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      針對(duì)《GLDC基因復(fù)合雜合突變致非經(jīng)典型非酮性高甘氨酸血癥家系的臨床和遺傳學(xué)分析》一文讀者提出問題的反饋

      2021-06-16 02:08:50
      中國當(dāng)代兒科雜志 2021年6期
      關(guān)鍵詞:無義泳道原文中

      1 趙培偉老師提出的具體問題

      (1)原文中圖2為甘氨酸脫氫酶(glycine dehydrogenase,GLDC) 蛋白的Western blot檢測(cè)圖,圖中有兩個(gè)突變體,突變一為無義突變(表達(dá)提前終止),突變二為錯(cuò)義突變,在Western blot結(jié)果中不應(yīng)該是大小相同的條帶。

      (2) 原文中多處有“c.1296C>G(p.Ser419 STer)”寫法,其中STer是什么意思?是否正確?

      2 作者回答

      感謝讀者對(duì)我們文章的關(guān)注,并指出文章存在的不足之處。針對(duì)讀者提出的問題,我們已核實(shí)并做出如下回復(fù)。

      回答(1):經(jīng)讀者問題提醒,我們翻看了預(yù)實(shí)驗(yàn)的凝膠電泳圖(圖1),發(fā)現(xiàn)考馬斯亮藍(lán)染色后,突變一泳道在紅色箭頭處有一蛋白表達(dá)條帶,其分子量約為50~70 kDa,現(xiàn)我們推測(cè)該條帶應(yīng)為GLDC基因c.1256C>G(p.S419X)無義突變的蛋白表達(dá)條帶,但由于當(dāng)時(shí)本人對(duì)“無義突變導(dǎo)致蛋白翻譯提前終止,蛋白分子量減小”這一現(xiàn)象認(rèn)識(shí)不足,在Western blot實(shí)驗(yàn)中未對(duì)該條帶進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn),也未在文章中呈現(xiàn)。

      原文中呈現(xiàn)的Western blot圖(圖2),突變一泳道與pMCV-GLDC對(duì)照、突變二泳道蛋白條帶大小一致,且顏色深度相似,我們推測(cè)c.1256C>G(p.S419X)無義突變生成的截短蛋白對(duì)H293T細(xì)胞中的野生型GLDC蛋白可能存在負(fù)反饋調(diào)節(jié),使野生型GLDC蛋白表達(dá)量增多,因此產(chǎn)生了原文圖中的結(jié)果,原文也就按實(shí)際實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖進(jìn)行了呈現(xiàn),但其具體機(jī)制尚不明確,有待深入研究。

      圖1 預(yù)實(shí)驗(yàn)GLDC蛋白的檢測(cè)考馬斯亮藍(lán)染色后照片 突變一為c.1256(p.S419X),突變二為c3006C>G(p.C1002W),紅色箭頭所指為一蛋白表達(dá)條帶,其分子量約為50~70 kDa,推測(cè)該條帶應(yīng)為GLDC基因c.1256C>G(p.S419X)無義突變的蛋白表達(dá)條帶。

      圖2 GLDC蛋白的檢測(cè) 突變一為c.1256(p.S419X),突變二為c.3006C>G(p.C1002W)。突變一和突變二的GLDC蛋白表達(dá)高于空白對(duì)照和空載對(duì)照;與pMCV-GLDC對(duì)照相比,無明顯變化。

      回答(2):原文中多次出現(xiàn)的“c.1256C>G(p.Ser419STer)”中的“STer”為書寫錯(cuò)誤,應(yīng)更正為“c.1256C>G(p.Ser419Ter)”。

      3 趙培偉老師針對(duì)作者回復(fù)的反饋

      GLDC基因編碼體內(nèi)甘氨酸裂解酶系統(tǒng)(glycinelyase system,GCS)的P蛋白亞基,約70%的非酮性高甘氨酸血癥由該基因異常所致。野生型GLDC蛋白含有1 020個(gè)氨基酸(NP_000161),分子量大小約為113 kDa,文章中GLDC基因c.1256C>G變異屬于無義突變,導(dǎo)致編碼的GLDC蛋白提前終止(p.S419X),故產(chǎn)生截短蛋白,大小約45 kDa。因此在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,Western blot檢測(cè)GLDC蛋白表達(dá)水平時(shí)應(yīng)注意觀察野生型及突變體所在位置。一般構(gòu)建野生型及突變體表達(dá)質(zhì)粒時(shí)應(yīng)帶有Flag或Myc等標(biāo)簽,探討突變對(duì)蛋白表達(dá)水平的影響時(shí),利用標(biāo)簽抗體進(jìn)行檢測(cè)。

      作者提供了考馬斯亮藍(lán)染色的PAGE凝膠圖片,觀察到了截短的GLDC蛋白,并推測(cè)了野生型GLDC表達(dá)水平升高的原因,解釋尚且合理。

      關(guān)于突變的書寫規(guī)范,請(qǐng)參考人類基因組變異協(xié)會(huì) (Human Genome Variation Society,HGVS)的規(guī)則,該規(guī)則是目前學(xué)術(shù)界所公認(rèn)的突變命名規(guī)則。原文中無義突變可表示為p.Ser419Ter或p.Ser419*。

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