于現(xiàn)花 劉軍玲 金傳山 張亞中 栗進(jìn)才

摘 要 目的：建立同時(shí)測(cè)定西洋參破壁飲片中8種人參皂苷類成分含量的方法。方法：采用高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器法（HPLC-DAD）測(cè)定西洋參破壁飲片中人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Ro、Rb2、Rb3、Rd的含量。色譜柱為Agilent5 TC-C18柱;流動(dòng)相為乙腈-0.2%磷酸水溶液（梯度洗脫）;柱溫為30 ℃;流速為1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm;進(jìn)樣量為10 μL。以人參皂苷Re和人參皂苷Rb2為參照物，采用雙標(biāo)線性校正法預(yù)測(cè)其余6種成分的保留時(shí)間以對(duì)其進(jìn)行定性，并比較該方法與相對(duì)保留時(shí)間法的差異;以人參皂苷Re為參照物，采用相對(duì)校正因子法對(duì)上述成分進(jìn)行定量，并與外標(biāo)法定量結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果：西洋參破壁飲片中人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Ro、Rb2、Rb3、Rd的含量分別為10.59～12.78、2.160～2.768、27.492～38.880、3.154～4.018、3.368～4.080、0.343～0.755、0.961～1.415、5.857～6.923 mg/g。采用雙標(biāo)線性校正法預(yù)測(cè)成分保留時(shí)間的準(zhǔn)確性更高，且預(yù)測(cè)保留時(shí)間的絕對(duì)偏差均低于相對(duì)保留時(shí)間法;采用相對(duì)校正因子法和外標(biāo)法的定量結(jié)果差異不大，相對(duì)誤差（RE）均小于3%。結(jié)論：所建立的雙標(biāo)多測(cè)法可同時(shí)對(duì)西洋參破壁飲片中8種人參皂苷類成分進(jìn)行準(zhǔn)確定性和定量。

關(guān)鍵詞 西洋參破壁飲片;人參皂苷;雙標(biāo)多測(cè)法;雙標(biāo)線性校正法;相對(duì)校正因子法;高效液相色譜

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To establish the method for simultaneous determination of 8 kinds of ginsenosides in Panax quinquefolium broken pieces. METHODS： HPLC-DAD method was used to determine the contents of ginsenoside Rg1， Re， Rb1， Rc， Ro， Rb2， Rb3， Rd in P. quinquefolium broken pieces. The determination was performed on Agilent5 TC-C18 column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.2% phosphoric acid water solution （gradient elution） at the flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was set at 30 ℃. The detection wavelength was set at 203 nm， and sample size was 10 μL. Ginsenoside Re and ginsenoside Rb2 were used as control， liner calibration with two-reference substances correction was used to predict the retention time of other 6 components， and was compared with the relative retention time method. Using ginsenoside Re as control， above components were quantified by the relative correction factor method， and the results were compared with the external standard method. RESULTS： The contents of ginsenoside Rg1， Re， Rb1， Rc， Ro， Rb2， Rb3， Rd were 10.59-12.78， 2.160-2.768， 27.492-38.880， 3.154-4.018， 3.368-4.080， 0.343-0.755， 0.961-1.415， 5.857-6.923 mg/g. The accuracy of two-reference substances linear correction method to predict the retention time of components was higher， and the absolute deviation of the predicted retention time was lower than that of the relative retention time method. There was no significant difference between the relative correction factor method and the external standard method， and relative error was <3%. CONCLUSIONS： Established two-reference substances for determination of multiple components can be used for qualitative and quantitative analysis of 8 kinds of ginsensides in P. quinquefolium broken pieces simultaneously and accurately.

KEYWORDS? ?Panax quinquefolium broken pieces; Ginsenoside; Two-reference substances for determination of multiple components; Two-reference substances linear correction method; Relative correction factor method; HPLC

西洋參為五加科植物西洋參Panax quinquefolium L.的干燥根，原生長(zhǎng)于北美洲的東部，我國(guó)于17世紀(jì)開始引進(jìn)種植，已有300多年的應(yīng)用歷史[1-3]。傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為，西洋參性涼而補(bǔ)，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、清熱生津的功效，主要用于陰虛燥咳、勞嗽咳血等[1]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，西洋參具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、改善心血管系統(tǒng)疾病等作用[4-5]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，西洋參中含有皂苷類、氨基酸類、糖類、黃酮類和無機(jī)元素類等活性成分，其中皂苷類是其最主要的活性成分[6]。

西洋參較為名貴，常將其制成破壁飲片，以最大限度地利用其藥效成分，且對(duì)節(jié)約藥材資源具有重要意義[7]。目前，多以2020年版《中國(guó)藥典》（一部）中規(guī)定的人參皂苷Rg1、Re、Rb1含量作為西洋參破壁飲片的質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)[1]，但僅測(cè)定這3種成分，并不能全面反映西洋參的內(nèi)在質(zhì)量。

對(duì)于中藥的多成分含量測(cè)定，相關(guān)研究者提出采用替代對(duì)照品法或一測(cè)多評(píng)法[8-14]，但這些方法均是以一個(gè)成分作為內(nèi)參，對(duì)多個(gè)目標(biāo)成分以相對(duì)校正因子法進(jìn)行定量、以相對(duì)保留時(shí)間法進(jìn)行定性，雖節(jié)約了對(duì)照品，但定性和定量的誤差稍大[14]。后續(xù)孫磊等[15]提出了“雙標(biāo)多測(cè)法”，即以2個(gè)對(duì)照品采用雙標(biāo)線性校正法對(duì)其他色譜峰進(jìn)行定性，并結(jié)合相對(duì)校正因子法對(duì)其他成分進(jìn)行定量;且在相同分析條件下，雙標(biāo)線性校正法提高了色譜峰定性的準(zhǔn)確度和色譜柱的適用性，實(shí)現(xiàn)了目標(biāo)成分在不同品牌、型號(hào)的色譜柱和色譜儀間保留時(shí)間模型的遷移均存在線性關(guān)系。因此，在實(shí)際應(yīng)用中，可利用這種線性關(guān)系提高保留時(shí)間的重現(xiàn)性[15-16]?；诖?，本研究建立了測(cè)定西洋參破壁飲片中人參皂苷 Rg1、Re、Rb1、Rc、Ro、Rb2、Rb3、Rd 含量的雙標(biāo)多測(cè)法，以期為該飲片多指標(biāo)成分綜合質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)提供思路。

1 材料

1.1 主要儀器

UItiMate 3000型高效液相色譜（HPLC）儀及所配備的二極管陣列檢測(cè)器（DAD）檢測(cè)器購(gòu)自美國(guó)Dionex公司; LC-20AT型HPLC儀購(gòu)自日本Shimadzu公司;1260 型HPLC儀及所配備的VWD檢測(cè)器購(gòu)自美國(guó)Agilent公司;XP26型百萬分之一電子分析天平購(gòu)自瑞士Mettler Toledo公司;185型超純水儀購(gòu)自美國(guó)Millipore 公司。

1.2 主要藥品與試劑

人參皂苷Rg1（批號(hào)110703-201128，純度≥93.4%）、人參皂苷Re（批號(hào)110754-201626，純度≥92.7%）、人參皂苷Rb1（批號(hào)110704-201122，純度≥92.9%）、人參皂苷Rc（批號(hào)110021-14-0，純度≥98%）、人參皂苷Ro（批號(hào)111903-201102，純度≥98%）、人參皂苷Rb2（批號(hào)111715-200501，純度≥98%）、人參皂苷Rb3（批號(hào)111686-200501，純度≥98%）、人參皂苷Rd（批號(hào)111818-201001，純度≥94.4%）均為對(duì)照品，均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;乙腈、甲醇為色譜純，磷酸、正丁醇為分析純，水為超純水。

10批西洋參破壁飲片樣品（編號(hào)S1～S10）均購(gòu)自安徽宏信藥業(yè)發(fā)展有限公司，經(jīng)安徽省食品藥品檢驗(yàn)研究院張亞中主任中藥師鑒定為五加科植物西洋參P.quinquefolium L. 的干燥根。

1.3 其他材料

本研究共用到14根色譜柱（編號(hào)col 1～col 14） ，其中col1為ZORBAX Eclipse Plus C18，col2為Agilent5 TC-C18，col 3為DIKMA Diamonsil C18，col4為DIKMA Inspire C18，col 5為Phenomenex Kinetex C18 100A，col 6為JADE-PAK ODS-AQ，col 7為Innoval C18，col 8為TechMate C18 ST，col 9為TechMate CR（1 ∶ 5）-ST，col 10為Venusil ASB C18，col 11為Waters XBridge C18，col 12為ZORBAX Eclipse XDB C18，col 13為Shim-pack VP-ODS，col 14為Phenomenex Luna C18，所有色譜柱的規(guī)格均相同（250 mm×4.6 mm，5 μm）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

選用UItiMate 3000型高效液相色譜儀;定性研究的色譜柱選擇col 1～col 13;定量研究色譜柱選擇col 2;流動(dòng)相為乙腈（A）-0.2%磷酸溶液（B），梯度洗脫（0～15 min，81%B;15～20 min，81%B→79%B;20～35 min，79%B→75%B;35～55 min，75%B→68%B;55～70 min，68%B→57%B;70～73 min，57%B→47%B;73～75 min，47%B→81%B）;流速為1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm;柱溫為30 ℃;進(jìn)樣量為10 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對(duì)照品溶液的制備 分別取人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Ro、Rb2、Rb3、Rd對(duì)照品適量，精密稱定，置于同一5 mL量瓶中，加甲醇溶解，配制成質(zhì)量濃度分別為 0.25、1.378、3.86、0.41、0.388、0.076、0.166、0.65 mg/mL 的混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 參考文獻(xiàn)[1]方法，取西洋參破壁飲片粉末（過三號(hào)篩，下同）約1 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入水飽和的正丁醇50 mL，稱定質(zhì)量;水浴加熱回流提取1.5 h，放冷，再稱定質(zhì)量，以水飽的正丁醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過;精密量取續(xù)濾液25 mL，置于蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加50%甲醇定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性試驗(yàn) 取混合對(duì)照品溶液、供試品溶液（編號(hào)S2）和陰性對(duì)照溶液（即50%甲醇溶液）適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件（色譜柱為col 2）進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，各待測(cè)成分峰分離度均大于1.5，見圖1。

2.3.2 線性關(guān)系考察 精密量取“2.2.1”項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液2、1、0.5、0.35、0.25 mL， 分別置于2 mL量瓶中，以甲醇定容， 搖勻，即得系列濃度的混合對(duì)照品溶液;按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以目標(biāo)成分質(zhì)量濃度（x，mg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表1。

2.3.3 精密度考察 取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Ro、Rb2、Rb3、Rd 峰面積的RSD分別為1.35%、1.57%、0.91%、1.08%、0.91%、1.57%、1.21%、0.86%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性考察 取同一批西洋參破壁飲片粉末（編號(hào)S2）6份，每份約1 g，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，然后按“2.1”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并代入回歸方程中計(jì)算8種成分的含量。結(jié)果，人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Ro、Rb2、Rb3、Rd 的平均含量分別為2.467、12.338、36.054、3.301、2.692、0.306、0.818、6.420 mg/g，RSD分別為0.40%、0.35%、0.14%、0.14%、1.80%、2.92%、1.39%、0.16%（n=6），表明方法重復(fù)性較好。

2.3.5 穩(wěn)定性考察 取同一份供試品溶液（編號(hào)S2），分別于室溫放置0、2、8、10、12、24 h時(shí)，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Ro、Rb2、Rb3、Rd 峰面積的RSD分別為0.36%、0.33%、0.14%、0.10%、1.74%、2.86%、2.39%、0.14%（n=6），表明供試品溶液于室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.6 加樣回收率考察 取已知成分含量的西洋參破壁飲片粉末（編號(hào)S2）約0.5 g，精密稱量，共6份，精密加入人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Ro、Rb2、Rb3、Rd的對(duì)照品各適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表2。

2.4 基于雙標(biāo)線性校正法的定性研究

2.4.1 不同色譜柱上保留時(shí)間的線性關(guān)系考察 基于“2.1”項(xiàng)下色譜條件，采用13根不同的色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)，并以同一成分在13根色譜柱上的實(shí)測(cè)保留時(shí)間的平均值作為預(yù)測(cè)保留時(shí)間（SRT）[15-16]。結(jié)果，人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Ro、Rb2、Rb3、Rd的SRT分別為31.316、31.972、60.348、61.997、63.194、63.590、64.117、66.825 min?；陔p標(biāo)線性校正法的平衡分配機(jī)理，組分的保留時(shí)間在不同色譜儀及色譜柱上的保留時(shí)間具有線性關(guān)系[16]，以8種人參皂苷類成分的SRT為橫坐標(biāo)（x）、實(shí)測(cè)保留時(shí)間為縱坐標(biāo)（y），采用OriginPro 9.0軟件進(jìn)行擬合，即得8種人參皂苷類成分在不同色譜柱上保留時(shí)間的線性方程及相關(guān)系數(shù)，見表3。

2.4.2 雙標(biāo)化合物的確定 將色譜圖（cdf格式文件）導(dǎo)入 DRS Origin 軟件中，點(diǎn)擊“增加參照”，設(shè)定雙標(biāo)成分，再于該軟件的樣品測(cè)試頁(yè)面點(diǎn)擊“關(guān)聯(lián)對(duì)照品”，然后于方法開發(fā)頁(yè)面點(diǎn)擊“方法優(yōu)化”，即得10種優(yōu)化方案（見表4，其中CRS為化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）。當(dāng)10種優(yōu)化方案的色譜峰預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率和色譜柱符合率均達(dá)到100%，則說明試驗(yàn)所選的13根色譜柱適用性較好[17]。按照雙標(biāo)化合物選擇保留時(shí)間回歸偏差相對(duì)較小和所選化合物保留時(shí)間段盡可能分布在色譜峰的兩端的原則[15，18]，本研究選定人參皂苷Re和人參皂苷Rb2作為雙標(biāo)化合物來驗(yàn)證色譜柱col 14。以人參皂苷Re、Rb2的SRT值31.972、63.590 min為橫坐標(biāo)（x），以兩者的實(shí)際保留時(shí)間為縱坐標(biāo)（y），進(jìn)而得到兩點(diǎn)線性方程：y=0.960 1x+3.423 1;再將其余6個(gè)成分的SRT值代入方程，得到人參皂苷Rg1、Rb1、Rc、Ro 、Rb3、Rd的預(yù)測(cè)保留時(shí)間分別為33.489 6、61.363 2、62.946 4、64.095 7、64.981 8、67.581 8 min，其與實(shí)際保留時(shí)間的相對(duì)偏差分別為 0.57%、0.42%、0.30%、0.27%、0.02%、0.16%。這符合定性條件下，預(yù)測(cè)保留時(shí)間與實(shí)測(cè)保留時(shí)間的誤差≤0.5 min 的要求[18]，表明該方法在col 14色譜柱上的預(yù)測(cè)效果良好。

2.4.3 雙標(biāo)線性校正法與相對(duì)保留時(shí)間法的比較 基于“2.4.2”項(xiàng)下結(jié)果，采用雙標(biāo)線性校正法并以人參皂苷Re、Rb2作為雙標(biāo)化合物，采用相對(duì)保留時(shí)間法并以人參皂苷Rb2為參照物，分別對(duì)保留時(shí)間進(jìn)行預(yù)測(cè)，然后得出其余6種人參皂苷類成分預(yù)測(cè)保留時(shí)間的絕對(duì)偏差。結(jié)果，雙標(biāo)線性校正法預(yù)測(cè)的6種人參皂苷類成分保留時(shí)間的絕對(duì)偏差均低于相對(duì)保留時(shí)間法，且前者絕對(duì)偏差值的波動(dòng)范圍相較后者更小，表明采用雙標(biāo)線性校正法來預(yù)測(cè)人參皂苷類成分的保留時(shí)間的準(zhǔn)確性更高，見表5。

2.5 基于相對(duì)校正因子法的定量研究

2.5.1 相對(duì)校正因子的計(jì)算 采用多點(diǎn)校正法[19-20]，即以多點(diǎn)計(jì)算所得的相對(duì)校正因子（fsi）平均值用于定量。取“2.3.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，共5份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以人參皂苷Re為參照物，分別計(jì)算人參皂苷Rg1、Rb1、Rc、Ro、Rb2、Rb3、Rd的相對(duì)校正因子fsi（fsi=fs/fi=As×ci/cs×Ai，其中As為參照物的峰面積，cs為參照物的濃度，Ai為某待測(cè)成分的峰面積，ci為某待測(cè)成分的濃度[21]），結(jié)果見表6。

2.5.2 相對(duì)校正因子的適用性考察 考察Dionex Ultimate 3000、Shimadzu LC-20AT、Agilent 1260等3種高效液相色譜系統(tǒng)和col 10[Venusil ASB C18（250 mm×4.6 mm，5 ?m）]、col 2 [Agilent 5 TC-C18（250 mm×4.6 mm，5 ?m）]2根色譜柱的相對(duì)校正因子。結(jié)果，8種人參皂苷類成分在不同高效液相色譜儀和色譜柱的RSD均小于5%，見表7。

2.6 西洋參破壁飲片樣品中8種人參皂苷類成分的含量測(cè)定

取10批西洋參破壁飲片樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”色譜條件，進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。然后采用相對(duì)校正因子法和外標(biāo)法分別計(jì)算8種人參皂苷類成分含量。結(jié)果，兩種方法測(cè)得的西洋參破壁飲片中8種人參皂苷類成分的相對(duì)誤差（RE）均小于3%，表明相對(duì)校正因子法與外標(biāo)法差異不大，可對(duì)西洋參破壁飲片中上述8種成分進(jìn)行準(zhǔn)確定性和定量，見表8。

3 討論

在中藥質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)分析中，藥效成分的含量是其重要的評(píng)價(jià)指標(biāo);而基于中藥所含成分的復(fù)雜性，以多成分含量為質(zhì)量控制指標(biāo)的評(píng)價(jià)方法已被廣泛應(yīng)用[8，14]。

西洋參中活性成分多樣，具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等藥理作用[5-6]。因其較為名貴，常將其制成破壁飲片，以有效地利用其藥效成分。目前，2020年版《中國(guó)藥典》（一部）以人參皂苷Rg1、Re、Rb1作為該飲片質(zhì)量控制的指標(biāo)，并采用外標(biāo)法進(jìn)行含量測(cè)定。但是，僅測(cè)定這3種成分，并不能全面反映西洋參的內(nèi)在質(zhì)量;且以外標(biāo)法測(cè)定多成分含量時(shí)，所需對(duì)照品的價(jià)格較高，使用量也較大，操作條件的穩(wěn)定性和進(jìn)樣量的重現(xiàn)性要求也較高?；诖耍菊n題組采用孫磊等[15]提出的“雙標(biāo)多測(cè)法”測(cè)定西洋參破壁飲片中8種人參皂苷類成分的含量。首先通過DRS Origin 軟件對(duì)13根色譜柱采集數(shù)據(jù)擬合進(jìn)而對(duì)色譜峰定位;確定雙標(biāo)化合物后，再用雙標(biāo)線性校正法預(yù)測(cè)目標(biāo)化合物的保留時(shí)間，從而達(dá)到定性目的。定量方面則結(jié)合相對(duì)校正因子法，并以人參皂苷Re為參照物進(jìn)行計(jì)算。同時(shí)，筆者還將相對(duì)校正因子法與常規(guī)外標(biāo)法測(cè)得的含量結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，利用雙標(biāo)多測(cè)法所測(cè)定的西洋參破壁飲片中人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Ro、Rb2、Rb3、Rd的含量分別為10.59～12.78、2.160～2.768、27.492～38.880、3.154～4.018、3.368～4.080、0.343～0.755、 0.961～1.415、5.857～6.923 mg/g，且與外標(biāo)法所測(cè)得的含量的RE均小于3%，表明兩種方法含量測(cè)定結(jié)果無明顯差異。

綜上所述，所建立的雙標(biāo)多測(cè)法可對(duì)西洋參破壁飲片中8種人參皂苷類成分進(jìn)行準(zhǔn)確定性和定量，后續(xù)可為該飲片多指標(biāo)成分綜合質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)提供方法基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S]. 2020年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2020：136.

[ 2 ] 林紅強(qiáng)，李平亞，劉金平.野生西洋參鑒別、化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2017，29（12）：2157-2162.

[ 3 ] 于志博.西洋參莖葉二醇組皂苷酸降解產(chǎn)物的成分研究? ? ? ? ? ?[D].長(zhǎng)春：吉林大學(xué)，2009.

[ 4 ] 李蕾，謝麗娟，王國(guó)明，等.人參、西洋參不同部位提取物中14種皂苷含量比較[J].人參研究，2018，30（3）：11-13.

[ 5 ] 馮坤苗，孟洪濤，張強(qiáng)，等.西洋參莖葉中多糖提取優(yōu)化及其抗病毒活性研究[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，19（4）：52-55.

[ 6 ] 張浩.人參活性成分蛋白質(zhì)、氨基酸、有機(jī)酸及核苷類成分研究[D].長(zhǎng)春：吉林大學(xué)，2016.

[ 7 ] 李飛鶴，蘇靜杰，趙建斌.中藥破壁飲片的研究進(jìn)展[J].當(dāng)代化工研究，2018（11）：174-175.

[ 8 ] 王智民，高慧敏，付雪濤，等.“一測(cè)多評(píng)”法中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)模式方法學(xué)研究[J].中國(guó)中藥雜志，2006，31（23）：1925- 1928.

[ 9 ] 宋亞芳，王智民，朱晶晶，等.一測(cè)多評(píng)法測(cè)定吳茱萸中吳茱萸內(nèi)酯、吳茱萸堿及吳茱萸次堿的含量[J].中國(guó)中藥雜志，2009，34（21）：2781-2785.

[10] GAO X Y，JIANG Y，LU J Q，et al. One single standard substance for the determination of multiple anthraquinone derivatives in rhubarb using high-performance liquid chromatography-diode array detection[J]. J Chromatogr A，2009，1216（11）：2118-2121.

[11] HOU J J，WU W Y，DA J，et al. Ruggedness and robustness of conversion factors in method of simultaneous determination of multi-components with single reference standard[J]. J Chromatogr A，2011，1218 （33）：5618-5622.

[12] 曹恒濤，魯靜，林瑞超，等.重樓藥材中4種重樓皂苷含量測(cè)定的對(duì)照品替代方法研究[J].藥物分析雜志，2011，31（9）：1641-1645.

[13] 許佳，金紅宇，孫磊，等.替代對(duì)照品法測(cè)定龍血竭原料中龍血素A和B的含量[J].藥物分析雜志，2011，31（11）：2058-2062.

[14] 逄瑜，孫磊，金紅宇，馬雙成.替代對(duì)照品法在中藥多指標(biāo)含量測(cè)定中的應(yīng)用與技術(shù)要求探討[J].藥物分析雜志，2013，33（1）：169-177.

[15] 孫磊，金紅宇，逄瑜，等.雙標(biāo)多測(cè)法Ⅰ-雙標(biāo)線性校正技術(shù)用于色譜峰的定性[J].藥物分析雜志，2013，33（8）：1424-1430.

[16] 王龍星，肖紅斌，梁鑫淼.一種提高色譜指紋譜保留時(shí)間重現(xiàn)性的新方法[J].分析化學(xué)，2003，31（10）：1232-1236.

[17] 陳蓉，張超，張華鋒，等.雙標(biāo)線性校正法輔助色譜峰定性用于雙黃連制劑的多組分分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2018，24（8）：40-48.

[18] 劉軍玲，張亞中，等.雙標(biāo)多測(cè)法測(cè)定補(bǔ)骨脂中補(bǔ)骨脂苷、異補(bǔ)骨脂苷、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素的含量[J].藥物分析雜志，2020，40（10）：1799-1807.

[19] HE F C，LI S X，ZHAO Z Q，et al. Simultaneous quantitative analysis of four lignanoids in Schisandra chinensis? by quantitative analysis of multi-components by single? ?marker[J]. Yao Xue Xue Bao，2012，47（7）：930-933.

[20] ZHU J J，WANG Z M，KUANG Y H，et al. A quantitative method using one marker for simultaneous assay of ginsenosides in Panax ginseng and P. notoginseng[J]. Yao Xue Xue Bao，2008，43（12）：1211-1216.

[21] 王智民，錢忠直，張啟偉，等.一測(cè)多評(píng)法建立的技術(shù)指南[J].中國(guó)中藥雜志，2011，36（6）：657-658.

（收稿日期：2020-12-23 修回日期：2021-04-12）

（編輯：唐曉蓮）