強(qiáng)直性脊柱炎患者抗核抗體檢測結(jié)果及臨床意義分析

陳水綿，游玉權(quán)，張紅鳳，饒華春，郭慶昕△，蔡美美

福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬泉州市正骨醫(yī)院：1.檢驗(yàn)科；2.強(qiáng)直性脊柱科，福建泉州 362000

強(qiáng)直性脊柱炎(AS)是一種以侵犯脊柱、骶髂關(guān)節(jié)為主要臨床表現(xiàn)，可同時合并全身多部位炎癥或異常的慢性進(jìn)展性疾病。自身抗體是診斷自身免疫性疾病(AID)的重要依據(jù)，抗核抗體是細(xì)胞內(nèi)所有核抗原成分的總稱，為AID的重要輔助診斷指標(biāo)?？购丝贵w存在多種熒光模型，不同熒光模型對應(yīng)不同的特異性抗體，如抗-SSA抗體、抗-SSB抗體、抗-雙鏈DNA(ds-DNA)抗體等，常見的特異性抗體大部分可通過抗核抗體譜檢測，這些抗體也可在AID臨床癥狀前數(shù)年被檢出[1]，是AID早期診斷必不可少的生物學(xué)指標(biāo)。本文回顧性分析AS患者血清中抗核抗體的檢測結(jié)果，探討抗核抗體檢測結(jié)果在AS患者中的臨床應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集本院2018—2019年明確診斷為AS的患者453例為研究對象，對抗核抗體檢測結(jié)果和臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計分析，其中合并其他AID的患者12例，包括合并類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)5例、干燥綜合征(SS)3例、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)2例、系統(tǒng)性硬化癥(SSc)1例、混合性結(jié)締組織病(MCTD)1例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合國際相關(guān)協(xié)會AS、RA、SLE、SS、SSc、MCTD診療指南推薦的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)排除合并乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病、梅毒患者；(3)排除銀屑病或腸道疾病患者。453例研究對象中男性344例(75.94%)，平均年齡(33±10)歲；女性109例(24.06%)，平均年齡(36±11)歲。

1.2儀器與試劑 Leica-DM2500熒光顯微鏡(德國恩斯特·徠茨公司)、EURO-Blot MasterⅡ全自動免疫印跡及配套的EURO-Lin Scan軟件掃描儀(德國歐蒙醫(yī)學(xué)診斷有限公司)、TDZ5-WS臺式低速離心機(jī)(湖南湘潭湘儀儀器有限公司)、420B電熱恒溫水浴箱(江蘇新康醫(yī)療器械有限公司)。血清抗核抗體IgG檢測試劑盒(德國歐蒙醫(yī)學(xué)診斷有限公司)，每個反應(yīng)區(qū)同時有靈長類肝組織切片和人喉癌上皮細(xì)胞?？购丝贵w譜IgG抗核抗體檢測試劑盒(德國歐蒙醫(yī)學(xué)診斷有限公司)。

1.3方法 采用間接免疫熒光法檢測抗核抗體，暗環(huán)境中用Leica-DM2500熒光顯微鏡鏡檢。結(jié)果判讀：抗體滴度<1∶100為陰性，抗體滴度≥1∶100為陽性，包括1∶100、1∶320、1∶1 000、1∶3 200、>1∶3 200，滴度≥1∶320的標(biāo)本平行稀釋到最終滴度，由本實(shí)驗(yàn)室內(nèi)有5年以上工作經(jīng)驗(yàn)的工作人員判讀，雙人復(fù)核。采用免疫印跡法檢測抗核抗體譜IgG，使用全自動免疫印跡儀進(jìn)行檢測，配套EURO-LinScan軟件進(jìn)行顯色結(jié)果灰度值掃描分析。結(jié)果判讀：灰度值<11為陰性，11～25為弱陽性，>25為陽性。

2 結(jié) 果

2.1不同性別AS患者抗核抗體分布特征 453例AS患者中抗核抗體陽性139例，陽性率為30.68%。將抗核抗體檢測結(jié)果分為陽性組(139例)和陰性組(314例)。陽性組男性92例、女性47例，平均年齡(35±11)歲；陰性組男性252例、女性62例，平均年齡(34±10)歲。12例AS合并其他AID患者中男性5例、女性7例，平均年齡(42±8)歲；抗核抗體陽性11例，陽性率為91.67%。女性患者抗核抗體陽性率(43.12%，47/109)顯著高于男性患者的抗核抗體陽性率(26.74%，92/344)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=10.44,P<0.01)。

2.2抗核抗體陽性的AS患者熒光核型分布 139例抗核抗體陽性的AS患者，各核型所占比例依次為顆粒型(45.32%，63/139)、均質(zhì)型(18.71%，26/139)、胞漿型(16.66%，23/139)、核仁型(8.63%，12/139)、混合型(6.47%，9/139)、其他核型(4.32%，6/139)。胞漿型以胞漿顆粒型為主(73.91%,17/23)；混合型以顆粒型混合胞漿顆粒型為主(44.44%，4/9)。各核型檢出率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=17.9,P<0.01)。

2.3抗核抗體陽性的AS患者核型滴度分布 抗核抗體陽性的AS患者整體滴度中位數(shù)為1∶100，各核型滴度中位數(shù)分別為顆粒型1∶100，均質(zhì)型1∶210，胞漿型1∶100，核仁型1∶100，混合型1∶100，其他核型1∶210。見圖1。

2.4不同性別中高滴度(≥1∶320)抗核抗體患者分析 將139例抗核抗體陽性的AS患者分成中高滴度組(≥1∶320)與低滴度組(1∶100)。中高滴度組36例，其中男性22例、女性14例；低滴度組103例，其中男性70例、女性33例；2組男女各自所占比例差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.56，P>0.05)?？购丝贵w中高滴度(≥1∶320)患者核型以均質(zhì)型為主(38.89%，14/36)；中高滴度組患者中13例進(jìn)行了抗核抗體譜檢測，其特異性抗體陽性率為30.77%(4/13)；4例抗核抗體譜陽性的特異性抗體分別為抗ds-DNA抗體(均質(zhì)型1∶1 000)?？购诵◇w抗體(胞漿顆粒型1∶1 000)、抗nRNP/Sm抗體、抗Ro-52抗體(胞漿纖維型1∶1 000)、抗組蛋白抗體(均質(zhì)型1∶1 000)。12例AS合并其他AID患者中，中高滴度患者6例，占50.00%，其中僅2例進(jìn)行了抗核抗體譜檢測，均檢出了特異性抗體。

2.5AS患者合并其他AID患者多因素Logistic回歸分析 以AS患者有無合并其他AID(賦值：無=0，有=1)為因變量，以性別(賦值：男=0，女=1)、年齡(賦值：<20歲=0,20～35歲=1,>35～45歲=2,>45歲=3)、抗核抗體結(jié)果(賦值：陰性=0，陽性=1)、滴度1∶100(賦值：其他=0,1∶100=1)、滴度1∶320(賦值：其他=0,1∶320=1)、滴度1∶1 000(賦值：其他=0,1∶1 000=1)為自變量進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，年齡越大、抗核抗體陽性為AS合并其他AID的危險因素(P<0.05)。見表1。

注：H表示均質(zhì)型；S表示顆粒型；C表示胞漿型；N表示核仁型；Mix表示混合型；Others表示核點(diǎn)型、中心粒型、著絲點(diǎn)型、致密顆粒型等其他核型。

表1 AS患者合并其他AID患者多因素Logistic回歸分析結(jié)果

3 討 論

AS發(fā)病機(jī)制的研究主要集中在免疫、遺傳、腸道感染等相關(guān)的領(lǐng)域。有研究通過交叉理論和分子模擬做動物模型試驗(yàn)，證實(shí)微生物感染腸道上皮細(xì)胞后數(shù)天可使機(jī)體產(chǎn)生自身抗體[2]。另外，已有研究利用宏基因組學(xué)的技術(shù)為腸道菌群異常在自身免疫性疾病中致病機(jī)制的研究提供了依據(jù)[3]。因此，抗核抗體在AS患者中有一定的陽性率，但結(jié)締組織病與AS是否有共同的發(fā)病基礎(chǔ)，目前研究尚無定論，而AS合并其他AID的相關(guān)文獻(xiàn)，國內(nèi)外鮮有報道[4-7]。

本研究結(jié)果顯示，AS患者抗核抗體陽性率為30.68%，與近年文獻(xiàn)報道較為一致[8-9]。男性患者(75.94%)所占比例遠(yuǎn)高于女性(24.06%)，但對抗核抗體陽性患者進(jìn)行分析，109例女性患者中抗核抗體陽性率(43.12%)卻顯著高于344例男性患者中的抗核抗體陽性率(26.74%)，可見盡管是以男性為主的研究人群中，抗核抗體陽性仍具有明顯的性別差異?？赡艿脑?yàn)榇萍に赝ㄟ^與B淋巴細(xì)胞的雌激素受體結(jié)合參與免疫調(diào)節(jié)，從而可能導(dǎo)致女性中自身抗體的產(chǎn)生與增加[9]。

本研究結(jié)果顯示，抗核抗體陽性患者不同核型檢出率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。核型以顆粒型(45.32%)為主，其他核型較為分散，主要原因?yàn)锳ID不同個體因致病機(jī)制的差異可出現(xiàn)不同的靶抗原及熒光核型。顆粒型特異性抗體以抗-SSA抗體、抗-SSB抗體、抗U1-RNP抗體為主，而抗-SSA抗體、抗-SSB抗體為SS的特異性抗體[10-12]。SS常伴隨其他AID，然而關(guān)于SS與AS并存的報道較少[13-14]。有文獻(xiàn)報道顯示，AS患者中，10%伴有SS，71.4%為抗核抗體陽性[14]。HELENIUS等[15]研究認(rèn)為，AS與SS可能存在相似的發(fā)病基礎(chǔ)。

抗核抗體陽性的AS患者核型滴度的分布以低滴度為主，抗核抗體滴度≥1∶320的AS患者占18.71%(36/139)。低滴度抗核抗體常見于健康人或老年人，但本文抗核抗體在AS中的陽性檢出率(30.68%)遠(yuǎn)高于以往研究中健康體檢者抗核抗體的陽性率12.8%[16]、9.86%[17]。本研究合并其他AID的AS患者有12例，主要合并RA，這可能與本院風(fēng)濕病患者中以RA為主有關(guān)。

對AS合并其他AID患者進(jìn)行多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，年齡越大、抗核抗體陽性為AS并發(fā)其他AID的高危因素。年齡越大，細(xì)胞凋亡更頻繁，而細(xì)胞凋亡中降解表達(dá)在細(xì)胞表面的蛋白通常為抗核抗體譜的靶細(xì)胞，因此，隨著年齡的增長，患AID的風(fēng)險越大。本研究也在一定的局限性，對滴度的多因素Logistic回歸分析只顯示1∶100為其危險因素，1∶320與1∶1 000卻沒有呈現(xiàn)，分析原因?yàn)椋?1)本研究AS合并其他AID的患者病例數(shù)不足，滴度、核型數(shù)據(jù)離散，仍需要設(shè)計合理的大樣本研究并進(jìn)行長期隨訪來論證；(2)確診患者并非首診患者，可能受治療過程中藥物等混雜因素影響。劉倩等[18]通過總結(jié)國內(nèi)外文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，AS合并其他AID，兩者癥狀的出現(xiàn)時間相隔大多在5年以上,因此，隨著疾病發(fā)展，年齡越大，抗核抗體陽性的AS患者應(yīng)警惕并發(fā)其他AID。

綜上所述，臨床工作中AS患者可通過臨床表現(xiàn)及抗核抗體檢查結(jié)果，加強(qiáng)其臨床分類管理。對抗核抗體陽性的中老年人應(yīng)長期進(jìn)行醫(yī)學(xué)隨訪，注意詳問病史、查體，深入評估是否并發(fā)其他AID。檢出中高滴度抗核抗體患者，建議進(jìn)一步做抗核抗體譜的特異性靶抗原確認(rèn)或其他相關(guān)輔助檢查。當(dāng)臨床高度疑似合并其他AID，不論抗核抗體檢測結(jié)果如何，都需要對特異性抗體進(jìn)行檢測，有利于AS患者合并其他AID的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。