丹參酮ⅡA減輕棕櫚酸誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激

王亞丹， 艾景雪， 高瑞， 李運(yùn)麗， 張海波

（河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院心內(nèi)三科，河南開封475000）

肥胖可造成系統(tǒng)性代謝紊亂，是循環(huán)系統(tǒng)疾病的重要危險(xiǎn)因素[1]。富含高脂肪食物的飲食，尤其是飽和脂肪，會(huì)加重肥胖和脂毒性心肌病的風(fēng)險(xiǎn)[2]，且脂質(zhì)積累程度與心臟功能障礙有關(guān)[3]。如何干預(yù)脂毒性心肌病對心血管疾病的預(yù)防具有重要的研究意義。丹參為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhizaBge.的干燥根及根莖，味苦、性微寒，入心、肝經(jīng)，具有活血祛瘀、通經(jīng)止痛、清心除煩、涼血消癰功效，是常用的改善心血管疾病的中藥[4-5]。丹參酮ⅡA是從丹參中提取的天然活性成分。已有研究表明：丹參酮ⅡA對心肌組織的缺血-再灌注損傷具有顯著的修復(fù)作用[6-7]；丹參酮ⅡA預(yù)處理1周后的心肌缺血大鼠模型中，梗死面積明顯減小[8]；丹參酮ⅡA可防止缺氧誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞線粒體功能障礙[9]，可通過上調(diào)microRNA-133和激活蛋白激酶B（Akt）保護(hù)H9c2細(xì)胞免受氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡[10]，也可通過磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPKs）/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）依賴的自噬途徑保護(hù)心肌梗死后心衰[11]；丹參酮ⅡA可以通過減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制心肌細(xì)胞的凋亡[12-13]。鑒于丹參酮ⅡA具有較為明確的心肌保護(hù)作用，本研究進(jìn)一步探討丹參酮ⅡA對棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞脂毒性損傷模型的保護(hù)作用及機(jī)制，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞大鼠胚胎心肌細(xì)胞H9c2（CM-0089），購自武漢普諾賽生命科技有限公司。

1.2 藥物、試劑與儀器丹參酮ⅡA（CAS：568-72-9，分子量：294.33）購自上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：B20257。棕櫚酸購自上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：JS688093；細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8（CCK-8）、胰蛋白酶、膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒、10%十二烷基硫酸鈉（SDS）-聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）試劑、聚偏氟乙烯（PVDF）膜、辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的羊抗兔IgG、電化學(xué)發(fā)光（ECL）檢測試劑盒（北京索萊寶科技有限公司）；10 mg/mL RNaseA（上海翊圣生物科技有限公司）；RNA純化系統(tǒng)（Qiagen公司）；SuperScript RNase H-逆轉(zhuǎn)錄酶（美國Invitrogen公司）；隨機(jī)六聚體（美國Sigma-Aldrich公司）；SYBR Green Master Mix（美國Thermo Fisher公司）；葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）、轉(zhuǎn) 錄 激 活因 子4（ATF4）、CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白（CHOP）、Caspase-3、Caspase-9、Caspase-12、蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（PERK）、磷酸化PERK（p-PERK）、真核生物翻譯起始因子2α（eIF2α）、磷酸化eIF2α（p-eIF2α）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）（美國CST公司）。Multiskan Sky酶標(biāo)儀購自美國Thermo Fisher公司；FACSCalibur流式細(xì)胞儀購自美國Becton Dickinson公司；ABI Prism 7000 PCR系統(tǒng)購自Applied Biosystems公司；ChemiDoc XRS+高靈敏化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)購自美國Bio-Rad公司。

1.3 CCK-8法測定細(xì)胞活力用胰酶消化對數(shù)期H9c2細(xì)胞后，收集并計(jì)數(shù)，重懸細(xì)胞并接種于96孔板，分6組。即：①對照組：不做任何處理；②棕櫚酸（400 μmol/L）組：H9c2細(xì)胞培養(yǎng)24 h后，用400 μmol/L棕櫚酸誘導(dǎo)細(xì)胞；③丹參酮ⅡA 20 μmol/L組：H9c2細(xì)胞培養(yǎng)24 h后，用20 μmol/L丹參酮ⅡA誘導(dǎo)細(xì)胞；④棕櫚酸（400 μmol/L）+丹參酮ⅡA（5、10、20 μmol/L）3個(gè)濃度組：H9c2細(xì)胞培養(yǎng)24 h后，用400 μmol/L棕櫚酸誘導(dǎo)細(xì)胞，24 h后，分別加入不同濃度（5、10、20 μmol/L）的丹參酮ⅡA處理細(xì)胞。按照CCK-8試劑盒的操作說明，在含對應(yīng)藥物的100 μL培養(yǎng)基中培養(yǎng)22 h，加入10 μL CCK-8繼續(xù)培養(yǎng)2 h，用酶標(biāo)儀檢測每個(gè)孔在450 nm波長處的吸光度，然后檢測各組的H9c2細(xì)胞存活率。每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.4 流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞凋亡情況分組同“1.3”項(xiàng)。用體積分?jǐn)?shù)70%乙醇4℃過夜固定H9c2細(xì)胞，然后加入RNaseA和PI 4℃染色過夜，再按照Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測試劑盒說明書的方法操作，最后應(yīng)用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞凋亡率。AnnexinV-FITC（-）/PI（-）（左下）為正常細(xì)胞，AnnexinV-FITC（+）/PI（-）細(xì)胞（右下）為早期凋亡細(xì)胞，AnnexinV-FITC（+）/PI（+）（右上）為晚期凋亡細(xì)胞，AnnexinV（-）/PI（+）（左上）為壞死細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.5 實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）法檢測心肌細(xì)胞GRP78、ATF4、CHOP mRNA表達(dá)分組同“1.3”項(xiàng)。用RNA純化系統(tǒng)提取總RNA。用SuperScript RNase H-逆轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)六聚體合成cDNA。在ABI Prism 7000系統(tǒng)中，使用SYBR Green Master Mix反應(yīng)體系和引物在優(yōu)化濃度下進(jìn)行PCR反應(yīng)。GRP78、ATF4、CHOP和管家基因GAPDH的序列如下：GRP78正向引物序列為5’-GAAACTGCCGAGGCGTAT-3’，反向引物序列為5’-ATGTTCTTCTCTCCCTCTCTCTTA-3’；ATF4正向引物序列為5’-TCCGAATGGCTGGCTGTGG-3’，反向引物序列為5’-AGTGTAGTCTGGCTTCCTATC TCC-3’；CHOP正向引物序列為5’-GGAAACAGA GTGGTCATTCCC-3’，反向引物序列為5’-CTGCT TGAGCCGTTCATTCTC-3’；GAPDH正向引物序列為5’-GGGTGTGAACCACGAGAAAT-3’，反向引物序列為5’-ACTGTGGTCATGAGCCCTTC-3’。反應(yīng)條件：95℃5 min；95℃30 s，60℃30 s，重復(fù)40個(gè)循環(huán)。每個(gè)基因均生成標(biāo)準(zhǔn)曲線，擴(kuò)增效率為90%~100%。通過閾值比較，確定基因表達(dá)的相對定量。結(jié)果以2ΔΔCt法計(jì)算。所有結(jié)果均以GAPDH為內(nèi)參進(jìn)行歸一化。

1.6 蛋白免疫印跡（Western Blotting）法檢測心肌細(xì)胞GRP78、ATF4、CHOP、Caspase-3、Caspase-9、Caspase-12、PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α蛋白表達(dá)分組同“1.3”項(xiàng)。收集細(xì)胞，與細(xì)胞裂解緩沖液、蛋白酶抑制劑、去磷酸化酶抑制劑在冰上混合20 min，收集裂解液，以4℃以13 000×g離心5 min，取上清。使用BCA蛋白定量試劑盒測量蛋白質(zhì)的濃度。取30 μg蛋白，加熱變性，經(jīng)10%SDS-PAGE分離后轉(zhuǎn)移到PVDF膜。使用體積分?jǐn)?shù)2%牛血清白蛋白（BSA）室溫封閉1 h。加入GRP78抗體4℃孵育過夜。加入羊抗兔IgG-HRP孵育1 h。最后，采用ECL化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒顯色，用高靈敏化學(xué)發(fā)光檢測儀觀察電泳 條 帶。ATF4、CHOP、Caspase-3、Caspase-9、Caspase-12、PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α、GAPDH檢測方法同上。

1.7 統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，以單因素方差分析（One-way ANOVA）方法進(jìn)行多組比較，兩兩比較采用t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 丹參酮ⅡA逆轉(zhuǎn)了棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞存活率的降低圖1結(jié)果顯示：與對照組比較，丹參酮ⅡA 20 μmol/L組的細(xì)胞存活率無顯著性差異（P>0.05），而棕櫚酸（400 μmol/L）組的細(xì)胞存活率顯著降低（P<0.01）；與棕櫚酸（400 μmol/L）組比較，不同濃度丹參酮ⅡA（5、10、20 μmol/L）與棕櫚酸共處理組的細(xì)胞存活率以劑量依賴性方式回升，且棕櫚酸+丹參酮ⅡA 10 μmol/L組（P<0.05）和棕櫚酸+丹參酮ⅡA 20 μmol/L組（P<0.01）細(xì)胞存活率回升有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 丹參酮ⅡA對棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞存活率的影響Figure 1 Effects of tanshinoneⅡA on survival rate ofpalmitic acid-induced H9c2 cells

2.2 丹參酮ⅡA緩解了棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激圖2-A結(jié)果顯示：與對照組比較，丹參酮ⅡA 20 μmol/L組細(xì)胞的GRP78、ATF4和CHOP的mRNA水平無顯著性差異（P>0.05），而棕櫚酸（400 μmol/L）組細(xì)胞的GRP78、ATF4和CHOP的mRNA水平顯著升高（P<0.01）；與棕櫚酸（400 μmol/L）組比較，不同濃度丹參酮ⅡA（5、10、20 μmol/L）與棕櫚酸共處理組細(xì)胞的GRP78、ATF4和CHOP的mRNA水平以劑量依賴性方式回降，且棕櫚酸+丹參酮ⅡA 10 μmol/L組（P<0.05）和棕櫚酸+丹參酮ⅡA 20 μmol/L組（P<0.01）細(xì)胞的GRP78、ATF4和CHOP的mRNA水平回降顯著。

圖2 -B結(jié)果顯示：與對照組比較，丹參酮ⅡA 20 μmol/L組細(xì)胞的GRP78、ATF4和CHOP的蛋白水平無顯著性差異（P>0.05），而棕櫚酸（400 μmol/L）組細(xì)胞的GRP78、ATF4和CHOP的蛋白水平升高顯著（P<0.01）；與棕櫚酸（400 μmol/L）組比較，不同濃度丹參酮ⅡA（5、10、20 μmol/L）與棕櫚酸共處理組細(xì)胞的GRP78、ATF4和CHOP的蛋白水平以劑量依賴性方式回降，且棕櫚酸+丹參酮ⅡA 10 μmol/L組（P<0.05）和棕櫚酸+丹參酮ⅡA 20 μmol/L組（P<0.01）細(xì)胞的GRP78、ATF4和CHOP的蛋白水平回降顯著。

圖2 丹參酮ⅡA對棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響Figure 2 Effects of tanshinoneⅡA on endoplasmic reticulum stress in palmitic acid-induced H9c2 cells

2.3 丹參酮ⅡA抑制了棕櫚酸誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞的凋亡圖3-A結(jié)果顯示：與對照組比較，丹參酮ⅡA 20 μmol/L組細(xì)胞的凋亡率無顯著性差異（P>0.05），而棕櫚酸（400 μmol/L）組細(xì)胞凋亡率顯著升高（P<0.01）；與棕櫚酸（400 μmol/L）組比較，不同濃度丹參酮ⅡA（5、10、20 μmol/L）與棕櫚酸共處理組細(xì)胞的凋亡率以劑量依賴性方式回降，且棕櫚酸+丹參酮ⅡA 10 μmol/L組（P<0.05）和棕櫚酸+丹參酮ⅡA 20 μmol/L組（P<0.01）細(xì)胞的凋亡率回降顯著。

圖3 -B結(jié)果顯示：與對照組比較，丹參酮ⅡA 20 μmol/L組 細(xì) 胞 的Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12的蛋白表達(dá)水平無顯著性差異（P>0.05），而棕櫚酸（400 μmol/L）組的這3種蛋白表達(dá)水平顯著升高（P<0.01）；與棕櫚酸（400 μmol/L）組比較，不同濃度丹參酮ⅡA（5、10、20 μmol/L）與棕櫚酸共處理組細(xì)胞的Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12蛋白表達(dá)水平以劑量依賴性方式回降，且棕櫚酸+丹參酮ⅡA 10 μmol/L組（P<0.05）和棕櫚酸+丹參酮ⅡA 20 μmol/L組（P<0.01）細(xì)胞的凋亡率回降顯著。

圖3 丹參酮ⅡA對棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞凋亡的影響Figure 3 Effects of tanshinoneⅡA on apoptosis of palmitic acid-induced H9c2 cells

2.4 丹參酮ⅡA阻礙了棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞PERK信號(hào)通路的磷酸化圖4結(jié)果顯示：與對照組比較，丹參酮ⅡA 20 μmol/L組細(xì)胞的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例無顯著性變化（P>0.05），而棕櫚酸（400 μmol/L）組細(xì)胞p-PERK/PERK和peIF2α/eIF2α比例顯著增大（P<0.01）；與棕櫚酸（400 μmol/L）比較，不同濃度丹參酮ⅡA（5、10、20 μmol/L）與棕櫚酸共處理組細(xì)胞p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2αs比例以劑量依賴性方式回降，且棕櫚酸+丹參酮ⅡA 10 μmol/L組（P<0.05）和棕櫚酸+丹參酮ⅡA 20 μmol/L組（P<0.01）細(xì)胞p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例回降顯著。

圖4 丹參酮ⅡA對棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞PERK信號(hào)通路磷酸化的影響Figure 4 Effects of tanshinoneⅡA on phosphorylation of PERK signaling pathway in palmitic acid-induced H9c2 cells

2.5 丹參酮ⅡA通過調(diào)節(jié)PERK信號(hào)通路緩解棕櫚酸誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激為了進(jìn)一步驗(yàn)證丹參酮ⅡA對PERK信號(hào)通路的影響，本研究引入PERK通路激活劑CCT020312進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，增加棕櫚酸（400 μmol/L）+CCT020312（3 μmol/L）組與棕櫚酸（400 μmol/L）+CCT020312（3 μmol/L）+丹參酮ⅡA（20 μmol/L）組。圖5-A結(jié)果顯示：與對照組比較，棕櫚酸組細(xì)胞的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例顯著增大（P<0.01）；與棕櫚酸組比較，棕櫚酸+丹參酮ⅡA 20 μmol/L組細(xì)胞的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比 例 顯 著 減 ?。≒<0.01），而棕櫚酸+CCT020312組細(xì)胞的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比 例 顯 著 回 升（P<0.05）；與棕櫚酸+CCT020312組和棕櫚酸+丹參酮ⅡA組比較，棕櫚酸+CCT020312+丹參酮ⅡA組的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例顯著回降（P<0.05）。同樣，我們也考察了細(xì)胞凋亡率（圖5-B）和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的GRP78、ATF4和CHOP的mRNA表達(dá)水平（圖5-C），得到了與上述信號(hào)通路結(jié)果相一致的結(jié)果。這些實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了丹參酮ⅡA通過調(diào)節(jié)PERK信號(hào)通路緩解棕櫚酸誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。

圖5 丹參酮ⅡA通過調(diào)節(jié)PERK信號(hào)通路對棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞凋亡和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響Figure 5 Effects of tanshinoneⅡA on apoptosis and endoplasmic reticulum stress in palmitic acid-induced H9c2 cells by modulating the PERK signaling pathway

3 討論

肥胖是包括代謝綜合征和心肌病等在內(nèi)一系列疾病的危險(xiǎn)因素，其脂毒性是一個(gè)重要方面[14]。肥胖和脂質(zhì)積累會(huì)加快心血管系統(tǒng)的非脂肪細(xì)胞中過多脂質(zhì)的積累，導(dǎo)致細(xì)胞功能障礙和細(xì)胞死亡，造成脂毒性心肌病[14]。棕櫚酸是最常見的飽和長鏈脂肪酸，在包括心肌細(xì)胞在內(nèi)的許多細(xì)胞類型中都能觸發(fā)細(xì)胞凋亡[15]。故本研究選擇棕櫚酸400 μmol/L刺激H9c2心肌細(xì)胞構(gòu)建心肌細(xì)胞脂毒性損傷模型。在此細(xì)胞模型上，流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，棕櫚酸400 μmol/L組心肌細(xì)胞存活率、凋亡率明顯升高（P<0.01），說明在體外環(huán)境中棕櫚酸可通過誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡而發(fā)揮脂毒性作用。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是脂代謝密切相關(guān)的細(xì)胞器[16]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)的破壞使大量錯(cuò)誤或者未折疊蛋白質(zhì)在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中聚集，激活相應(yīng)的信號(hào)通路，引起一系列的細(xì)胞反應(yīng)，即內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。一方面，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通過調(diào)節(jié)參與脂質(zhì)合成或修飾關(guān)鍵酶的表達(dá)水平來影響脂質(zhì)代謝；另一方面，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡或細(xì)胞膜組件的異常合成可介導(dǎo)心肌細(xì)胞脂毒性損傷。有研究發(fā)現(xiàn)，以棕櫚酸為代表的心肌脂毒性誘導(dǎo)過程中，發(fā)生的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激激活了葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）、真核生物翻譯起始 因 子2α（eIF2α）、蛋 白 激 酶R樣 內(nèi) 質(zhì) 網(wǎng) 激酶（PERK）、CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白（CHOP）和Caspase蛋白等相關(guān)凋亡通路[2]。由此推測，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路的激活及其相關(guān)蛋白的表達(dá)調(diào)控可能是心肌細(xì)胞脂毒性損傷的機(jī)制之一，減輕心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有望延緩脂毒性心肌病的發(fā)生發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，與對照組比較，棕櫚酸組細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78、ATF4、CHOP mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著升高（P<0.01），p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例也顯著增大（P<0.01），凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12蛋白表達(dá)水平顯著升高（P<0.01）。不同濃度丹參酮ⅡA作用后，H9c2細(xì)胞的存活率升高，H9c2細(xì)胞的凋亡率降低，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平降低（均P<0.01）。加 入PERK通 路激 活劑CCT020312作 用后，與棕櫚酸組比較，棕櫚酸+CCT020312組的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例，細(xì)胞凋亡率，GRP78、ATF4、CHOP的mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著升高（P<0.05）；再經(jīng)過丹參酮ⅡA處理，與棕櫚酸+CCT020312組比較，棕櫚酸+CCT020312+丹參酮ⅡA組的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例，細(xì)胞凋亡率，GRP78、ATF4、CHOP的mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著回降（P<0.05）。提示丹參酮ⅡA通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路蛋白PERK和eIF2α的磷酸化下調(diào)了棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白CRP78、ATF4和CHOP的表達(dá)，起到抑制棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞凋亡的作用。結(jié)果表明，丹參酮ⅡA可修復(fù)棕櫚酸刺激的心肌細(xì)胞損傷，其作用機(jī)制與減輕棕櫚酸引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激性凋亡有關(guān)。

綜上所述，本課題體外研究結(jié)果證明了棕櫚酸能啟動(dòng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，激活PERK信號(hào)通路，誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，引起心肌細(xì)胞脂毒性損傷，而丹參酮ⅡA可阻斷該通路，抑制心肌細(xì)胞脂毒性損傷。本研究初步通過體外實(shí)驗(yàn)探討了丹參酮ⅡA抗心肌細(xì)胞脂毒性作用，為今后在體內(nèi)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)環(huán)境中研究丹參酮ⅡA對脂毒性心肌病的干預(yù)機(jī)制提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。