邁瑞B(yǎng)C6800-PLUS血液分析儀8倍光學(xué)模式在低值血小板計(jì)數(shù)檢測(cè)中的臨床應(yīng)用價(jià)值

郭浩翔，李濤，許穎（浙江省臺(tái)州醫(yī)院.檢驗(yàn)科，.心內(nèi)科，浙江臺(tái)州 371000）

低值血小板計(jì)數(shù)（PLT）是臨床疾病診斷的重要依據(jù)，也是血小板輸注的重要指標(biāo)。國(guó)外輸血指南推薦，預(yù)防性的血小板輸注閾值為10×109／L［1］；國(guó)內(nèi)輸血指南推薦，當(dāng)PLT在（10～50）×109時(shí)，需要根據(jù)臨床出血情況來(lái)輸注血小板，當(dāng)PLT低于5×109／L時(shí)，應(yīng)立即給予血小板輸注［2］。目前，全自動(dòng)血液分析儀的普及和應(yīng)用大大提高了PLT 檢測(cè)的效率，但仍存在一定的局限性。常用的電阻抗法受到大血小板、小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、血小板聚集等諸多因素的干擾，影響PLT。邁瑞B(yǎng)C6800-PLUS血液分析儀除用電阻抗通道和光學(xué)通道檢測(cè)PLT外，還裝載了其特有的8 倍倍增模式，即8 倍光學(xué)法，在檢測(cè)過(guò)程中，儀器將獲取較光學(xué)法模式下的8倍PLT統(tǒng)計(jì)量，來(lái)提高低值PLT 檢測(cè)的準(zhǔn)確性。本研究將對(duì)該模式進(jìn)行臨床應(yīng)用的評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑 邁瑞B(yǎng)C6800-PLUS血液分析儀、SC-120自動(dòng)血涂片制備儀（深圳邁瑞公司），BA53F顯微鏡（日本Olympus公司），XB-K-25 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板（上海安信光學(xué)儀器制造公司），按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第3版）》配制PLT稀釋液（草酸銨法稀釋液）［3］。

1.2 標(biāo)本來(lái)源與分組 收集本院2020 年1 月至2021 年1 月PLT≤50×109／L 的全血標(biāo)本共335例，其中男176 例，女159 例，年齡2～87 歲。335例標(biāo)本中，按濃度梯度挑選5例（經(jīng)鏡檢無(wú)干擾）檢測(cè)重復(fù)性，其余330例標(biāo)本根據(jù)有無(wú)血小板干擾分成無(wú)干擾組120 例，有干擾組210 例，其中有干擾組分成假性增高120例，假性減低90例。330例按PLT（×109／L）分為0～10、10～30、30～50組。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 儀器檢測(cè)法 335 例標(biāo)本用邁瑞B(yǎng)C6800-PLUS血細(xì)胞分析儀的電阻抗法、光學(xué)法、8 倍光學(xué)法檢測(cè)PLT，分別記為PLT-I、PLT-O、PLT-O8。

1.3.2 手工法 由2 名技術(shù)熟練的主管技師采用雙盲法嚴(yán)格按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第3版）》［3］手工計(jì)數(shù)PLT，取2次計(jì)數(shù)結(jié)果的平均值（2次誤差控制在5%以?xún)?nèi)），記為PLT-M。

1.3.3 染色鏡檢法 將335 例標(biāo)本用血涂片制備儀制成血涂片，高倍鏡下觀察血小板干擾情況，并用油鏡確認(rèn)，分類(lèi)并記錄，有紅細(xì)胞碎片和小紅細(xì)胞干擾的歸為假性增高組，有大血小板和血小板聚集干擾的歸為假性減低組。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 19.0 和Excel 2007 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。用Excel 2007 對(duì)儀器進(jìn)行重復(fù)性評(píng)價(jià)，用SPSS 19.0 對(duì)3 種儀器方法和手工法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行配對(duì)樣本的t檢驗(yàn)；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 重復(fù)性 結(jié)果見(jiàn)表1。比較5 例標(biāo)本PLT-I、PLT-O、PLT-O8 結(jié)果可見(jiàn)，PLT-O8 的CV和s均小于PLT-I、PLT-O的CV和s，說(shuō)明PLT-O8 的重復(fù)性結(jié)果最好，精密度高。

表1 5例低值PLT標(biāo)本重復(fù)性檢測(cè)結(jié)果

2.2 無(wú)干擾組3 種儀器方法與手工法比較 結(jié)果見(jiàn)表2。PLT-I、PLT-O、PLT-O8 分別與PLT-M 比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）；說(shuō)明PLT無(wú)干擾時(shí)，PLT-I、PLT-O、PLT-O8結(jié)果可靠。

表2 120例無(wú)干擾組3種儀器方法與手工法比較結(jié)果

2.3 假性增高組3 種儀器方法與手工法比較 結(jié)果見(jiàn)表3。120例假性增高標(biāo)本，經(jīng)鏡檢，有小紅細(xì)胞干擾者28 例，有紅細(xì)胞碎片干擾者43 例，上述干擾均存在者49 例。將PLT-I、PLT-O、PLT-O8 分別與PLT-M比較發(fā)現(xiàn)，PLT-I與PLT-M差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；當(dāng)PLT 在0～10×109／L 時(shí)，PLT-O與PLT-M 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而PLT-O8與PLT-M差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；表明PLT在0～10×109／L 且有紅細(xì)胞碎片和小紅細(xì)胞干擾時(shí)，PLT-O8準(zhǔn)確性更好。

表3 120例假性增高標(biāo)本3種儀器方法與手工法比較結(jié)果

2.4 假性減低組3 種儀器方法與手工法比較 結(jié)果見(jiàn)表4。90 例假性減低標(biāo)本中，經(jīng)鏡檢，血小板聚集者57 例，大血小板干擾者33 例。PLT-I、PLT-O、PLT-O8 分別與PLT-M 比較發(fā)現(xiàn)，PLT-I 與PLT-M 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），PLT-O、PLT-O8與PLT-M 比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；表明血小板在有大血小板和血小板聚集干擾時(shí)，PLT-O和PLT-O8可靠。

表4 90例假性減低組3種儀器方法與手工法比較結(jié)果

3 討論

隨著科技的進(jìn)步，市面上出現(xiàn)了很多型號(hào)的全自動(dòng)血液分析儀，PLT的檢測(cè)方法也由過(guò)去的電阻抗法發(fā)展到現(xiàn)在的光學(xué)法、熒光法等，大大提高了臨床實(shí)驗(yàn)室PLT 檢測(cè)的效率［4］。有研究報(bào)道，當(dāng)PLT＜80×109／L時(shí)，與電阻抗法和光學(xué)法相比，熒光法檢測(cè)PLT具有更好的精密度和準(zhǔn)確性［5］，但對(duì)于當(dāng)PLT低于10×109／L時(shí)抗干擾檢測(cè)的報(bào)道并不多見(jiàn)。本研究數(shù)據(jù)顯示，當(dāng)PLT＜10×109／L 且有紅細(xì)胞碎片或小紅細(xì)胞干擾時(shí)，邁瑞B(yǎng)C6800-PLUS 血液分析儀的8倍光學(xué)法準(zhǔn)確性和精密度較高，可應(yīng)用于臨床。

邁瑞B(yǎng)C6800-PLUS 血液分析儀的8 倍倍增模式是利用光學(xué)法原理，結(jié)合半導(dǎo)體激光和RNA 核酸熒光染色法，用前向散射光反映細(xì)胞大小，側(cè)向散射光的熒光強(qiáng)度反映細(xì)胞內(nèi)核酸物質(zhì)含量，在一定程度上檢測(cè)顆粒細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)和形態(tài)，分辨不同性質(zhì)的顆粒細(xì)胞，由于小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片等沒(méi)有RNA不會(huì)被熒光染色，因此有效地消除了小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片等帶來(lái)的干擾。此光學(xué)通道還利用了PLT解聚技術(shù)，在恒定的溫度和pH 下加入解聚劑，再通過(guò)速度達(dá)到1 400 r／min 的物理攪拌，有效地解離聚集的血小板，能基本解決由于EDTA抵抗造成的血小板聚集問(wèn)題。另外其8 倍倍增模式在以上原理基礎(chǔ)上獲取了對(duì)低值PLT 8 倍的粒子統(tǒng)計(jì)量，大大提高了低值PLT檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

臨床上，紅細(xì)胞碎片、白細(xì)胞碎片、小紅細(xì)胞是引起PLT假性增高常見(jiàn)的干擾成分［6］。有研究表明［7］，由于紅細(xì)胞和血小板是同一個(gè)計(jì)數(shù)通道，當(dāng)紅細(xì)胞體積＜70 fL 時(shí)，會(huì)對(duì)PLT 產(chǎn)生干擾，而本研究的假性增高組只統(tǒng)計(jì)了小紅細(xì)胞和紅細(xì)胞碎片兩項(xiàng)干擾因素，對(duì)于其他白細(xì)胞碎片、未成熟紅細(xì)胞的干擾因素尚未可知。當(dāng)外周血出現(xiàn)體積＜70 fL的真菌、有核紅細(xì)胞等干擾時(shí)，該模式是否適用需要作進(jìn)一步研究。大血小板、血小板聚集（以EDTA 抗凝劑依賴(lài)常見(jiàn)）［8］常引起臨床上的PLT假性減低。本研究數(shù)據(jù)顯示，假性減低組中的57例血小板聚集標(biāo)本有2 例標(biāo)本并不能利用光學(xué)通道有效解決也無(wú)法手工計(jì)數(shù)，這可能與EDTA誘發(fā)血小板膜蛋白與GPⅡb／Ⅲa抗體反應(yīng)，結(jié)合后的抗體Fc 端與單核細(xì)胞或者淋巴細(xì)胞膜上的Fc 受體牢固結(jié)合而產(chǎn)生的聚集現(xiàn)象有關(guān)，此時(shí)無(wú)法用光學(xué)法解聚血小板，而需要重新采集并用枸櫞酸鈉抗凝或者末梢血來(lái)糾正。另外，全血標(biāo)本若采集后立即檢測(cè)PLT也會(huì)假性減低，這可能與血小板的可逆性聚集有關(guān)，此時(shí)需要標(biāo)本靜置30 min 后重新檢測(cè)［9］。

綜上所述，當(dāng)PLT用電阻抗法檢測(cè)出現(xiàn)低值報(bào)警時(shí)，如血小板聚集報(bào)警、直方圖、散點(diǎn)圖等，應(yīng)該首先涂片復(fù)檢，以觀察到血小板的數(shù)量、大小、形態(tài)、有無(wú)聚集、聚集多少等。若鏡檢有血小板聚集、大血小板、紅細(xì)胞碎片、小紅細(xì)胞等干擾存在時(shí)，可選用光學(xué)法和8倍光學(xué)倍增模式檢測(cè)，若有紅細(xì)胞碎片和小紅細(xì)胞干擾存在且PLT＜10×109／L 時(shí)可選用8倍光學(xué)倍增模式。若遇到PLT其他干擾時(shí)，比如大塊血液凝固、白細(xì)胞碎片、真菌、有核紅細(xì)胞等，此時(shí)尚未有研究表明該8 倍光學(xué)模式可靠，這時(shí)還需要結(jié)合手工法和血涂片鏡檢法，才能保證PLT檢測(cè)的準(zhǔn)確和質(zhì)量，為臨床提供更可靠的檢驗(yàn)信息。