著升高(P<0.05,P<0.01)。科水平：附子理中丸給藥組的梭菌_1(Clostridiaceae_1)相對豐度顯著降低(P<0.01)，Muribaculacea相對豐度顯著升高(P<0.05)。屬水平：附子理中丸給藥組的狹義梭菌屬(Clostridium_sensu_stricto_1)、蘇黎世桿菌屬(Turicibacter)、布勞特氏菌屬(Blautia)的相對豐度均顯著降低(P<0.01)。附子理中丸給藥組的乳桿菌屬(Lactobacillus)相對豐度均出現(xiàn)升高，其中附子理中丸高劑量組出現(xiàn)顯著升高(P<0.05)，如圖3所示。

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；與空白組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；FLZP.附子理中丸。

3.4.3 差異菌群篩選 LEfSe分析結(jié)果顯示，附子理中丸可以回調(diào)脾陽虛IBS-D紊亂的腸道菌群。擬桿菌門(Bacteroidetes)、擬桿菌綱(Bacteroidia)、Muribaculaceae、梭菌科(Clostridiaceae)、狹義梭菌屬(Clostridium_sensu_stricto_1)、蘇黎世桿菌屬(Turicibacter)、布勞特氏菌屬(Blautia)共7個(gè)腸道菌群類群在附子理中丸低、高劑量組均出現(xiàn)相同回調(diào)趨勢，如表3和圖4所示。附子理中丸高劑量組進(jìn)一步提高了乳桿菌屬(Lactobacillus)的相對豐度，如圖4所示。

表3 標(biāo)識(shí)性菌群分析結(jié)果表(n=10)

注：a.進(jìn)化分支圖；b.LDA值分布柱狀圖。n=10。

4 討論

相比于正常的機(jī)體，擬桿菌門(Bacteroidetes)、擬桿菌綱(Bacteroidia)、Muribaculaceae、梭菌科(Clostridiaceae)、狹義梭菌屬(Clostridium_sensu_stricto_1)、蘇黎世桿菌屬(Turicibacter)、布勞特氏菌屬(Blautia)、乳桿菌屬(Lactobacillus)在脾陽虛機(jī)體中都出現(xiàn)了顯著性的變化，這些都可能是脾陽虛機(jī)體的特征菌群。

腸易激綜合征(Irritable bowel syndrome,IBS)是臨床最常見的功能性胃腸病之一,全球的發(fā)病率約為10%～20%[27]。IBS-D是IBS最主要表型之一，目前大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為IBS-D是多種因素共同作用的結(jié)果。其傳統(tǒng)的治療藥物(如抗生素、胃腸動(dòng)力調(diào)節(jié)劑、止瀉劑等)常針對某一特定機(jī)制進(jìn)行，無法標(biāo)本兼治，且存在副作用，若用藥失度易衍生新的醫(yī)源性疾病。近年來，中醫(yī)藥治療IBS-D取得了良好的效果[28-30]。作為治療脾陽虛泄瀉的經(jīng)典方劑，附子理中丸全方由理中丸加補(bǔ)火助陽之附子而成，附子、干姜共用以溫運(yùn)中陽，驅(qū)散中寒。合白術(shù)以健脾燥濕，加黨參以益氣健脾，并行炙甘草以調(diào)和諸藥，解其毒性兼補(bǔ)脾和中。故五藥合用以奏溫中焦，補(bǔ)下焦，脾腎并治，補(bǔ)腎火而溫脾陽之效。在臨床上附子理中丸被發(fā)現(xiàn)可以有效地提高IBS-D的治愈率[16-18]。越來越多的研究也發(fā)現(xiàn)，腸道菌群失調(diào)與IBS-D存在明顯相關(guān)性，其機(jī)制可能是腸道菌群紊亂引起腸黏膜的過度免疫反應(yīng)和持續(xù)的腸道慢性炎癥，最終誘發(fā)IBS-D的發(fā)生[31]。故本研究建立大鼠脾陽虛IBS-D模型，重點(diǎn)選擇與炎癥/免疫反應(yīng)密切相關(guān)的4個(gè)菌群，研究附子理中丸治療脾陽虛IBS-D的機(jī)制。值得注意的是，脾陽虛證多由脾氣虛日久累及脾陽而致，或由腎陽不足，命門火衰所致，故脾陽虛模型造模時(shí)間較長，在長期游泳致力竭以及寒涼藥物瀉下處理過程中，部分大鼠可能死亡，因此造模過程需要預(yù)留足夠的樣本量，以便后續(xù)實(shí)驗(yàn)的順利開展。本實(shí)驗(yàn)以每組15只大鼠進(jìn)行造模，在造模成功后每組選取10只進(jìn)行后續(xù)給藥及指標(biāo)檢測。

勞特氏菌屬(Blautia)相對豐度與IL-6水平呈正相關(guān)性(P<0.05)[32]。如圖5所示，布勞特氏菌屬的變化可引起IL-6的變化，進(jìn)而激活JAK-STAT信號(hào)通路，促進(jìn)更多的免疫因子分泌，誘導(dǎo)機(jī)體的炎癥及自身免疫反應(yīng)。給予附子理中丸后，布勞特氏菌屬相對豐度降低，可促使機(jī)體炎癥反應(yīng)得到改善。蘇黎世桿菌屬(Turicibacter)的相對豐度則與促進(jìn)機(jī)體炎癥反應(yīng)和免疫激活的恒定自然殺傷T細(xì)胞之間存在著潛在的正相關(guān)[33-34]。給予附子理中丸后，蘇黎世桿菌相對豐度的顯著降低，也表明機(jī)體炎癥得到改善。擬桿菌門(Bacteroidetes)作為人體及高等哺乳動(dòng)物腸道內(nèi)最為優(yōu)勢的革蘭氏陰性菌之一，其死亡裂解脫落的脂多糖(LPS)與LPS結(jié)合蛋白(LBP，可作為內(nèi)毒素血癥的標(biāo)記物)以及細(xì)胞表面的CD14分子結(jié)合后，可激活NF-κB信號(hào)通路，促進(jìn)多種促炎因子的表達(dá)，導(dǎo)致內(nèi)毒素血癥，產(chǎn)生系統(tǒng)炎癥[35-37]。在本研究中，LEfSe分析結(jié)果顯示，在IBS-D模型組中擬桿菌門的相對豐度顯著降低，給予附子理中丸后擬桿菌門的相對豐度顯著升高。研究結(jié)果表明，附子理中丸可以通過回調(diào)相關(guān)菌群改善其異常紊亂狀態(tài)，進(jìn)而緩解脾陽虛IBS-D長期存在的過度免疫反應(yīng)和持續(xù)的腸道慢性炎癥。

乳桿菌屬(Lactobacillus)作為機(jī)體重要的益生菌群，除了幫助機(jī)體轉(zhuǎn)化營養(yǎng)物質(zhì)外，更重要的是積極參與了機(jī)體的免疫系統(tǒng)[38]。一方面，乳桿菌可以通過和機(jī)體的信號(hào)交流調(diào)控免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)機(jī)體抵抗疾病不良影響的能力，如來源于乳桿菌的P40蛋白在研究中被發(fā)現(xiàn)可以通過激活EGFR/NF-κB刺激腸道上皮細(xì)胞分泌APRIL，從而促進(jìn)腸道抗感染抗體IgA的生成(圖5)[39-41]；另一方面，乳桿菌可以通過自身的增殖占位，形成生物屏障，拮抗病原微生物的定植，抑制腸道菌群的紊亂，同時(shí)使緊密連接相關(guān)蛋白重新分布，正?；c道上皮細(xì)胞間緊密連接結(jié)構(gòu)，并且抑制上皮細(xì)胞凋亡，最終協(xié)助恢復(fù)腸壁屏障的功能[38,40-41]。本文的研究結(jié)果顯示，相對于空白組，脾陽虛IBS-D組乳桿菌屬的相對豐度顯著增加，一方面推測可能是因?yàn)槿闂U菌作為與宿主協(xié)同互助的益生菌，當(dāng)機(jī)體免疫力低下，可能發(fā)生疾病時(shí)，腸道上皮細(xì)胞和腸道淋巴組織與腸道菌群之間可能通過某種通路，進(jìn)行信息傳遞與交換[41]，乳桿菌數(shù)量通過機(jī)體的自我保護(hù)代償性機(jī)制而受到調(diào)節(jié)并增多，進(jìn)而促進(jìn)機(jī)體恢復(fù)正常；另一方面，可能是因?yàn)槟Ｐ徒M大鼠脾的運(yùn)化功能受損，腸道菌群可利用的營養(yǎng)物質(zhì)減少，乳桿菌屬這一優(yōu)勢菌種能通過其優(yōu)勢生長，競爭性爭奪潛在致病菌的營養(yǎng)，抑制腸道菌群的紊亂。給予附子理中丸后乳桿菌屬的相對豐度進(jìn)一步增長，推測可能是由于附子理中丸促進(jìn)了脾的功能恢復(fù)，進(jìn)而協(xié)助了機(jī)體內(nèi)共生菌的增長，而共生菌的繁殖，進(jìn)一步可持續(xù)參與腸道黏膜修復(fù)、免疫應(yīng)答等一系列生理調(diào)節(jié)過程。

本研究結(jié)果表明，影響和調(diào)控腸道菌群是附子理中丸治療IBS-D的重要機(jī)制之一，其通過增加乳桿菌和擬桿菌相對豐度，降低蘇黎世桿菌和布勞特氏菌相對豐度，來改善機(jī)體的腸道微生態(tài)失衡狀態(tài)，從而產(chǎn)生降低機(jī)體的低度炎癥和減少免疫的過度激活等作用，進(jìn)而發(fā)揮治療IBS-D的作用。同時(shí)，從腸道菌群角度出發(fā)，目前也將益生菌療法作為治療IBS-D的有效方法[42-44]。有臨床研究發(fā)現(xiàn)益生菌聯(lián)合附子理中丸可進(jìn)一步提高IBS-D治愈率[18]，一定程度上與附子理中丸可以有效地提高乳桿菌屬的相對豐度有關(guān)。本論文為附子理中丸的深入研究與臨床應(yīng)用提供了新的參考。

注：a.機(jī)制圖；b.信號(hào)通路圖