鄭云楓，李 洋，段偉萍，趙晨光，孫 捷，李存玉，彭國平*

1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京 210023

2.江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 南京 210023

黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.) Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根[1]，具有補(bǔ)氣升陽、固表止汗之功效?，F(xiàn)代研究表明，黃芪中含有豐富的異黃酮類活性成分，具有抗氧化[2-3]、抗炎[4-5]、免疫調(diào)節(jié)[6-7]、抗衰老[8]等活性，是黃芪中主要活性成分類型之一，現(xiàn)行多個(gè)國家及地區(qū)的藥典亦把異黃酮成分作為黃芪藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)的指標(biāo)?！吨袊幍洹?015年版黃芪藥材及飲片項(xiàng)下將毛蕊異黃酮7-O-β-D-葡萄糖苷（calycosin-7-O-glycoside，CYG）作為異黃酮類成分含量測(cè)定的指標(biāo)[1]；《美國藥典》2017年版將CYG、芒柄花苷（formononetin-7-Oglycoside，F(xiàn)MG）、毛蕊異黃酮（calycosin，CY）及芒柄花素（formononetin，F(xiàn)M）4個(gè)成分作為黃芪藥材項(xiàng)下異黃酮類含量測(cè)定指標(biāo)，并規(guī)定了總含量限度不得低于0.03%[9]。值得注意的是，黃芪藥材及飲片中除了以上幾種常見的異黃酮成分外，亦含有丙二酰毛蕊異黃酮苷（calycosin-7-Oglycoside-6′′-O-malonate，CYM）、丙二酰芒柄花苷（formononetin-7-O-glycoside-6′-O-malonate，F(xiàn)MM）等含量高，且具有生理活性的丙二?；慄S酮苷成分[10-11]。因此，僅以CYG等單一或幾個(gè)異黃酮成分作為含量測(cè)定指標(biāo)，尚不能全面反映黃芪的內(nèi)在質(zhì)量，應(yīng)綜合考慮丙二酰異黃酮苷成分修訂黃芪質(zhì)量控制方法。

已有文獻(xiàn)對(duì)黃芪中異黃酮類成分開展了質(zhì)量控制研究，采用HPLC-UV、LC-MS/MS等建立了以異黃酮單一或多指標(biāo)的定性/定量檢測(cè)方法[12-14]。研究發(fā)現(xiàn)，雖然藥材中CYM含量較高，但它的結(jié)構(gòu)并不十分穩(wěn)定，在較高溫度條件下提取或長(zhǎng)期存放過程中容易脫乙?；D(zhuǎn)化成相應(yīng)的異黃酮苷，由于對(duì)照品制備困難，因此在已有的研究中往往采用長(zhǎng)時(shí)間回流轉(zhuǎn)化法[1]或峰面積歸一化法[15-16]等進(jìn)行分析，方法的效率及耐用性不高，含量測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度亦受影響，因而其質(zhì)量控制方法仍有待進(jìn)一步的完善。

本研究在現(xiàn)有文獻(xiàn)以及前期黃芪丙二?；慄S酮苷化學(xué)成分研究的基礎(chǔ)上，首次以CYG為內(nèi)參物，從供試品溶液制備、色譜條件優(yōu)化、方法學(xué)考察及相對(duì)校正因子等多個(gè)方面，建立同步測(cè)定黃芪藥材及飲片中CYM、FMM、CYG、FMG、CY及FM6種異黃酮類成分的一測(cè)多評(píng)（quantitative determination analysis multi-component by a single-marker，QAMS）質(zhì)量控制方法。該法檢測(cè)成本低，耐用性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高，可以為黃芪藥材及飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂或修訂提供技術(shù)依據(jù)，并可為黃芪的品質(zhì)評(píng)價(jià)、生產(chǎn)加工以及資源開發(fā)等研究提供支撐。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Waters 2695型高效液相色譜儀，2998 PDA檢測(cè)器，Empower色譜工作站（美國Waters公司）；Agilent 1100高效液相色譜儀，VWD紫外檢測(cè)器，Agilent Chemstation色譜工作站（美國Agilent公司）；Thermo U 3000高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器，Chromeleon TM 7色譜工作站（Thermo公司）；色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）：Waters Symmetry C18、Thermo Hypersil ODS、Vensil XBP C18、Phenomenex luna C18，Kromasil C18、Hedra C18、Agilent Eclipse XDB C18、Boston Green ODS；MS-105DU電子天平（十萬分之一，梅特勒-托利多儀器有限公司）；KH-500DB數(shù)控超聲儀（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）。

1.2 材料與試劑

CYG（批號(hào)111920-201606，質(zhì)量分?jǐn)?shù)97.6%）、FM（批號(hào)111703-201504，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）均購于中國食品藥品檢定研究院。FMG（批號(hào)JBZ-0778，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%），CY（批號(hào)JBZ-0786，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）均購于南京金益柏生物科技有限公司。CYM、FMM對(duì)照品均由實(shí)驗(yàn)室自制[17]，經(jīng)HPLC分析，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%；乙腈（色譜純，美國Tedia公司）；甲醇（色譜純，江蘇漢邦科技有限公司），甲酸（色譜純，Merck公司）；超純水（Milli-Q超純水系統(tǒng)制備）。

16批黃芪藥材采集于山西大同渾源縣、內(nèi)蒙古包頭固陽縣、內(nèi)蒙古通遼開魯縣、陜西榆林子洲縣、甘肅定西岷縣藥材種植基地，3批黃芪飲片購自安徽亳州藥材市場(chǎng)及南京藥店。黃芪藥材由南京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教授劉訓(xùn)紅教授鑒定為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.) Bge.var.mongholicus(Bge.) Hsiao或膜莢黃芪A.membranaceus(Fisch.) Bge.的干燥根，信息見表1。

表1 黃芪藥材及飲片樣品采集信息Table 1 Specific information of collected Astragali Radix and decoction pieces

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent 1100高效液相色譜儀；Waters Symmetry C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱；流動(dòng)相為乙腈（A）和0.2%甲酸（B）；梯度洗脫：0～25 min，15%～32% A；25～50 min，32%～62% A；檢測(cè)波長(zhǎng)260 nm；體積流量1.0 mL/min；柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL。在當(dāng)前色譜條件下，各色譜峰分離度＞1.5，拖尾因子≈1.00，見圖1。

圖1 黃芪混合對(duì)照品 (A) 和樣品 (B) HPLC圖Fig.1 HPLC chromatograms of mixed references (A) and Astragali Radix samples (B)

2.2 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取CYG、CYM、FMG、FMM、CY及FM對(duì)照品適量，置10 mL量瓶中，加甲醇（含0.1%甲酸）溶解并定容至刻度，配制成質(zhì)量濃度分別為209、176、96、87、76、95 μg/mL的混合溶液， 即得1號(hào)混合對(duì)照品溶液。將1號(hào)混合對(duì)照品溶液依次稀釋2.5、5、10、25、50、100倍，制備得2～7號(hào)混合對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

黃芪異黃酮含量測(cè)定提取方法常采用甲醇回流提取或超聲提取，因此對(duì)2種提取方法及提取時(shí)間進(jìn)行了考察：取本品粉末（過四號(hào)篩）約1.0 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇（含0.1%甲酸）50 mL，稱定質(zhì)量，分別按回流提取和超聲（功率250 W，頻率 40 kHz）2種方法分別提取0.5、1、2、4、6、8 h，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，40 ℃條件下回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状迹ê?.1%甲酸）溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇（含0.1%甲酸）至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)行HPLC分析，以6個(gè)成分的峰面積為指標(biāo)，對(duì)不同提取方法及時(shí)間條件下的提取效果進(jìn)行比較，見圖2。

圖2 甲醇回流提取 (A) 和超聲提取 (B) 對(duì)黃芪供試品液中6個(gè)異黃酮及苷類成分峰面積變化的影響Fig 2 Effects of methanol reflux extraction (A) and ultrasonic extraction (B) on peak area of six isoflavones and glycosides in Astragali Radix sample solution

結(jié)果顯示，在回流提取條件下隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，2個(gè)丙二酰異黃酮苷CYM和FMM的峰面積明顯下降，2個(gè)相應(yīng)的異黃酮苷CYG和FMG的峰面積顯著上升，但異黃酮苷元CY和FM的峰面積基本沒有變化，推測(cè)應(yīng)為丙二酰異黃酮苷在加熱條件下轉(zhuǎn)化為相應(yīng)黃酮苷所致，與文獻(xiàn)報(bào)道相一致[13]；而在超聲提取條件下，6個(gè)異黃酮及苷類成分在8 h提取過程中峰面積的變化均不十分明顯。因此，選擇采用甲醇超聲的方式提取樣品，并進(jìn)一步針對(duì)甲醇體積分?jǐn)?shù)（20%、40%、60%、80%、100%），溶劑體積（25、50、75、100 mL）以及提取時(shí)間（15、30、45、60 min）進(jìn)行了優(yōu)選，結(jié)果顯示，采用100%甲醇為提取溶劑時(shí)6個(gè)異黃酮及苷類成分提取率相對(duì)較高，而溶劑提取體積及提取時(shí)間對(duì)各成分提取效果影響不明顯，最終確定了供試品溶液的制備方法，即取本品粉末（過四號(hào)篩）約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇（含0.1%甲酸）50 mL，稱定質(zhì)量，超聲（功率250 W，頻率40 kHz）處理0.5 h，取出，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，40 ℃條件下回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状迹ê?.1%甲酸）溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇（含0.1%甲酸）至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性范圍、檢測(cè)限與定量限 將“2.2”項(xiàng)下制得的混合對(duì)照品溶液，每個(gè)濃度進(jìn)樣2針，分別測(cè)定6個(gè)異黃酮類成分峰面積，以每個(gè)成分質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），平均峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸處理，得到6個(gè)成分的回歸方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍。進(jìn)一步以7號(hào)對(duì)照品液逐級(jí)稀釋、測(cè)定，確定各成分的檢測(cè)限及定量限，結(jié)果顯示，6種異黃酮類成分在相應(yīng)濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，并具有較高的靈敏度，見表2。

表2 6種異黃酮成分的回歸方程、線性范圍和檢測(cè)限、定量限Table 2 Regression equations,linear range,limit of detection and limit of quantitation of six isoflavoniod components

2.4.2 精密度試驗(yàn) 取同一混合對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積，計(jì)算質(zhì)量分?jǐn)?shù)RSD。結(jié)果CYG、CYM、FMG、FMM、CY及FM峰面積RSD分別為1.85%、0.77%、1.69%、1.13%、0.97%及0.88%。

取同一黃芪樣品，依“2.1”項(xiàng)與“2.3”項(xiàng)下方法制備與分析，測(cè)得峰面積，計(jì)算質(zhì)量分?jǐn)?shù)RSD。結(jié)果CYG、CYM、FMG、FMM、CY及FM峰面積RSD分別為1.47%、0.68%、1.05%、1.37%、0.55%、1.15%。表明儀器的精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一混合對(duì)照品溶液，在0、2、4、6、8、10、12 h測(cè)得峰面積，計(jì)算質(zhì)量分?jǐn)?shù)RSD。結(jié)果CYG、CYM、FMG、FMM、CY及FM峰面積RSD分別為2.37%、1.00%、2.53%、1.66%、1.85%及1.66%。

取同一黃芪藥材樣品，依法制備與分析，在0、2、4、6、8、10、12 h測(cè)得峰面積，結(jié)果CYG、CYM、FMG、FMM、CY及FM質(zhì)量分?jǐn)?shù)RSD分別為1.58%、1.28%、1.14%、1.76%、1.20%、0.99%。表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次（SX-3）黃芪藥材樣品，平行6份，依“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，并計(jì)算各成分的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)及RSD，結(jié)果測(cè)得該批次黃芪藥材樣品的CYG、CYM、FMG、FMM、CY及FM的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.474、0.671、0.163、0.124、0.263、0.059 mg/g，RSD分別為0.93%、0.87%、1.21%、1.82、1.16%，0.15%。表明方法的重復(fù)性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 取已測(cè)定的黃芪藥材（SX-3）粉末（過四號(hào)篩）約0.5 g，精密稱定，平行6份，分別按藥材含量-對(duì)照品（1∶1）加入一定量的對(duì)照品溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，CYG、CYM、FMG、FMM、CY及FM的加樣回收率分別為100.2%、97.4%、98.9%、101.5%、97.4%、98.2%，RSD分別為1.28%、1.07%、3.50%、1.54%、1.52%、2.93%。

2.5 相對(duì)校正因子 (fs/i) 的確定

2.5.1 相對(duì)校正因子的計(jì)算 按“2.2”項(xiàng)下方法制備1～6號(hào)混合對(duì)照品溶液，依法測(cè)定6個(gè)成分的峰面積，以CYG為參照物，分別采用多點(diǎn)法和斜率法[18]計(jì)算CYG、FMG、CY、FMM及FM相對(duì)于CYG的fCYM/CYG、fFMG/CYG、fCY/CYG、fFMM/CYG、fFM/CYG，結(jié)果見表3、4。

表3 多點(diǎn)法測(cè)定的fs/iTable 3 Relative correction factors (RCFs) calculated by multi-point method

表4 斜率法測(cè)定的fs/i (n＝6)Table 4 Relative correction factors (RCFs) calculated by slope method (n＝6)

結(jié)果顯示，采用多點(diǎn)法計(jì)算獲得的fCYM/CYG、fFMG/CYG、fCY/CYG、fFMM/CYG、fFM/CYG分別為0.961、0.843、0.675、0.859及0.530，與斜率法計(jì)算的結(jié)果沒有顯著性差異，兩者的相對(duì)誤差分別為?2.73%、?1.11%、?0.65%、?2.93%、?2.24%，均小于3.0%，表明兩者fs/i均可采用。

2.5.2 不同高效液相色譜儀及色譜柱測(cè)得的相對(duì)校正因子比較 采用Agilent 1100，Waters 2695，Thermo U3000 3種不同高效液相色譜儀，以Thermo hypersil C18、Waters symmetry C18、Agela Vensil XBP C183種不同品牌的色譜柱，分別測(cè)定并計(jì)算各成分與CYG的fs/i，結(jié)果顯示3種品牌色譜柱在不同HPLC儀上所測(cè)定的fs/i的RSD＜3.0%，表明黃芪中6個(gè)異黃酮成分在不同高效液相色譜儀及色譜柱上的耐用性較好，見表5。

表5 不同色譜柱在不同高效液相色譜儀條件下測(cè)得的fs/iTable 5 RCFs measured by three C18 columns on different HPLC instruments

2.5.3 不同柱溫對(duì)fs/i的影響 采用Aglient 1100色譜儀和Thermo hypersil C18色譜柱，分別測(cè)定并計(jì)算不同柱溫條件下（25、30、35 ℃）各成分與CYG的fs/i，計(jì)算RSD。結(jié)果顯示，fCYM/CYG、fFMG/CYG、fCY/CYG、fFMM/CYG、fFM/CYG在不同溫度條件下的RSD分別為0.15%、0.34%、0.46%、0.32%、0.43%，表明相對(duì)校正因子在溫度25～35 ℃的耐受性良好。

2.5.4 不同體積流量對(duì)fs/i的影響 采用Aglient 1100色譜儀和Waters symmetry C18色譜柱，分別測(cè)定了不同體積流量條件下（0.9、1.0、1.1 mL/min）各成分與CYG的fs/i，結(jié)果顯示，fCYM/CYG、fFMG/CYG、fCY/CYG、fFMM/CYG、fFM/CYG在不同體積流量下的RSD分別為0.23%、0.64%、0.29%、0.58%、0.73%，表明fs/i在體積流量0.9～1.1 mL/min的耐受性良好。

2.5.5 待測(cè)成分色譜峰的定位 中藥化學(xué)成分復(fù)雜，色譜圖中除了待測(cè)成分峰外還存在其它色譜峰，因此待測(cè)成分色譜峰的準(zhǔn)確定位是實(shí)現(xiàn)QAMS的前提。對(duì)黃芪樣品中6個(gè)待測(cè)組分的保留時(shí)間進(jìn)行了考察，采用與參照物的“保留時(shí)間差法”和“相對(duì)保留時(shí)間法”進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示，不同儀器和不同色譜柱對(duì)待測(cè)成分與參照物保留時(shí)間絕對(duì)差值的影響較大，RSD超過10%；相對(duì)而言，待測(cè)成分與參照物相對(duì)保留時(shí)間的差異較小（表6），CYM、FMG、FMM、CY及FM相對(duì)于CYG的相對(duì)保留時(shí)間（RT）均值分別為1.497、1.823、2.200、2.311、3.202，RSD≤3.85%，表明采用待測(cè)組分與內(nèi)參物相對(duì)保留時(shí)間值來定位具有可行性。

表6 不同高效液相/不同色譜柱下各組分測(cè)得的相對(duì)保留時(shí)間Table 6 Relative retention time measured in different instruments and columns

2.5.6 樣品含量測(cè)定及QAMS法的驗(yàn)證 按“2.3”項(xiàng)下方法，分別制備采集的16批不同產(chǎn)地黃芪藥材以及3批市售飲片供試品溶液，依法測(cè)定，進(jìn)一步采用外標(biāo)法（external standard method，ESM）和QAMS法對(duì)所測(cè)得的數(shù)據(jù)分別進(jìn)行含量計(jì)算，并以相對(duì)誤差（relative error，RE）進(jìn)行評(píng)價(jià)，以驗(yàn)證QAMS法測(cè)定上述6種異黃酮類成分含量的準(zhǔn)確性，結(jié)果見表7。結(jié)果顯示，在16批不同產(chǎn)地來源藥材及3批市售飲片均能測(cè)得6個(gè)異黃酮成分，其樣品ESM法含量測(cè)定結(jié)果與QAMS法測(cè)得的結(jié)果相比差異較小，RE＜5.0%，表明QAMS法檢測(cè)的含量結(jié)果較為準(zhǔn)確。

表7 ESM法與QAMS法測(cè)定黃芪中6種異黃酮成分的含量 (n＝2)Table 7 Content of six isoflavonoids in samples of Astragali Radix by QAMS and ESM (n＝2)

3 討論

在前期研究及文獻(xiàn)報(bào)道的基礎(chǔ)上，首次建立了以CYG為內(nèi)參物，同步測(cè)定CYM、FMG、FMM、CY及FM等6種異黃酮類成分的QAMS方法，該方法檢測(cè)簡(jiǎn)便、耐用性好、準(zhǔn)確度高、成本較低，可以為黃芪藥材和飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供技術(shù)依據(jù)。

3.1 分析方法的建立與優(yōu)化

采用二極管陣列檢測(cè)器，對(duì)6個(gè)異黃酮類成分進(jìn)行了200～400 nm全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果顯示CYG、CYM、FMG、FMM、CY和FM 6個(gè)成分的紫外光譜圖十分相似，均在248～258 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。研究發(fā)現(xiàn)，在254 nm波長(zhǎng)條件下6種待測(cè)成分的靈敏度均較好，且色譜圖中基線平穩(wěn)，具有良好的基線分離，可以滿足定量分析的要求，因此，最終選擇254 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)供試品溶液的提取方式進(jìn)行了較為系統(tǒng)的考察，對(duì)提取方式（回流和超聲）、提取溶劑（甲醇20%、40%、60%、80%、100%），溶劑體積（25、50、75、100 mL）、提取時(shí)間（15、30、45、60 min）進(jìn)行了考察，同時(shí)考慮到丙二酰基異黃酮成分中酯鍵的穩(wěn)定性，在提取溶劑及供試品溶液甲醇中加入了0.1%的甲酸，不僅可以降低丙二?；慄S酮苷的降解轉(zhuǎn)化，提升供試品溶液的穩(wěn)定性，而且弱酸性條件還可以使得樣品中異黃酮成分更好地呈現(xiàn)分子態(tài)，保證溶劑提取的效果。

本實(shí)驗(yàn)色譜條件優(yōu)化過程中發(fā)現(xiàn)，不同型號(hào)C18色譜柱對(duì)異黃酮類成分的分離效果影響顯著，在考察的已有8種型號(hào)色譜柱中，僅Waters Symmetry C18，Thermo Hypersil ODS，Agela Vensil XBP C183種色譜柱可以實(shí)現(xiàn)對(duì)6個(gè)異黃酮組分的有效分離（R＞1.5），其余色譜柱的分離效果均不佳，尤其是不能將CY與FMM色譜峰分開，影響分析結(jié)果。從固定相填料性質(zhì)上看，這3種型號(hào)均為硅膠基質(zhì)上硅醇基封端的C18填料，其穩(wěn)定性及選擇性較好，可作為黃芪質(zhì)量分析用色譜柱。

3.2 參照物的選擇

參照QAMS法建立的技術(shù)指南[19]，內(nèi)參物盡量選擇在樣品中含量較高，保留時(shí)間適中的有效成分，本實(shí)驗(yàn)選擇CYG為內(nèi)參物，主要考慮該物質(zhì)在《中國藥典》黃芪藥材標(biāo)準(zhǔn)中已有使用，性質(zhì)穩(wěn)定且易于獲得，故選其作為QAMS法的內(nèi)參物。以CYG為參照物時(shí)，各成分fs/i的RSD均小于3.5%，不同柱溫、不同體積流量、不同色譜柱對(duì)fs/i的影響較?。≧SD＜3%），表明選擇CYG作為內(nèi)參物建立QAMS法可行。

3.3 黃芪中異黃酮類成分QAMS質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定分析

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，黃芪中苷類成分（CYG、CYM、FMG、FMM）含量較高，而苷元（CY、FM）含量相對(duì)較低。值得注意的是，本實(shí)驗(yàn)研究中檢測(cè)的2018年采集的7批藥材成分含量與剛采集時(shí)測(cè)定的含量相比，CYG、CYM、FMG、FMM含量發(fā)生了明顯下降，而CY及FM含量顯著上升，其苷類成分平均總含量與苷元成分平均總含量的比值為3∶1，明顯要低于2019年采集的9批黃芪藥材中兩者10∶1的比值。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)[20]，在溫度37 ℃及潤(rùn)濕條件下，藥材或飲片中丙二?；慄S酮苷及異黃酮苷成分會(huì)發(fā)生酶解而轉(zhuǎn)化生成異黃酮苷元，使得苷類成分含量下降而苷元成分顯著升高。本研究中2018年采集藥材存放時(shí)間較長(zhǎng)，且所在地區(qū)夏季溫潤(rùn)潮濕，易于酶解，這可能是導(dǎo)致該年度樣本中異黃酮苷含量降低而異黃酮苷元含量相對(duì)升高的原因。

黃芪飲片在臨床及制劑工藝中大多以水煎煮提取為主，其水提取物及配方顆粒中主要為CYG等苷類成分[21]，苷元因極性小基本不被水提取出，因此酶解過程很可能會(huì)影響到黃芪質(zhì)量及臨床療效。這提示黃芪藥材及飲片應(yīng)避免在較高溫度和濕度條件下長(zhǎng)期存放，并在黃芪藥材及飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立過程中，考慮將CYG、CYM、FMG、FMM4個(gè)異黃酮苷成分總量建立最低含量下限，并設(shè)立CY及FM2個(gè)苷元含量的上限值。同時(shí)，還應(yīng)進(jìn)一步對(duì)黃芪藥材和飲片的干燥、儲(chǔ)藏、加工等影響質(zhì)量的關(guān)鍵因素進(jìn)行考察，積累數(shù)據(jù)，為修訂完善黃芪藥材的標(biāo)準(zhǔn)奠定基礎(chǔ)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突