彭海帥,王畢妮,惠媛媛,張富新,劉玉芳,趙愛青,任 榮,賈 蓉
(陜西師范大學(xué)食品工程與營養(yǎng)科學(xué)學(xué)院,陜西西安 710119)
因此,STR 在食品中的殘留引起了各國高度重視。國際食品法典委員會(huì)(Codex Alimentarius Commission,CAC)規(guī)定在牛奶中最大殘留限量(Maximum Residue Limit,MRL)為200 μg/kg,在雞肉、豬肉中MRL 均是600 μg/kg[4]。2002年我國農(nóng)業(yè)部《動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量》規(guī)定,牛奶中MRL 為200 μg/kg,畜禽肌肉中為600 μg/kg[5]。在這些標(biāo)準(zhǔn)的要求下,STR 的檢測(cè)成為動(dòng)物性食品和飼料中的研究熱點(diǎn)。國內(nèi)外已經(jīng)報(bào)道的傳統(tǒng)的STR 檢測(cè)方法包括:親水相互作用液相色譜法( Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography,HILIC)[6?7]、酶聯(lián)免疫法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)[8?9]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)法(Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry,LC-MS/MS)[10?13]等。雖然這些方法靈敏度高、重現(xiàn)性好,但是樣品處理復(fù)雜、檢測(cè)成本較高、且需專業(yè)人員操作,因而極大地限制了它們?cè)赟TR 快速檢測(cè)方面的應(yīng)用。生物傳感器作為一種快速檢測(cè)技術(shù),由識(shí)別元件(抗原、抗體、酶、適配體、微生物、細(xì)胞、組織等)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)元件和信號(hào)放大元件三個(gè)部分[14]構(gòu)成。識(shí)別元件中的適配體由于具有優(yōu)良檢測(cè)性能而被廣泛用于生物傳感器的構(gòu)建中。隨著光學(xué)、電化學(xué)技術(shù)的發(fā)展,基于適配體的光學(xué)、電化學(xué)生物傳感器在食品檢測(cè)行業(yè)應(yīng)用廣泛[15?16]。本文綜述了近五年基于適配體的光學(xué)、電化學(xué)生物傳感器在STR 檢測(cè)中的研究進(jìn)展,以期為STR 生物傳感器的進(jìn)一步發(fā)展提供參考與借鑒。
適配體(Aptamers,Apt)作為生物傳感器識(shí)別元件之一,是通過指數(shù)富集的配基系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX)篩選出的單鏈寡核苷酸或肽(通常是DNA 或RNA),長(zhǎng)度一般為25~60 個(gè)堿基[17],分子質(zhì)量約6~40 kDa,解離常數(shù)通常在納摩爾至皮摩爾范圍內(nèi),以A-T(A-U)、G-C 堿基對(duì)形成發(fā)夾、假結(jié)或凸環(huán)等二級(jí)結(jié)構(gòu)[18]。具有與靶標(biāo)分子(例如小的有機(jī)分子、多肽、蛋白質(zhì)、離子等)特異性識(shí)別的能力,其原理與單克隆抗體類似:適配體和靶分子之間通過氫鍵、范德華力、堿基堆積等各種作用進(jìn)行形狀互補(bǔ)型識(shí)別[19],但與抗體相比適配體具有更高的特異性與親和力、易于通過化學(xué)合成和體外篩選獲得、可結(jié)合的靶標(biāo)物質(zhì)的范圍更寬、分子量小、具有良好的穩(wěn)定性和可重復(fù)性的優(yōu)勢(shì)[20?21]。
以上優(yōu)點(diǎn)使適配體廣泛應(yīng)用于構(gòu)建生物傳感器?;谶m配體的生物傳感器是利用適配體獨(dú)特的立體結(jié)構(gòu)與靶標(biāo)分子特異性結(jié)合,通過信號(hào)傳導(dǎo)元件將生物反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)楣狻㈦姷瓤勺R(shí)別的信號(hào),實(shí)現(xiàn)對(duì)靶標(biāo)分子檢測(cè)的生物傳感技術(shù)。
將適配體傳感器與光學(xué)檢測(cè)技術(shù)結(jié)合形成的光學(xué)傳感器具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、響應(yīng)快等優(yōu)點(diǎn)[22]。根據(jù)反應(yīng)機(jī)制不同,可為以下幾類:基于適配體的化學(xué)發(fā)光傳感器、基于適配體的熒光傳感器、基于適配體的比色傳感器等,在STR 快速檢測(cè)中的應(yīng)用如下(見表1)。
表1 鏈霉素光學(xué)適配體傳感器Table 1 Streptomycin optical aptamer sensor
化學(xué)發(fā)光(Chemiluminescence,CL)的檢測(cè)原理是:由于化學(xué)反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生大量能量,誘導(dǎo)電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)電子態(tài),同時(shí)能量以光輻射的形式釋放出來,產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象,在分析化學(xué)中具有背景噪聲小、安全可控等優(yōu)點(diǎn)?;诨瘜W(xué)發(fā)光原理設(shè)計(jì)的適配體傳感器具有裝置成本低廉、不需要外部光源、檢測(cè)線性范圍較寬等優(yōu)點(diǎn)[20,23?24]。Sun 等[25]基于適配體和G-四鏈體DNA 酶修飾的三維石墨烯復(fù)合材料,成功制備了CL 傳感器用于檢測(cè)STR。其中β-環(huán)糊精和離子液體功能化的氧化石墨烯氣凝膠(β-CD/IL@GOGA)作為骨架時(shí)具有較大的比表面積,適配體(Apt)和G-四鏈體DNA 酶分別修飾在骨架上,當(dāng)STR 存在時(shí),由于STR 和Apt 之間的特異性識(shí)別,使G-四鏈體DNA 酶從骨架上釋放出來,催化了魯米諾-H2O2的CL 反應(yīng),實(shí)現(xiàn)了STR 的間接檢測(cè)。該CL 傳感器線性范圍為1.4×10?12~2.8×10?9mol/L,檢出限為9.2×10?14mol/L。
基于適配體CL 傳感器有諸多優(yōu)點(diǎn)但CL 檢測(cè)強(qiáng)度容易受到檢測(cè)系統(tǒng)中共存基質(zhì)的干擾,強(qiáng)度也較弱,在選擇靈敏性方面有待提升[25?26]。
一些物質(zhì)經(jīng)過紫外光的照射后,原子被激發(fā)發(fā)生原子能級(jí)躍遷從而反射出各種可見光,使物質(zhì)呈現(xiàn)熒光現(xiàn)象[14]?;跓晒猬F(xiàn)象的適配體傳感器具有操作簡(jiǎn)單、選擇性好、可以實(shí)時(shí)檢測(cè)等獨(dú)特優(yōu)勢(shì)[27]。熒光傳感器(Fluorescent sensor)可以將分子識(shí)別信息轉(zhuǎn)換成熒光信號(hào),一般由熒光團(tuán)(Fluorophore)通過連接基(Spacer)與受體(Receptor)相連而成。其中熒光團(tuán)是一種信號(hào)傳遞物質(zhì),可將識(shí)別信息轉(zhuǎn)換成光學(xué)信號(hào)[28]。Taghdisi 等[29]設(shè)計(jì)了一種基于核酸外切酶III (ExoIII)、SYBR Gold 和適配體互補(bǔ)鏈的熒光傳感器,用于靈敏檢測(cè)STR。在沒有STR 的情況下,熒光強(qiáng)度較弱。加入STR 后,適配體與靶標(biāo)(STR)結(jié)合,導(dǎo)致互補(bǔ)鏈從適配體中釋放出來,加入SYBR Gold 后,熒光強(qiáng)度會(huì)增強(qiáng)。該傳感器對(duì)STR 具有很高的選擇性,檢出限低至54.5 nmol/L。Emrani 等[30]設(shè)計(jì)了基于金納米顆粒(AuNPs)和雙鏈DNA(dsDNA)熒光猝滅適配體傳感器,用于STR 快速檢測(cè)。在不存在STR 的情況下,適配體和互補(bǔ)dsDNA(已被FAM 標(biāo)記)的結(jié)合是穩(wěn)定的,此時(shí)有強(qiáng)烈的熒光。當(dāng)存在STR 時(shí),適配體與靶標(biāo)(STR)結(jié)合,使互補(bǔ)dsDNA 被釋放出來并且吸附在AuNPs 的表面上,此時(shí)互補(bǔ)dsDNA 上的熒光會(huì)被AuNPs 淬滅。該方法的檢出限為47.6 nmol/L。
熒光傳感器可以快速、簡(jiǎn)便地檢測(cè)目標(biāo)物,但有些熒光團(tuán)容易發(fā)生光漂白,影響發(fā)射強(qiáng)度,進(jìn)而難以獲得較低的檢出限。另外有些熒光團(tuán)存在毒性對(duì)細(xì)胞有害[31?33]。因此,仍需進(jìn)一步提升熒光傳感器的靈敏度和安全性。
周大偉和周小偉兄弟倆,周大偉在濟(jì)南工作,每月寄給生活在臨沂老家的父母1500元生活費(fèi);周小偉在農(nóng)村老家,以種地為生,掙錢少,也不需要稅前扣除,每月給父母500元生活費(fèi)。周大偉可以每月稅前扣除1500元甚至2000元嗎?
比色法(Colorimetry)是通過比較或測(cè)量溶液對(duì)光選擇性吸收而產(chǎn)生的可視化顏色來確定待測(cè)組分含量的方法,與其他檢測(cè)方法(化學(xué)發(fā)光、熒光、電化學(xué)等)相比,僅需要用裸眼觀察,不需要復(fù)雜的儀器,非常適合即時(shí)檢測(cè)(Point-of-care testing,POCT)[34],POCT 是一種在采樣現(xiàn)場(chǎng)即刻進(jìn)行分析,樣本無需復(fù)雜處理的一類快速檢測(cè)方法。近年來,智能手機(jī)的普及和生物傳感器技術(shù)的進(jìn)步促進(jìn)了POCT 的發(fā)展[35]。目前POCT 比色傳感器已廣泛應(yīng)用于食品安全、環(huán)境監(jiān)測(cè)、醫(yī)學(xué)研究等領(lǐng)域。
Luan 等[36]開發(fā)了POCT 適配體比色傳感器,以多孔SiO2微珠-酶聯(lián)聚合物(Power VisionTM,PV)作為比色探針,核酸外切酶輔助的靶標(biāo)循環(huán)檢測(cè)STR。在STR 和核酸外切酶I(Exo I)存在下,比色探針上的Apt 將捕獲STR 形成復(fù)合物(STR/Apt-Au-PV),Exo I 消化STR/Apt-Au-PV 上的Apt,釋放的STR 可以參與新的循環(huán)。此外,在PV 上標(biāo)記大量辣根過氧化物酶(HRP)可以進(jìn)一步高效催化H2O2-TMB(3,3,5,5 四甲基聯(lián)苯胺)系統(tǒng)進(jìn)行顯色,然后通過紫外分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)。該方法的檢出限是1 pg/mL,檢測(cè)范圍是0.003~20 ng/mL。Lin 等[37]通過智能手機(jī)的數(shù)字圖像比色法建立了POCT 法快速檢測(cè)STR。過量的適配體與互補(bǔ)DNA 雜交形成dsDNA,SYBR Green I 與dsDNA 結(jié)合后發(fā)出明顯的綠色熒光。當(dāng)STR 與適配體結(jié)合后,熒光強(qiáng)度會(huì)降低。在智能手機(jī)上安裝Touch Color 應(yīng)用程序,通過使用數(shù)字圖像比色法讀取圖像的RGB 值,其中G 值和STR 濃度之間存在線性關(guān)系。該方法的檢出限為94 nmol/L,線性范圍是0.1~100 μmol/L。
基于適配體的POCT 比色傳感技術(shù)有效地減小了檢測(cè)設(shè)備的體積、降低了檢測(cè)成本、縮短了檢測(cè)時(shí)間[38],但是目前基于智能手機(jī)POCT 生物傳感器大多數(shù)仍處于概念階段,要實(shí)現(xiàn)商業(yè)化還有很長(zhǎng)的路要走[35]。
基于適配體的電化學(xué)傳感器通過生物識(shí)別元件(適配體)與目標(biāo)物特異性結(jié)合,引起電極表面電化學(xué)信號(hào)變化,通過檢測(cè)信號(hào)變化測(cè)定目標(biāo)物含量[39?40]。該方法在STR 檢測(cè)中的應(yīng)用如下(見表2)。
表2 鏈霉素電化學(xué)適配體傳感器Table 2 Streptomycin electrochemical aptamer sensor
貴金屬納米顆粒[41]、碳基納米材料[42]、磁性納米粒子[43]和量子點(diǎn)[44]、光敏材料等,可以增加傳感器的電化學(xué)響應(yīng),實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大策略。其中光敏材料會(huì)引起光電化學(xué)(Photoelectrochemistry,PEC)過程:光敏材料吸收光子后,經(jīng)過電荷分離、電荷轉(zhuǎn)移等過程,在傳感界面形成電子-空穴對(duì),產(chǎn)生了光子到電的轉(zhuǎn)換,從而引起光電信號(hào)響應(yīng)[45?46]。將PEC 過程與適配體傳感器結(jié)合形成的PEC 適配體傳感器已廣泛應(yīng)用于STR 快速檢測(cè)。
貴金屬納米材料由于具有極佳的比表面積和活性催化位點(diǎn),促進(jìn)待測(cè)分子與電極之間的電子轉(zhuǎn)移,從而有效放大電化學(xué)傳感器的分析信號(hào)[41]。Ghanbari等[47]采用AuNPs 和硫醇石墨烯量子點(diǎn)(Thiol Graphene Quantum Dots,GQD-SH)作為檢測(cè)STR 的納米材料,構(gòu)建了電化學(xué)適配體傳感器。構(gòu)建過程首先將GQD-SH 固定在玻璃碳電極(GCE)的表面上,其次將AuNPs 通過Au-S 鍵固定在GQDs 的SH 基團(tuán)上,最后將適配體共價(jià)吸附在AuNPs 表面上。當(dāng)STR 存在時(shí),STR 會(huì)與適配體結(jié)合形成復(fù)合物,通過檢測(cè)電化學(xué)信號(hào)測(cè)定STR 的含量。該方法的檢測(cè)范圍是0.1~700 pg/mL,檢出限為0.033 pg/mL。Li 等[48]用Pt-Sn 納米顆粒裝飾TiO2納米棒表面,得到具有強(qiáng)電催化性能的金屬復(fù)合材料(Pt-Sn@TiO2),然后根據(jù)Pt-Sn@TiO2復(fù)合材料和核酸外切酶輔助的靶標(biāo)循環(huán)雙信號(hào)放大策略開發(fā)了一種電化學(xué)適配體傳感器,用于STR 的檢測(cè)。Pt 和Sn 之間的協(xié)同作用,可以增強(qiáng)氧化還原電流,實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大策略。RecJf核酸外切酶通過選擇性切割STR-Apt 復(fù)合物,釋放出的STR 可與電極上的Apt 再次結(jié)合,形成靶標(biāo)循環(huán)信號(hào)放大策略。該方法的檢測(cè)范圍是0.05~1500 nmol/L,檢出限為(0.020±0.0045)nmol/L。Roushani 等[49]將介孔氧化硅薄膜(Mesoporous Silica Films,MSFs)涂在金電極表面,用銀納米粒子(AgNPs)修飾MSFs,構(gòu)建電化學(xué)適配體傳感器檢測(cè)STR。在STR 存在下,STR 會(huì)結(jié)合在適配體上并阻止[Fe(CN)6]3-/4-氧化還原探針在中孔膜的納米通道擴(kuò)散,從而降低電化學(xué)信號(hào)。在最優(yōu)條件下該傳感器的檢測(cè)范圍是1 fg/mL~6.2 ng/mL,檢出限為0.33 fg/mL。
以金(Au)、鉑(Pt)、銀(Ag)為代表的貴金屬納米材料與其他材料結(jié)合產(chǎn)生協(xié)同作用,可以促進(jìn)傳感器電子轉(zhuǎn)移,實(shí)現(xiàn)STR 靈敏檢測(cè),具有極好的生物傳感前景。
碳基納米材料中的有序介孔碳(Ordered Mesoporous Carbon,OMC)具有高導(dǎo)電性、高穩(wěn)定性、較大的比表面積等優(yōu)點(diǎn),為構(gòu)建電化學(xué)傳感器提供理想的納米平臺(tái)[50]。Li 等[51]基于碳納米纖維(Carbon nanofibers,CNFs)和有序介孔碳-金納米粒子(OMCAuNPs)構(gòu)建的電化學(xué)適配體傳感器,用于檢測(cè)卡那霉素(Kanamycin,KAN)和STR。在OMC 中引入AuNPs 可以提升電子轉(zhuǎn)移性能、改善納米材料的生物相容性。在沒有KAN 和STR 的情況下,適配體與其互補(bǔ)鏈結(jié)合。加入KAN 和STR 后,適配體分別與各自的靶標(biāo)(KAN、STR)結(jié)合,導(dǎo)致互補(bǔ)鏈被釋放出來,通過電流峰的變化測(cè)定KAN、STR 含量。在最佳條件下,該傳感器對(duì)KAN 和STR 檢出限分別為87.3 和45.0 pmol/L,檢測(cè)范圍均為0.1~1000 nmol/L。石墨化的多壁碳納米管(MWCNTGr)具有較高的電荷轉(zhuǎn)移性能,同時(shí)還具有網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),可以固定更多的適配體[52]。Li 等[53]基于MWCNTGr和CNFs-AuNPs納米復(fù)合材料,構(gòu)建電化學(xué)適配體傳感器同時(shí)檢測(cè)KAN 和STR。以金屬離子(Cd2+和Pb2+)作為信號(hào)示蹤劑標(biāo)記KAP(KAN適配體)和STP(STR 適配體)。當(dāng)KAN 和STR 存在時(shí),KAP 和STP 從它們的互補(bǔ)鏈中釋放出來,Cd2+和Pb2+會(huì)產(chǎn)生不同的微分脈沖伏安(Differential Pulse Voltammetry,DPV)峰,在最佳條件下,該方法對(duì)KAN 和STR 的檢出限分別是74.50 pmol/L 和36.45 pmol/L,檢測(cè)范圍均是0.1~100 nmol/L。
在電極表面化學(xué)修飾不同的材料,構(gòu)建的電化學(xué)傳感器可以實(shí)現(xiàn)不同待測(cè)物質(zhì)的同時(shí)檢測(cè),用碳基納米材料修飾的電極既擁有碳納米材料的優(yōu)良性質(zhì),同時(shí)又能提高電極本身的電化學(xué)信號(hào),極大地提高了傳感器的準(zhǔn)確性和靈敏度。
磁性納米顆粒(例如Fe3O4)電化學(xué)傳感器中應(yīng)用廣泛[54]。Yin 等[55]以多孔碳納米棒(Porous Carbon Nanorods,PCNR)和石墨烯-Fe3O4-AuNPs 納米復(fù)合材料作為基質(zhì),構(gòu)建電化學(xué)適配體傳感器用于STR的靈敏檢測(cè)。在石墨烯(Graphene,GR)和Fe3O4納米粒子中引入AuNPs 有利于提升納米材料與適配體的結(jié)合。當(dāng)適配體與STR 結(jié)合后,會(huì)使電流發(fā)生變化,在最佳條件下,該方法的檢測(cè)范圍是0.05~200 ng/mL,檢出限是0.028 ng/mL。Yin 等[56]將金納米粒子功能化的磁性多壁碳納米管(Au@MWCNTs-Fe3O4)復(fù)合材料和納米孔PtTi(NP-PtTi)合金依次滴到玻璃碳電極(GCE)表面上來制備適配體傳感器。Au@MWCNTs-Fe3O4復(fù)合材料作為生物分子固定基質(zhì),有效連接適配體;NP-PtTi 合金明顯增強(qiáng)電化學(xué)信號(hào),提高檢測(cè)靈敏度。在最佳條件下,該傳感器檢測(cè)范圍是0.05~100 ng/mL,檢出限是7.8 pg/mL。
Fe3O4作為一種對(duì)環(huán)境友好的磁性納米顆粒,由于可以在Fe2+和Fe3+之間發(fā)生電子轉(zhuǎn)移而表現(xiàn)出良好的導(dǎo)電性能,通常與碳基納米材料和金屬納米材料結(jié)合使用,在構(gòu)建電化學(xué)適配體傳感器中具有廣闊的應(yīng)用前景。
PEC 生物傳感器將光電轉(zhuǎn)換技術(shù)與生物傳感技術(shù)相結(jié)合,既延續(xù)了電化學(xué)生物傳感器的優(yōu)點(diǎn),如穩(wěn)定性好、靈敏度高等,同時(shí)又具有光學(xué)傳感器的優(yōu)勢(shì)和潛力,如操作便捷,響應(yīng)速度快等。目前PEC 生物傳感器中常用的光敏材料有金屬氧化物(TiO2[57?58]、WO3[59]、BiVO4[60])、過渡金屬化合物(CdTe[61]、CdS[62])等。Luo 等[63]將TiO2/BiOI/BiOBr 作為可見光光敏材料,適配體作為生物識(shí)別元件,開發(fā)了一種新型的鏈霉素PEC 適配體傳感器。適量的TiO2與BiOI/BiOBr 組合可增強(qiáng)光電流響應(yīng),當(dāng)STR 與適配體特異性結(jié)合后會(huì)使光電流響應(yīng)發(fā)生變化。在最佳條件下,該方法檢測(cè)范圍是0.05~150 nmol/L,檢出限低至0.04 nmol/L。Okoth 等[60]將鉬(Mo)摻雜BiVO4的復(fù)合物(Mo-BiVO4)和石墨烯納米復(fù)合材料作為光敏材料構(gòu)建可見光驅(qū)動(dòng)的鏈霉素PEC 適配體傳感器,當(dāng)不存在STR 時(shí),由于適配體具有位阻,PEC 適配體傳感器顯示出較弱的光響應(yīng)。當(dāng)存在STR 時(shí),STR 與適配體特異性結(jié)合,由于光生空穴對(duì)STR 的氧化作用使傳感器的光電流響應(yīng)增強(qiáng)。在最優(yōu)條件下,該P(yáng)EC 適配體傳感器的檢測(cè)線性范圍是0.1~100 nmol/L,檢出限為0.0481 nmol/L。Xu 等[64]將CdTe量子點(diǎn)(Quantum Dots,QDs)和單壁碳納米角(SWCNHs)合成一種新型納米復(fù)合材料(CdTe-SWCNHs)并將其作為光敏材料,制備了鏈霉素PEC適配體傳感器。其中SWCNHs 可以抑制電子-空穴對(duì)的重組,在加快電子轉(zhuǎn)移的同時(shí)提高光電流強(qiáng)度[64?65]。當(dāng)適配體與CdTe-SWCNHs 結(jié)合后,PEC信號(hào)明顯受到抑制。當(dāng)STR 與適配體結(jié)合后會(huì)使適配體從修飾的電極表面脫落,PEC 信號(hào)恢復(fù)。在最佳條件下,檢測(cè)線性范圍為0.1~50 nmol/L,檢出限為0.033 nmol/L。Shen 等[66]提出了一種基于光電化學(xué)“信號(hào)接通”和電化學(xué)“信號(hào)斷開”雙重檢測(cè)模型。CdTe QDs 和亞甲基藍(lán)(Methylene Blue,MB)標(biāo)記的適配體(MB-Apt)分別用于生成PEC 信號(hào)和電化學(xué)(Electrochemistry,EC)信號(hào)。目標(biāo)物STR 會(huì)誘導(dǎo)MB-Apt 的構(gòu)象發(fā)生變化,將MB 推離電極,EC信號(hào)降低;于此同時(shí)空間位阻減少有助于CdTe QDs 還原PEC 信號(hào),使PEC 信號(hào)升高。在最佳條件下該方法的檢測(cè)線性范圍是0.03~100 μmol/L,檢出限為10 nmol/L。
p-n 異質(zhì)結(jié)構(gòu)和Z-scheme 異質(zhì)結(jié)構(gòu)是由兩種半導(dǎo)體組成的高效光催化劑[67],目前已廣泛應(yīng)用于PEC 傳感器中。Xu 等[68]基于LaFeO3@g-C3N4p-n異質(zhì)結(jié)構(gòu),成功開發(fā)了一種PEC 生物傳感器用于STR 的靈敏檢測(cè)。其中LaFeO3@g-C3N4p-n 異質(zhì)結(jié)構(gòu)具有核-殼結(jié)構(gòu),可以明顯提高可見光響應(yīng)和電荷分離效率。當(dāng)適配體固定在LaFeO3@g-C3N4上后,光電流強(qiáng)度降低。當(dāng)適配體與STR 結(jié)合后,光電流信號(hào)進(jìn)一步降低。在最優(yōu)條件下的檢測(cè)范圍是0.01~10000 nmol/L,檢出限為0.0033 nmol/L。Liu等[59]用CdTe QDs 與WO3納米片構(gòu)建新型的Zscheme 異質(zhì)結(jié)構(gòu),用于STR 的快速檢測(cè)。Z-scheme異質(zhì)結(jié)構(gòu)通過模擬綠色植物的光合作用,可實(shí)現(xiàn)接近100%的電荷分離量子效率[69?70],應(yīng)用在PEC 傳感器中可以提高光電流響應(yīng)。當(dāng)適配體與STR 結(jié)合后,由于空間位阻增大導(dǎo)致光電流降低。該方法的檢測(cè)線性范圍是1.5~728.5 μg/kg,檢出限為0.5 μg/kg。
以上四種電化學(xué)適配體傳感器雖然具有樣品處理簡(jiǎn)單、易于小型化、具有良好的重現(xiàn)性、選擇性和檢測(cè)靈敏度等優(yōu)點(diǎn),但目前還只是建立在實(shí)驗(yàn)室階段。
近年來隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步,生物傳感器技術(shù)也得到飛速發(fā)展。與其他識(shí)別元件相比適配體具有更高的穩(wěn)定性、更易合成與修飾、成本更低等優(yōu)點(diǎn)而廣泛應(yīng)用于生物傳感器中。本文綜述了近五年基于適配體的光學(xué)、電化學(xué)生物傳感器傳感器在STR 快速檢測(cè)中的應(yīng)用,其中光學(xué)傳感器(以化學(xué)發(fā)光、熒光、比色為例)可以實(shí)現(xiàn)可視化即時(shí)檢測(cè),但是在安全性(某些熒光團(tuán)有毒)、選擇性(易受檢測(cè)體系中其他物質(zhì)干擾)等方面有待改善;電化學(xué)傳感器具有易于小型化、樣品無需復(fù)雜處理、靈敏度較高等優(yōu)點(diǎn),但要實(shí)現(xiàn)工業(yè)化應(yīng)用仍有較長(zhǎng)的路要走。
綜上所述,不同的生物傳感器各有利弊,需要根據(jù)食品樣品特點(diǎn)和應(yīng)用需求選擇合適的檢測(cè)方法。為實(shí)現(xiàn)STR 生物傳感器朝著簡(jiǎn)單、快速、成本低、靈敏度高、現(xiàn)場(chǎng)即時(shí)檢測(cè)的方向發(fā)展,在今后的研究中:隨著納米技術(shù)的不斷發(fā)展,新型功能性納米材料層出不窮,該材料具有較強(qiáng)的吸附能力、良好的生物相容性,可以加快電子傳遞、放大電流信號(hào)等優(yōu)點(diǎn)。因此,擴(kuò)大功能性納米材料的選用范圍,有望為生物傳感器的研究和應(yīng)用提供新途徑;將生物傳感器與其它技術(shù)(光學(xué)、電化學(xué)等)的聯(lián)用建立一個(gè)較為完整的多組分快速檢測(cè)平臺(tái),滿足食品中多種抗生素的快速檢測(cè)。該平臺(tái)對(duì)提高檢測(cè)效率、降低檢測(cè)成本有重要的實(shí)際意義。