馬思怡 謝林惠 劉濤 李虹志 袁小紅

摘 要：文章建立高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定藏紅花藥材中有效成分含量，并與伊朗進(jìn)口的藏紅花中西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ的含量進(jìn)行對(duì)比。文章以九寨溝藏紅花為研究對(duì)象;采用反向色譜柱Eclipse XDB-C18（4.6×250mm 5μm）檢測(cè);流動(dòng)相：乙腈-水（25：75）;流速：1.0mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)：440nm;柱溫：40℃。藏紅花樣品總苷含量分別為18.1%、19.1%、20.7%，伊朗樣品藏紅花總苷含量為16.0%。九寨溝藏紅花質(zhì)量水平高于伊朗藏紅花有效成分含量，均滿足總苷含量>10%的規(guī)定。

關(guān)鍵詞：藏紅花;有效成分;九寨溝;含量測(cè)定;高效液相色譜

中圖分類號(hào)：R927.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-1064（2021）05-003-02

DOI：10.12310/j.issn.1674-1064.2021.05.002

藏紅花（Crocus sativus L.），又稱西紅花或番紅花，為鳶尾科番紅花屬植物，是一種名貴中藥，其具有活血化瘀、涼血解毒、清肝明目等效用[1]。藏紅花最早由希臘人種植，后來通過印度、尼泊爾等地區(qū)進(jìn)口，再通過西藏銷往全國(guó)各地[2]。藏紅花通過球莖進(jìn)行無性繁殖，以三根柱頭入藥，具有降血脂[3]、抗腫瘤[4-5]、免疫調(diào)節(jié)[6]、防止骨質(zhì)疏松[7]、抑制糖尿病[8]、抗氧化、抗炎[9-10]、保護(hù)視神經(jīng)與視網(wǎng)膜等作用[11]。近年來，藏紅花在上海、浙江、西藏等地均被引種栽培[12]，因土質(zhì)、氣候等差異，各地藏紅花質(zhì)量差異較大，本研究主要是對(duì)九寨溝的3個(gè)藏紅花樣品有效成分含量進(jìn)行測(cè)定，并與伊朗藏紅花作比較，以考察九寨溝藏紅花藥材的質(zhì)量，可供有關(guān)研究參考。

1 儀器與材料

Agilent 1260高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司）、G1315D DAD紫外可見檢測(cè)器、G1311C四元梯度混合泵、DT230柱溫箱;EclipseXDB-C18（4.6×250mm 5μm）色譜柱;SB25-12DNT超聲波清洗器（寧波新芝生物科技股份有限公司）;BSA223S電子天平（千分之一賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

西紅花苷-Ⅰ對(duì)照品（批號(hào)MUST-19071510，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.07%）、西紅花苷-Ⅱ?qū)φ掌罚ㄅ?hào)MUST-19102910，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98.28%）（成都曼思特生物科技有限公司）;乙腈為色譜純（賽默飛世爾科技有限公司）;超純水;供試樣品分別為伊朗藏紅花樣品、九寨溝藏紅花樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Eclipse XDB-C18（4.6×250mm 5μm）;流動(dòng)相：乙腈-水（25：75）;流速：1.0mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)為：440nm;柱溫：40℃;進(jìn)樣量：10μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱定西紅花苷-Ⅰ、西紅花苷-Ⅱ?qū)φ掌愤m量，加稀乙醇（取乙醇529mL，加水至1 000mL）分別制成濃度為30μg/mL和12μg/mL的溶液即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

干燥樣品，取適量于研缽中研細(xì)，過50目篩，精密稱取10mg樣品粉末于50mL棕色容量瓶中，加適量稀乙醇溶解，置冰浴中超聲處理20min，放至室溫，定容至刻度，搖勻，經(jīng)微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液即得。

2.3 線性關(guān)系考察

精密吸取西紅花苷-Ⅰ對(duì)照品溶液（200μg/mL）0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，西紅花苷-Ⅱ?qū)φ掌啡芤海?00μg/mL）0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，置10mL量瓶中，加稀乙醇定容至刻度，搖勻，在“2.1”色譜條件下，進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ的回歸方程分別為：Y=84.109x-128.410（r=0.9936，n=6），Y=42.221x+13.111（r=0.9971，n=6），結(jié)果表明西紅花苷-Ⅰ在0～50.00μg/mL，西紅花苷-Ⅱ在0～20.00μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.4 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱定已知含量的藏紅花樣品5份各10mg。分別精密加入西紅花苷-Ⅰ、西紅花苷-Ⅱ?qū)φ掌啡芤海?00μg/mL）4.5mL、2.2mL。依法測(cè)定，計(jì)算西紅花苷-Ⅰ平均回收率為100.16%，RSD為1.87%;西紅花苷-Ⅱ平均回收率為100.78%，RSD為1.95%，結(jié)果如表1所示。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取九寨溝2020年1號(hào)供試品溶液10μL，參照“2.1”色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得西紅花苷-Ⅰ、西紅花苷-Ⅱ峰面積的RSD%（n=5）分別為1.70和0.73，表示儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取九寨溝2020年1號(hào)供試品溶液10μL注入高效液相色譜儀，分別在0、12、24、36、48h進(jìn)樣，測(cè)其西紅花苷-Ⅰ、西紅花苷-Ⅱ峰面積，計(jì)算得西紅花苷-Ⅰ峰面積RSD%（n=5）=1.94、西紅花苷-Ⅱ峰面積RSD%（n=5）=1.64。結(jié)果表明供試品溶液在48h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

精密稱取6份2020年3號(hào)樣品各10mg，按“2.2.2”供試品溶液制備方法進(jìn)行操作，精密吸取10μL注入高效液相色譜中進(jìn)行測(cè)定，測(cè)其西紅花苷-Ⅰ、西紅花苷-Ⅱ峰面積，計(jì)算得西紅花苷-I峰面積RSD%（n=6）=1.98、西紅花苷-Ⅱ峰面積RSD%（n=6）=1.53，結(jié)果表明重現(xiàn)性良好。

2.8 樣品含量測(cè)定

表2 不同樣品藏紅花中西紅花苷含量比較

分別精密吸取伊朗、九寨溝藏紅花供試品溶液10μL，將其注入高效液相色譜儀進(jìn)行含量測(cè)定。采用外標(biāo)法對(duì)西紅花苷-Ⅰ、西紅花苷-Ⅱ及總苷含量進(jìn)行計(jì)算。結(jié)果顯示，九寨溝藏紅花有效成分含量較高，三個(gè)樣品西紅花苷總含量分別為18.1%、19.1%、20.7%，且有效成分含量均高于伊朗進(jìn)口藏紅花有效成分含量，結(jié)果如表2所示。

3 結(jié)語

研究結(jié)果表明，九寨溝藏紅花樣品均滿足總苷>10%的藥典規(guī)定，其中2020年3號(hào)樣品總苷含量最高，為20.7%;2020年1號(hào)樣品總苷含量最低，為18.1%。此外，九寨溝藏紅花有效成分含量均高于伊朗進(jìn)口藏紅花。九寨溝藏紅花具有較好的質(zhì)量品質(zhì)，表明九寨溝培育基地已經(jīng)具備了較好的藏紅花種植技術(shù)手段，這對(duì)于國(guó)內(nèi)藏紅花引種具有借鑒意義，且為藥用領(lǐng)域提供了優(yōu)質(zhì)資源。

參考文獻(xiàn)

[1] 次仁，尼瑪次仁.藏藥藏紅花組方功效研究[J].中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2016，22（1）：48-49.

[2] 程超寰.百草名媛番紅花[J].家庭中醫(yī)藥，2019，26（6）：8-11.

[3] 王素蓮，黃偉，熊玉卿，等.藏紅花降血脂作用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)，2015（12）：1218-1220.

[4] 劉輝輝，毛碧增.藏紅花藥理作用及組織培養(yǎng)研究進(jìn)展[J].藥物生物技術(shù)，2014，21（6）：593-596.

[5] 藍(lán)天，何俊玲，徐海濱.藏紅花素抗腫瘤的研究進(jìn)展[J].浙江臨床醫(yī)學(xué)，2017，19（7）：1372-1373.

[6] 宗春燕.藏紅花有效成分藥理作用研究進(jìn)展[J].山東工業(yè)技術(shù)，2017（16）：252.

[7] 張娜，李林森.藏紅花藥理作用研究進(jìn)展[J].藥物評(píng)價(jià)研究，2013，36（5）：394-396.

[8] 王立哲，王振賢，馬曉偉.藏紅花素對(duì)糖尿病所致睪丸組織損傷保護(hù)作用的研究[J].天津中醫(yī)藥，2019，36（5）：491-494.

[9] 李姚，王健.藏紅花素抑制過氧化氫誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞凋亡[J].中國(guó)中醫(yī)眼科，2019，29（5）：347-350.

[10] 張曉巖，蘆殿香.藏紅花活性成分對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)疾病的作用[J].中國(guó)高原醫(yī)學(xué)與生物學(xué)，2020，41（1）：67-72.

[11] SepahiSamaneh，MohajeriSeyedAhmad，HosseiniSeyedehMaryam，et al.Effects of Crocinon Diabetic Maculopathy：A Placebo-Controlled Randomized Clinical Trial[J].American journal of ophthalmology，2018，190：89-98.

[12] 李珅，胡紹玲，汪文成，等.藏紅花資源及栽培技術(shù)研究概況[J].青海農(nóng)林科技，2017（3）：38-41.