張國平，陳小龍，楊傳盛，康 寧

乳腺癌是全球女性最為常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率居我國女性惡性腫瘤的首位。盡管人們對乳腺癌防治的觀念和自我檢查意識有所提高，但其發(fā)病率的升高趨勢仍不見減緩，且部分患者常因就醫(yī)不及時錯過最佳治療時機，導(dǎo)致腫瘤分期進展及相關(guān)并發(fā)癥的出現(xiàn)，嚴重影響預(yù)后生存[1]。因此，臨床上急需尋找敏感性和特異性高的指標(biāo)對乳腺癌病情進展、預(yù)后生存進行評估?，F(xiàn)代分子生物學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，原癌基因激活、抑癌基因失活或突變、抗凋亡基因過度表達在乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用，與其相關(guān)的原癌基因增殖細胞核抗原Ki-67備受關(guān)注[2-3]。人類表皮生長因子受體-2(human epidermal growth factor receptor-2, HER-2)是一種糖基化多肽性分泌因子，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[4]。此外，研究表示細胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子CD147，可參與腫瘤浸潤過程中黏附、降解和移動[4]。本研究對乳腺癌組織HER-2、Ki-67及CD147的表達情況進行分析，旨在為臨床病情監(jiān)測、預(yù)后評估提供新思路，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年7月—2017年6月于我院進行乳腺癌根治術(shù)治療的112例作為研究對象。①納入標(biāo)準(zhǔn)：均滿足世界衛(wèi)生組織制定的乳腺浸潤性導(dǎo)管癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，無患側(cè)乳腺手術(shù)史，經(jīng)檢查無腫瘤遠處轉(zhuǎn)移；未進行化療、放療或性激素類藥物治療者；②排除標(biāo)準(zhǔn)：臨床資料缺失或不真實；合并其他惡性腫瘤者；合并心、肺、肝、腎等重要臟器功能不全者；合并結(jié)締組織疾病者；有惡性腫瘤病史者。本組符合納入與排除標(biāo)準(zhǔn)者101例，收集乳腺癌組織及癌旁的正常組織(距離癌組織5 cm以上)，分別作為乳腺癌組和癌旁組織組。

1.2方法

1.2.1主要試劑與儀器：鼠抗人Ki-67抗原單克隆抗體、兔抗人CDKN1A抗體購自美國Proteintech公司；羊抗兔熒光二抗購自美國ROCKLAND公司；單克隆抗體購自上?；蚩萍加邢薰荆幻庖呓M織化學(xué)檢測試劑盒、山羊抗小鼠二抗、DAB顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；光學(xué)顯微鏡(BX41型)購自日本OLYMPUS公司。

1.2.2免疫組織化學(xué)檢測：收集本組患者術(shù)后標(biāo)本，所有組織標(biāo)本均為常規(guī)石蠟包埋組織，制成厚4 μm的病理切片，行免疫組織化學(xué)染色，操作步驟嚴格按試劑盒說明書進行[6-7]。

1.2.3結(jié)果判定：免疫組織化學(xué)結(jié)果由兩位病理科主任醫(yī)師通過雙盲法閱片進行判定，每張切片在光學(xué)顯微鏡下隨機觀察5個高倍(×200)視野，每個視野計數(shù)200個腫瘤細胞，HER-2染色定位于細胞質(zhì)或細胞膜，Ki-67和CD147染色定位于細胞核，陽性表達均為棕黃色顆粒。依據(jù)切片中細胞染色強度和染色陽性細胞百分率判定染色結(jié)果[8-9]，按染色陽性細胞百分率評分：<25%為1分，25%～50%為2分，≥50%為3分；按染色強度評分：不著色為0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩種評分的乘積為每例的加權(quán)分數(shù)，加權(quán)分數(shù)是0為陰性，其余均為陽性。

1.3觀察指標(biāo) 比較乳腺癌組和癌旁組織組HER-2、Ki-67、CD147的表達差異，并分析三者與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。根據(jù)隨訪情況分析影響乳腺癌患者預(yù)后生存的危險因素。

1.4隨訪方法 本研究隨訪從患者術(shù)后開始，直至患者死亡或隨訪結(jié)束，為期3年，隨訪時間截止于2020年6月?；颊叩碾S訪時間為10～36(26.71±5.78)個月。隨訪方式以患者來院復(fù)查為主。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析。計數(shù)資料以率(%)表示，比較行χ2檢驗；采用多因素Logistic回歸分析影響乳腺癌患者預(yù)后生存的危險因素。α=0.05為檢驗水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1HER-2、Ki-67及CD147在乳腺癌組織中的表達 乳腺癌組織中，HER-2染色主要顯示于細胞膜或細胞質(zhì)，Ki-67和CD147染色主要顯示于細胞核，三者在乳腺癌中陽性表達均呈現(xiàn)棕黃色。見圖1。

圖1 CD147、HER-2及Ki-67在乳腺癌組織中免疫組織化學(xué)染色圖(DAB×200)

2.2乳腺癌組和癌旁組織組HER-2、Ki-67及CD147的表達差異 HER-2、Ki-67及CD147在乳腺癌組中的陽性表達率均高于癌旁組織組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

表1 乳腺癌組和癌旁組織組HER-2、Ki-67及CD147的表達差異[例(%)]

2.3HER-2、Ki-67及CD147與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 乳腺癌患者HER-2、Ki-67及CD147表達水平與組織分化類型、TNM分期、脈管侵襲和淋巴結(jié)侵襲具有相關(guān)性(P<0.05，P<0.01)，與年齡、腫瘤位置無相關(guān)性(P>0.05)。乳腺癌患者HER-2、CD147表達水平與腫瘤最大徑無相關(guān)性(P>0.05)，但Ki-67與腫瘤最大徑具有相關(guān)性(P<0.05)。見表2。

表2 乳腺癌患者HER-2、Ki-67及CD147與臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

2.4乳腺癌患者預(yù)后生存情況 截至隨訪結(jié)束，101例乳腺癌患者生存65例，死亡36例，病死率為35.64%。將生存患者納入生存組，死亡患者納入死亡組。

2.5生存組和死亡組HER-2、Ki-67及CD147的表達差異 死亡組HER-2、Ki-67及CD147陽性表達率高于生存組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 生存組和死亡組HER-2、Ki-67及CD147的表達差異[例(%)]

2.6影響乳腺癌患者預(yù)后生存的單因素和多因素分析 組織中低分化、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、脈管侵襲、淋巴結(jié)侵襲、HER-2、Ki-67及CD147表達陽性是影響乳腺癌患者預(yù)后生存的獨立危險因素(P<0.05，P<0.01)。見表4。

表4 影響乳腺癌患者預(yù)后生存的單因素和多因素分析

3 討論

乳腺癌作為嚴重危害婦女健康的主要疾病，其治療方法隨著外科技術(shù)、放療和化療藥物進展有了長足的進步，但部分患者治療效果仍不理想，導(dǎo)致預(yù)后較差[10]。雖然當(dāng)前尚不清楚乳腺癌的具體發(fā)生機制，但研究發(fā)現(xiàn)腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移和預(yù)后受到多方面因素的影響[11]。

HER-2屬于人類表皮生長因子受體家族成員，基因位于17號染色體q21區(qū)，是一種具有酪氨酸激酶活性的跨膜蛋白[12]。正常生理情況下HER-2單體處于非激活狀態(tài)，需要HER-2蛋白中的酪氨酸磷酸化后，發(fā)揮介導(dǎo)細胞內(nèi)的磷酸化、基因表達及DNA合成代謝等生理功能[13]。而病理狀態(tài)下，則可通過HER-2在細胞膜過度表達導(dǎo)致細胞增殖迅速形成腫瘤，參與腫瘤細胞的生長增殖過程。既往研究發(fā)現(xiàn)，有20%～30%的乳腺癌患者存在HER-2基因或蛋白過度表達的情況，該類患者的治療效果及預(yù)后遠差于未出現(xiàn)HER-2過度表達的患者[14]。本研究結(jié)果基本與上述結(jié)論相似，提示HER-2可作為預(yù)測乳腺癌預(yù)后的一個重要參考指標(biāo)。

Ki-67蛋白是由10號染色體長臂所屬基因轉(zhuǎn)錄、翻譯成為兩條多肽鏈組成的非組蛋白型核蛋白，正常生理情況下Ki-67主要表達于除G0和G1早期以外的所有細胞分裂階段，主要作用是反映細胞的增殖狀態(tài)[15]。隨著相關(guān)研究的深入，發(fā)現(xiàn)Ki-67的大量表達還與腫瘤的轉(zhuǎn)移情況、臨床治療效果及患者預(yù)后息息相關(guān)，因此有學(xué)者提出將其作為檢測腫瘤細胞增殖活性的可靠指標(biāo)[16-17]。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌細胞Ki-67的陽性表達率與組織分化類型、TNM分期、淋巴結(jié)侵襲和脈管侵襲等關(guān)系緊密，且經(jīng)多因素Logistic回歸分析顯示，Ki-67表達陽性是影響乳腺癌患者預(yù)后生存的獨立危險因素，提示臨床上可通過監(jiān)測乳腺癌患者Ki-67表達狀態(tài)進一步擴展診治手段，指導(dǎo)治療方案選擇和預(yù)后評價。

CD147為免疫球蛋白超家族的糖蛋白，是一種新發(fā)現(xiàn)的黏附分子。基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)能夠參與腫瘤新生血管的生成及腫瘤細胞的生長，有相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，CD147蛋白可通過刺激內(nèi)皮細胞或成纖維細胞誘導(dǎo)MMP-9蛋白的表達上調(diào)，進而對乳腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移起到促進作用[18]。另外，在多種惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中都發(fā)現(xiàn)CD147存在較高水平的表達。本研究結(jié)果顯示，CD147在乳腺癌組織中的陽性表達率遠高于癌旁正常組織，表明CD147蛋白在乳腺癌的發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用。另外，在組織中低分化、存在脈管和淋巴結(jié)侵襲及死亡乳腺癌患者中存在CD147高陽性表達現(xiàn)象，因此CD147可成為判斷乳腺癌患者腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移和預(yù)后的潛在指標(biāo)。

綜上所述，HER-2、Ki-67及CD147在乳腺癌組織中表達異常，與患者病情進展及預(yù)后生存密切相關(guān)，或可作為預(yù)測乳腺癌患者預(yù)后生存的分子標(biāo)志物和腫瘤治療的潛在靶點。