張家界莓茶害蟲(chóng)
——斜紋夜蛾

王逸才，袁思琦，洪艷云，鄧武成，胡維軍，李春萍，陳建芝，易圖永

（1. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128；2. 張家界莓茶發(fā)展服務(wù)中心，湖南 張家界 427000；3. 衡陽(yáng)市農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法支隊(duì)，湖南 衡陽(yáng) 421000）

茅巖莓茶（moyeam）又稱藤茶、土家甘露茶，學(xué)名為顯齒蛇葡萄（Ampelopsis grossedentata），屬葡萄科蛇葡萄屬的藤本植物[1]，為藥食兩用植物，具有疏風(fēng)解毒、祛瘀消腫、止血止痛等功效[2]，民間常采其幼嫩葉片制作成茶品，治療感冒發(fā)燒、口腔潰瘍、慢性咽炎、外傷等[3]。顯齒蛇葡萄中主要次生代謝物以黃酮類化合物為主，含量高達(dá)45.52%[4]，對(duì)神經(jīng)保護(hù)、抗心肌缺血、降壓、改善學(xué)習(xí)記憶、抗胃潰瘍、保護(hù)生殖組織、抗炎、抗腫瘤以及降血糖等都有良好的作用[5]。據(jù)《永定鄉(xiāng)土志》史冊(cè)中記載，茅巖莓茶至今已有700 a以上歷史，是張家界土家族、苗族常用藥之一[6]。由于莓茶具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值，張家界市已將發(fā)展莓茶產(chǎn)業(yè)作為精準(zhǔn)扶貧、鄉(xiāng)村振興的重要舉措，并已進(jìn)行規(guī)模種植。隨著人工栽培面積的逐漸擴(kuò)大，莓茶病蟲(chóng)害已成為阻礙莓茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要因素。筆者于2020年7月在張家界永定區(qū)三家館鄉(xiāng)茅巖莓茶種植基地發(fā)現(xiàn)了一種類似夜蛾科的害蟲(chóng)，其初孵幼蟲(chóng)聚集在莓茶葉背取食危害，高齡幼蟲(chóng)直接取食葉片，形成孔洞、刻缺等。通過(guò)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法鑒定其為斜紋夜蛾（Spodoptera litura）。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

張家界市永定區(qū)三家館鄉(xiāng)莓茶種植基地受害蟲(chóng)危害的茅巖莓茶植株及其害蟲(chóng)，2020年7月采集害蟲(chóng)制作成的標(biāo)本（現(xiàn)保存于湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 形態(tài)特征觀察在田間對(duì)危害癥狀和生長(zhǎng)發(fā)育進(jìn)行初步觀察。室內(nèi)使用體視顯微鏡（Nikon SMZ745T）進(jìn)行仔細(xì)觀察，并拍照記錄形態(tài)特征。

1.2.2 分子生物學(xué)鑒定使用CTAB法[7]提取昆蟲(chóng)DNA，以提取的總DNA為模板，用擴(kuò)增線粒體基因的通用引物[8]COI-F：5'-GGTCAACAAATCATAAAGATA TTG-3'，COI-R：5'-TA- AACTTCAGGGTGACCAAAAAA T-3'，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系為25 μL：模板DNA 1 μL，上下游引物各0.4 μL，Taq PCR Super Mix 12.5 μL，dd H2O補(bǔ)至25 μL。PCR擴(kuò)增程序：94℃預(yù)變性3 min；94℃變性30 s，50℃退火30 s，72℃延伸1 min，33個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10 min，4℃保存。

PCR產(chǎn)物在1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，將目的片段送北京擎科生物科技有限公司進(jìn)行COI序列測(cè)定。測(cè)序結(jié)果在NCBI上進(jìn)行BLAST比對(duì)，并從NCBI上下載相近物種序列，最后利用MEGA X構(gòu)建鄰接樹(shù)（Neighbour-joining tree：NJ tree）[9]。

2 結(jié)果與分析

2.1 害蟲(chóng)田間危害癥狀與室內(nèi)飼養(yǎng)觀察

2020年7月30日在茅巖莓茶田間發(fā)現(xiàn)的被害葉片癥狀如圖1所示，被取食危害的葉片呈灰褐色并伴有害蟲(chóng)排泄物，其上有不規(guī)則“窗口”形咬痕，背面取食部位留有少許濕滑液體，幼蟲(chóng)卵塊為黃白色。

圖1 茅巖莓茶的害蟲(chóng)危害癥狀

將發(fā)現(xiàn)的害蟲(chóng)帶回室內(nèi)飼養(yǎng)觀察，害蟲(chóng)于8月17日化蛹，8月28日成蝶（見(jiàn)圖2），根據(jù)其形態(tài)特征初步判斷該蟲(chóng)為夜蛾科害蟲(chóng)。

圖2 害蟲(chóng)室內(nèi)飼養(yǎng)的生長(zhǎng)發(fā)育情況

2.2 害蟲(chóng)形態(tài)特征

使用體視解剖鏡觀察害蟲(chóng)的形態(tài)特征如圖3所示。幼蟲(chóng)蟲(chóng)體黃褐色，12體節(jié)，體長(zhǎng)約46 mm；頭部光滑、淺褐色，有明顯蛻裂線呈倒“Y”型；背部可見(jiàn)背中線和四條對(duì)稱的亞背線；胸部3節(jié)，3對(duì)胸足，胸足棕黃色，其跗節(jié)末端有爪；腹部8節(jié)，4對(duì)腹足（位于第3～6腹節(jié)）和1對(duì)臀足（位于第8腹節(jié)），腹足淺黃色；中胸至腹節(jié)在亞背線內(nèi)側(cè)各有黑色斑2對(duì)。成蟲(chóng)體長(zhǎng)約13 mm，翅展約29 mm，體色暗褐色或灰白色，胸部背面有白色叢毛，前翅灰褐色，花紋較多；后翅白色半透明，無(wú)斑紋；觸角為絲狀，復(fù)眼發(fā)達(dá)，黑色。

圖3 害蟲(chóng)的形態(tài)特征圖

2.3 COI序列測(cè)定結(jié)果

對(duì)害蟲(chóng)DNA使用COI-F/COI-R引物擴(kuò)增，凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果得到大小約700 bp的片段。通過(guò)測(cè)序得到核苷酸序列為685 bp，將序列與GenBank中相關(guān)DNA序列進(jìn)行BLAST比對(duì)，結(jié)果表明害蟲(chóng)DNA與Spodoptera litura序列的一致性達(dá)到99%，選取NCBI BLAST同源性較高的昆蟲(chóng)DNA序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)（見(jiàn)圖4），發(fā)現(xiàn)該害蟲(chóng)與Spodoptera litura聚集在同一分支上。根據(jù)上述結(jié)果結(jié)合害蟲(chóng)的形態(tài)學(xué)特征，初步確定該害蟲(chóng)為斜紋夜蛾。

圖4 基于COI基因的29種近緣種的NJ分子系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)

3 結(jié)論與討論

經(jīng)形態(tài)特征和分子生物學(xué)鑒定，得出了危害張家界市永定區(qū)三家館鄉(xiāng)茅巖莓茶的害蟲(chóng)為斜紋夜蛾（Spodoptera litura）。斜紋夜蛾是一種季節(jié)性長(zhǎng)距離遷移的害蟲(chóng)，也是一種雜食性和暴食性，產(chǎn)卵量大、繁殖能力強(qiáng)，活動(dòng)隱蔽、不易被發(fā)現(xiàn)的世界性害蟲(chóng)[10]。斜紋夜蛾喜高溫少雨，在夏旱的7～8月高溫少雨氣候條件下，很容易在茶樹(shù)上爆發(fā)[11-12]。筆者在調(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn)，茅巖莓茶田間斜紋夜蛾的發(fā)生與危害在8月較為嚴(yán)重，臨近9月時(shí)其發(fā)生和危害有所下降，可見(jiàn)斜紋夜蛾對(duì)茅巖莓茶的發(fā)生與危害與當(dāng)?shù)氐母邷靥鞖庥嘘P(guān)。但斜紋夜蛾在茅巖莓茶田間的具體危害特性、發(fā)生及分布、生活史等還有待進(jìn)一步調(diào)查研究。