福建地區(qū)雞滑液囊支原體的分離、藥物敏感性及耐藥株全基因組序列分析

李俊 牛志強(qiáng) 侯博 華利忠 韋艷娜 劉蓓蓓 王麗 謝星 張珍珍 熊祺琰 邵國(guó)青 李新國(guó) 馮志新

摘要：2018年自福建省疑似雞滑液囊支原體感染病雞中分離得到9株雞滑液囊支原體，采用微量肉湯稀釋法測(cè)定了其對(duì)9種抗菌藥物的敏感性，對(duì)篩選出的多重耐藥株（MS HB）進(jìn)行了全基因組序列分析。結(jié)果顯示，福建地區(qū)雞滑液囊支原體臨床株對(duì)泰萬(wàn)菌素和泰妙菌素較為敏感，對(duì)泰樂(lè)菌素、多西環(huán)素、土霉素和替米考星敏感性次之，而對(duì)氟苯尼考和恩諾沙星最不敏感。多重耐藥株（MS HB）基因組大小為766 081 bp;GC含量為28.02%;共注釋到1 464個(gè)基因，其中，包括多個(gè)毒力基因和1個(gè)耐藥基因（ermQ），與敏感標(biāo)準(zhǔn)株WVU1853全基因組序列比對(duì)得出大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)和氟喹諾酮類(lèi)藥物耐藥基因的多個(gè)突變位點(diǎn)。研究結(jié)果豐富了對(duì)雞滑液囊支原體流行病學(xué)的認(rèn)識(shí)，并可為該地區(qū)臨床治療雞滑液囊支原體感染的合理用藥選擇提供理論依據(jù)和實(shí)踐指導(dǎo)。

關(guān)鍵詞：雞滑液囊支原體;藥物敏感性;全基因組測(cè)序分析

中圖分類(lèi)號(hào)： S859.7文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2021）12-0117-07

收稿日期：2020-10-07

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（編號(hào)：31800161、31900159）;江蘇省自然科學(xué)基金（編號(hào)：BK20190261、BK20180297）。

作者簡(jiǎn)介：李 ?。?987—），女，安徽馬鞍山人，博士，助理研究員，主要從事動(dòng)物支原體耐藥機(jī)制研究。E-mail：lijunjaas@126.com。

通信作者：李新國(guó)，碩士，獸醫(yī)師，主要從事獸醫(yī)藥理研究及臨床技術(shù)服務(wù)工作，E-mail：57740190@qq.com;馮志新，研究員，博士生導(dǎo)師，主要從事動(dòng)物傳染病研究，E-mail：fzxjaas@163.com。

雞滑液囊支原體是一種無(wú)細(xì)胞壁的病原微生物，給養(yǎng)禽業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，可引起雞和火雞的關(guān)節(jié)滑膜炎、呼吸系統(tǒng)疾病，蛋雞產(chǎn)蛋量下降、孵化率降低，肉雞飼料轉(zhuǎn)化率降低、胴體廢棄率升高等不同嚴(yán)重程度的亞臨床至臨床癥狀，也可能與其他病原（如傳染性支氣管炎、新城疫病毒、流感病毒、大腸桿菌和其他支原體等）合并繼發(fā)感染，或因飼養(yǎng)管理不善而加重病情[1]。

臨床防控雞滑液囊支原體感染主要依靠疫苗免疫和藥物治療。疫苗免疫主要用于長(zhǎng)期防控，而藥物治療是最快速有效降低經(jīng)濟(jì)損失的途徑。大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、氟喹諾酮類(lèi)和四環(huán)素類(lèi)是臨床治療畜禽支原體感染最常用的藥物類(lèi)別，但是在抗菌藥物長(zhǎng)期大量使用的選擇性壓力下，耐藥菌株相關(guān)報(bào)道屢見(jiàn)不鮮[2]，造成臨床治療效果下降。本研究采用微量肉湯稀釋法測(cè)定了福建地區(qū)分離的雞滑液囊支原體對(duì)獸醫(yī)臨床常用抗菌藥物的敏感性，得到其流行病學(xué)特征，并對(duì)多重耐藥株的全基因組序列進(jìn)行分析，以期為臨床謹(jǐn)慎合理選擇與使用抗菌藥物、遏制耐藥性產(chǎn)生提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 臨床病料的采集

2018年3—5月對(duì)福建省不同地區(qū)疑似雞滑液囊支原體感染病雞采集氣管拭子，置于KM2液體培養(yǎng)基中4 ℃保存，送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行雞滑液囊支原體的分離培養(yǎng)與鑒定。參考菌株雞滑液囊支原體WVU 1853株受贈(zèng)于江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)所張小飛研究員。

1.1.2 培養(yǎng)基

KM2液體與固體培養(yǎng)基，由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所豬病防控研究室提供。

1.1.3 抗菌藥物

牧樂(lè)興，中牧南京動(dòng)物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品（2 500萬(wàn)U，批號(hào)：190227001）;酒石酸泰萬(wàn)菌素，內(nèi)蒙古中牧生物藥業(yè)有限公司（882 U/mg，批號(hào)：AY 201807028）;酒石酸泰樂(lè)菌素，山東魯抗舍里樂(lè)藥業(yè)有限公司（939 U/mg，批號(hào)：T-1709143）;延胡索酸泰妙菌素，山東勝利生物工程有限公司（80%，批號(hào)：TMP801903101）;替米考星，山東魯抗舍里樂(lè)藥業(yè)有限公司（93.6%，批號(hào)：TMCZ1905044）;鹽酸多西環(huán)素，揚(yáng)州聯(lián)博藥業(yè)有限公司（90.4%，批號(hào)：YD 190401108）;鹽酸土霉素，揚(yáng)州聯(lián)博藥業(yè)有限公司（90.6%，批號(hào)：YT 190402054）;氟苯尼考，山東國(guó)邦藥業(yè)股份有限公司（100%，批號(hào)：701-1904090）;恩諾沙星，浙江國(guó)邦藥業(yè)有限公司（99.9%，批號(hào)：190917-5）。

1.2 方法

1.2.1 雞滑液囊支原體的分離

病料拭子在KM2液體培養(yǎng)基中經(jīng)劇烈振蕩，取上清懸液經(jīng)0.45 μm的濾器過(guò)濾，置于無(wú)菌的密閉培養(yǎng)管，37 ℃培養(yǎng) 18～20 h后，以1 ∶10轉(zhuǎn)移接種至新鮮KM2液體培養(yǎng)基中，37 ℃繼續(xù)培養(yǎng)14 d，逐日觀察培養(yǎng)基顏色變化，待顏色由玫瑰紅變?yōu)殚偌t色或黃色時(shí)，再次以1 ∶10接種新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行傳代。待臨床分離株穩(wěn)定傳至3～4代，倍比稀釋后采用KM2固體培養(yǎng)基進(jìn)行克隆純化2次，在體視顯微鏡下觀察菌落形態(tài)。

1.2.2 雞滑液囊支原體的PCR鑒定

自KM2固體培養(yǎng)基挑取單個(gè)疑似菌落至2 mL的KM2液體培養(yǎng)基中，待培養(yǎng)成熟后，采用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取疑似雞滑液囊支原體菌株的DNA作為模板進(jìn)行PCR及序列測(cè)定。采用OIE推薦的雞滑液囊支原體檢測(cè)引物（MS-F：5′-GAGAAGCAAAATAGTGATATCA-3′，MS-R：5′-CAGTCGTCTCCGAAGTTAACAA-3′），預(yù)期擴(kuò)增片段為185 bp。具體PCR擴(kuò)增條件參考中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《禽支原體PCR檢測(cè)方法NY/T 553—2015》。

1.2.3 抗菌藥物對(duì)雞滑液囊支原體的最小抑菌濃度測(cè)定

參考Hannan推薦的微量稀釋法測(cè)定抗菌藥物對(duì)雞滑液囊支原體臨床分離株的最小抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）[3]。稱(chēng)取待試藥物，無(wú)菌操作溶解于相應(yīng)稀釋液，配制母液濃度為1 280 μg/mL，將各藥物母液用KM2液體培養(yǎng)基按照2倍稀釋法稀釋成10個(gè)工作液濃度。根據(jù)不同分離株的顏色變化單位（CCU）調(diào)整菌液接種量至104～105 CCU/mL。在96孔細(xì)胞微孔板中進(jìn)行MIC測(cè)定。設(shè)置WVU 1853為質(zhì)控菌株，KM2液體培養(yǎng)基為陰性對(duì)照，菌株培養(yǎng)液為陽(yáng)性對(duì)照，同時(shí)各MIC試驗(yàn)設(shè)置3個(gè)平行。將96孔細(xì)胞微孔板密封后至于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，逐日觀察顏色變化，記錄初始MIC值與終末MIC值。判定標(biāo)準(zhǔn)為陰性對(duì)照孔不變色，陽(yáng)性對(duì)照孔變?yōu)辄S色，以試驗(yàn)孔不發(fā)生肉眼可見(jiàn)顏色變化的最低藥物濃度孔為該藥物對(duì)該菌株的MIC。

1.2.4 雞滑液囊支原體耐藥株全基因組序列分析

對(duì)于呈現(xiàn)多重耐藥表型的雞滑液囊支原體MS HB株，提取其全基因組DNA采用Illumina PE150平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序，具體工作交由北京諾禾致源科技股份有限公司完成。簡(jiǎn)要測(cè)序步驟如下：應(yīng)用Illumina Nova Seq PE150技術(shù)對(duì)構(gòu)建的PE文庫(kù)（～350 bp）文庫(kù)測(cè)序。對(duì)于原始下機(jī)數(shù)據(jù)使用readf（Version 10）進(jìn)行過(guò)濾，得到有效數(shù)據(jù)，采用SOAP denovo（Version 2.04）、SPAdes、ABySS軟件進(jìn)行基因組組裝，并最終使用CISA軟件進(jìn)行整合，采用gapclose（Version1.12）對(duì)初步組裝結(jié)果進(jìn)行優(yōu)化和補(bǔ)洞。

使用GeneMarkS（Version 4.17）軟件對(duì)新測(cè)序的基因組進(jìn)行編碼基因預(yù)測(cè)，對(duì)預(yù)測(cè)基因進(jìn)行COG功能分類(lèi)、GO注釋、KEGG通路分析。利用tRNAscan-SE、rRNAmmer和Rfam database軟件對(duì)tRNA、rRNA和sRNA進(jìn)行預(yù)測(cè)，IslandPath-DIOMB（Version 0.2）軟件對(duì)基因島進(jìn)行預(yù)測(cè)，phiSpy軟件（Version 2.3）對(duì)前噬菌體進(jìn)行預(yù)測(cè)，CRISPRdigger（Version 1.0）對(duì)CRISPR進(jìn)行預(yù)測(cè)。使用TCDB（Transporter Classification Database）數(shù)據(jù)庫(kù)分析轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，VFDB（Virulence Factors of Pathogenic Bacteria）數(shù)據(jù)庫(kù)分析毒力基因，ARDB（Antibiotic Resistance Genes Database）數(shù)據(jù)庫(kù)分析耐藥基因，對(duì)比對(duì)得到的靶點(diǎn)突變?cè)O(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR，結(jié)合桑格爾測(cè)序驗(yàn)證。

2 結(jié)果與分析

2.1 雞滑液囊支原體的分離鑒定結(jié)果

經(jīng)實(shí)驗(yàn)室分離純化培養(yǎng)、分子生物學(xué)鑒定程序，自福建地區(qū)病雞氣管拭子樣品中成功分離得到9株雞滑液囊支原體，由圖1-A可知，其KM2液體培養(yǎng)物呈紫紅色，輕微振蕩，有絲狀或絮狀物懸浮。雞滑液囊支原體在KM2固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)7～14 d，肉眼觀察可見(jiàn)無(wú)色、透明、細(xì)小、圓形菌落。由圖1-B可知，體視顯微鏡下低倍（40×）觀察可見(jiàn)典型“油煎蛋”狀特征，光滑扁平、邊緣整齊、菌落中央致密隆起。

對(duì)于平板克隆后的雞滑液囊支原體疑似菌株，試劑盒法提取其DNA，采用OIE推薦的雞滑液囊支原體檢測(cè)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增鑒定。由圖2可知，測(cè)試菌株均成功擴(kuò)增出特異性條帶，長(zhǎng)度為185 bp，與陽(yáng)性對(duì)照WVU1853株一致，表明疑似菌株均可判定為雞滑液囊支原體。

2.2 MIC測(cè)定結(jié)果

雞滑液囊支原體臨床分離株（9株）與標(biāo)準(zhǔn)株（1株）對(duì)牧樂(lè)興等9種常用抗菌藥物的敏感性測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，牧樂(lè)興與泰萬(wàn)菌素對(duì)所

有MS菌株的MIC測(cè)定結(jié)果較為一致。多數(shù)雞滑液囊支原體臨床株對(duì)泰萬(wàn)菌素、泰妙菌素較為敏感，對(duì)泰樂(lè)菌素、多西環(huán)素、土霉素和替米考星敏感性次之，對(duì)氟苯尼考和恩諾沙星最不敏感。其中，多種抗菌藥物對(duì)MS HB株的MIC值均較高，提示MS HB株可能為多重耐藥支原體。

2.3 MS HB株全基因組序列分析結(jié)果

將多重耐藥MS HB株通過(guò)Illumina PE150平臺(tái)進(jìn)行全基因組測(cè)序，經(jīng)序列組裝和整合優(yōu)化分析，其基因組基本信息見(jiàn)表2。由表2可知，HB株基因組總長(zhǎng)度為766 081 bp，GC含量28.02%，N50長(zhǎng)度為 83 641 bp，N90長(zhǎng)度為14 900 bp，最長(zhǎng)片段為 115 534 bp，最短片段為512 bp。由圖3可知，注釋后總共有1 464個(gè)編碼基因，基因總長(zhǎng)度為 516 525 bp，占基因組全長(zhǎng)的67.42%，平均長(zhǎng)度為353 bp?；蚪M含有34個(gè)tRNA編碼基因， 3個(gè)5SrRNA，1個(gè)16SrRNA和1個(gè)23SrRNA。由圖4可知，基因島是與病原機(jī)理、生物體的適應(yīng)性等多種生物功能相關(guān)的基因組區(qū)段，共預(yù)測(cè)到2個(gè)基因島。

由圖5可知，對(duì)預(yù)測(cè)基因進(jìn)行COG功能分類(lèi)，共有235個(gè)基因被分為18種COG分類(lèi);由圖6可知，共有2 875個(gè)基因注釋上42條GO功能分類(lèi)，樣本基因的功能在生理過(guò)程分類(lèi)中主要聚集于細(xì)胞進(jìn)程（413個(gè)）和代謝過(guò)程（405個(gè)）;在分子功能主要聚集于結(jié)合（341個(gè)）和催化活性（373個(gè)）。由圖7可知，對(duì)基因進(jìn)行KEGG注釋?zhuān)?61個(gè)基因共注釋上90個(gè)通路，最多見(jiàn)的4個(gè)注釋通路分別是代謝通路（89個(gè)）、核糖體（43個(gè)）、次級(jí)代謝產(chǎn)物生物合成（27個(gè)）和多樣環(huán)境中的微生物代謝（27個(gè)）。

通過(guò)與細(xì)菌致病毒力因子數(shù)據(jù)庫(kù)（VFDB）比對(duì)，MS HB株基因組共注釋到9個(gè)毒力相關(guān)基因，主要包括dnaK、cylA、EF-Tu、lplA1、SSU98、oppF、pdhB、vlh和GAPDH等，具體注釋見(jiàn)表3。

通過(guò)ARDB數(shù)據(jù)庫(kù)注釋?zhuān)琈S HB株基因組中注釋到1個(gè)耐藥基因ermQ，該耐藥基因的基因序列編號(hào)為：GM000161。將MS HB株的大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)耐藥基因：23S rRNA基因（rrlA和rrlB）、L4核糖體蛋白編碼基因（rplD）、L22核糖體蛋白編碼基因（rplV）以及氟喹諾酮類(lèi)藥物靶點(diǎn)：DNA旋轉(zhuǎn)酶編碼基因（gyrA和gyrB）和拓?fù)洚悩?gòu)酶IV編碼基因（parC和parE）與GenBank中已公布全基因組序列的MS WVU1853株（登錄號(hào)：NZ CP011096）進(jìn)行比對(duì)，獲得其基因突變位點(diǎn)與相應(yīng)氨基酸突變位點(diǎn)，由表4可知，這些基因突變可能導(dǎo)致藥物作用靶位改變，與抗生素親和力下降，從而引起耐藥。

3 討論

支原體缺乏細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，作用于細(xì)胞壁的β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物對(duì)其無(wú)效，而作用于蛋白質(zhì)合成和DNA復(fù)制環(huán)節(jié)的大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)和氟喹諾酮類(lèi)藥物抗支原體效果較強(qiáng)[5]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，福建地區(qū)分離的雞滑液囊支原體臨床株對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物（泰萬(wàn)菌素、泰樂(lè)菌素和替米考星）、截短側(cè)耳素類(lèi)（泰妙菌素）和四環(huán)素類(lèi)（多西環(huán)素和土霉素）較為敏感，而抗菌藥物氟苯尼考和恩諾沙星由于在獸醫(yī)臨床的廣泛應(yīng)用，雞滑液囊支原體臨床株對(duì)其敏感性降低，與國(guó)內(nèi)相關(guān)調(diào)查數(shù)據(jù)較為一致。

丁美娟等2012—2014年測(cè)定自河南、江蘇、安徽、河北和廣東5省分離得到的雞滑液囊支原體代表株藥物敏感性，發(fā)現(xiàn)其對(duì)泰樂(lè)菌素較為敏感，對(duì)氟喹諾酮類(lèi)藥物具有不同程度的抗藥性[6]。2015—2017年招麗嬋等分析了廣東、廣西、江蘇、浙江、福建等地10個(gè)不同地區(qū)雞滑液囊支原體代表株，發(fā)現(xiàn)其均對(duì)泰妙菌素、泰萬(wàn)菌素、泰樂(lè)菌素和多西環(huán)素較為敏感，而對(duì)金霉素、慶大霉素等敏感性下降，甚至出現(xiàn)不同程度耐受性，對(duì)鹽酸環(huán)丙沙星、沙拉沙星敏感性較低[7]。石曉磊等2017年初從寧夏地區(qū)采集87份疑似感染雞病料，分離得到13株雞滑液囊支原體，每個(gè)分離地隨機(jī)挑選1株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)3株滑液囊支原體均對(duì)泰萬(wàn)菌素、泰妙菌素、泰樂(lè)菌素敏感，而對(duì)氟苯尼考和恩諾沙星有一定的耐受性[8]。Kreizinger等2002—2016年自歐洲中部和東部7個(gè)國(guó)家采集到41株雞滑液囊支原體， 發(fā)現(xiàn)四環(huán)素類(lèi)（多西環(huán)素、土霉素和金霉素）、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)（泰萬(wàn)菌素、泰樂(lè)菌素和替米考星）、截短側(cè)耳素類(lèi)（泰妙菌素和沃尼妙林）以及鹽酸林可大觀對(duì)其具有體外抑菌效果，而氟喹諾酮類(lèi)（恩諾沙星、雙氟沙星），新霉素，壯觀霉素，林可霉素和氟苯尼考的MIC值較高[9]。

本研究應(yīng)用Illumina Nova Seq PE150技術(shù)對(duì)多重耐藥株（MS HB）進(jìn)行全基因組序列分析，破解其耐藥與毒力相關(guān)因子遺傳信息。通過(guò)與VFDB數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，挖掘到MS HB基因組中存在多個(gè)毒力相關(guān)因子，包括dnaK、cylA、EF-Tu、lplA1、SSU98、oppF、pdhB、 vlh和GAPDH等。與其他支原體相同， 如牛支原體[10]、雞毒支原體[11]、豬肺炎支原體[12-13]等，這些毒力相關(guān)因子可參與支原體感染宿主細(xì)胞、逃避免疫并引起宿主免疫病理反應(yīng)，在支原體動(dòng)物體內(nèi)定殖和存活中起著重要作用[14]。

通過(guò)與ARDB數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，分析得到MS HB株基因組中存在大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗性基因ermQ，該基因最早在產(chǎn)期莢膜梭菌中發(fā)現(xiàn)，可介導(dǎo)對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)-林可霉素-鏈陽(yáng)菌素B（MLS）耐藥[15]。

ermQ基因作用機(jī)制主要為編碼甲基化酶，使核糖體23S rRNA基因甲基化，導(dǎo)致MLS失去對(duì)雞滑液囊支原體的抑制作用。本研究首次報(bào)道在雞滑液囊支原體基因組中檢測(cè)到ermQ抗性基因。支原體對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物最重要的耐藥機(jī)制是核糖體上23S rRNA結(jié)構(gòu)域Ⅱ區(qū)和Ⅴ區(qū)靶點(diǎn)突變[16]。雞滑液囊支原體基因組中包含2個(gè)rrn操縱子，每個(gè)操縱子具有1個(gè)23S rRNA基因。研究報(bào)道23S rRNA基因Ⅱ區(qū)突變位點(diǎn)較少，目前僅有G748A報(bào)道[17]，與其他支原體類(lèi)似。Inna Lysnyansky和Katinka Beko等發(fā)現(xiàn)，雞滑液囊支原體23S rRNA基因Ⅳ區(qū)最常見(jiàn)的靶點(diǎn)突變?yōu)镚2057A、A2058G和A2059G[4，17]。本研究中雞滑液囊支原體臨床株（MS HB株）對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素（泰萬(wàn)菌素、泰樂(lè)菌素和替米考星）呈現(xiàn)高度耐藥特征，但通過(guò)比對(duì)并未在這些常見(jiàn)位點(diǎn)檢測(cè)到突變，推測(cè)其對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)主要耐藥機(jī)制可能由ermQ所介導(dǎo)。恩諾沙星對(duì)MS HB株的MIC值與敏感標(biāo)準(zhǔn)株WVU1853相比，升高32倍。比較兩者氟喹諾酮類(lèi)靶酶編碼基因（gyrA、gyrB、parC和parE），發(fā)現(xiàn)多個(gè)突變位點(diǎn)，可能與其耐藥性相關(guān)，但需要進(jìn)一步驗(yàn)證，其中ParC蛋白的T85I位點(diǎn)突變?cè)诮谖墨I(xiàn)[4]中亦有報(bào)道。

目前，抗菌藥物治療仍是國(guó)內(nèi)臨床防控雞滑液囊支原體感染最有效的方法。根據(jù)本研究結(jié)果，防治雞滑液囊支原體感染，可首選泰萬(wàn)菌素和泰妙菌素;而針對(duì)雞滑液囊支原體與其他細(xì)菌性疾病的混合感染，可考慮與多西環(huán)素、氟苯尼考等抗菌藥物聯(lián)合用藥進(jìn)行防控。支原體雖然生長(zhǎng)緩慢，培養(yǎng)條件苛刻，但其臨床分離鑒定與長(zhǎng)期耐藥性檢測(cè)具有重要臨床意義，應(yīng)結(jié)合藥敏試驗(yàn)審慎合理選擇敏感藥物進(jìn)行治療。未來(lái)也可針對(duì)其耐藥機(jī)制建立耐藥突變位點(diǎn)的分子生物學(xué)快速檢測(cè)方法，達(dá)到預(yù)測(cè)耐藥性的目的，可縮短支原體培養(yǎng)與藥敏實(shí)驗(yàn)時(shí)間，亦可為臨床治療雞滑液囊支原體感染的合理用藥選擇提供理論依據(jù)和實(shí)踐指導(dǎo)。

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