一例鴨坦布蘇病毒與大腸桿菌混合感染的診斷

唐華麗 馮小露 黃俊霖 江婷 林曉梅 王粲 楊飛燕 韋天超*

1.廣西大學動物科學技術(shù)學院 530005

2.廣西柳州市柳北區(qū)動物疫病預防控制中心 545001

鴨坦布蘇病毒（Duck Tembusu virus，DTMUV）病自2010年在我國中東部開始暴發(fā)以來，對我國的水禽養(yǎng)殖造成了巨大的經(jīng)濟損失。DTMUV 可引起產(chǎn)蛋鴨產(chǎn)蛋量下降，一些病情較重的感染鴨預后不良且死亡率較高。發(fā)病肉鴨表現(xiàn)排黃綠色稀糞，精神沉郁，嚴重的可出現(xiàn)共濟失調(diào)，繼而全身器官衰竭死亡。該病流行范圍廣，且感染宿主不僅僅局限于鴨，多數(shù)禽類都可感染該病毒。致病性大腸桿菌可通過多種水平傳播及垂直傳播途徑進行傳播，發(fā)病率和死亡率較高；若與其它病原混合感染，則會加重病情。

2019年11 月底，廣西大學養(yǎng)禽與禽病研究所接診了廣西南寧市某養(yǎng)殖公司五個鴨場的疑似為鴨黃病毒、鴨呼腸孤病毒和大腸桿菌混合感染的病例，現(xiàn)詳細報告如下。

1 發(fā)病情況及臨床癥狀

來自南寧市某養(yǎng)殖公司的送檢病鴨共24 只，詳情見表1。

表1 送檢病鴨日齡和數(shù)量表

五個發(fā)病鴨場飼養(yǎng)的均為櫻桃谷肉鴨。發(fā)病期間出現(xiàn)排白綠色稀糞、發(fā)熱、同時伴有神經(jīng)癥狀，食欲減退，短時間內(nèi)出現(xiàn)一定數(shù)量的死亡。發(fā)病的五個鴨場先后免疫過鴨細小病毒和病毒性肝炎抗體、黃病毒凍干苗、新流腺油苗以及鴨傳染性漿膜炎油苗和禽流感疫苗。發(fā)病后使用過氟苯尼考、復方磺胺嘧啶、沙拉沙星和慶大霉素治療，但均不見好轉(zhuǎn)。

2 剖檢病變

剖檢24 只發(fā)病鴨均見肝、脾腫大、心包積液、腎臟花斑樣等特征性病變。第四、五群病鴨有明顯的腦出血現(xiàn)象。其他器官無明顯病變。

根據(jù)流行病學特征、臨床癥狀及剖檢病變，初步懷疑為鴨坦布蘇病毒、呼腸孤病毒和大腸桿菌感染，確診需結(jié)合實驗室診斷。

3 實驗室檢查

3.1 細菌學檢查經(jīng)無菌操作，采取送檢病鴨的肝臟做細菌培養(yǎng)，接種于麥康凱、鮮血瓊脂培養(yǎng)基，置于37℃溫箱培養(yǎng)。培養(yǎng)48h 后，麥康凱培養(yǎng)基上可見紅色菌落；鮮血瓊脂培養(yǎng)基上可見圓形凸起，光滑半透明的灰白色菌落。

3.2 RT-PCR 檢測根據(jù)文獻合成擴增DTMUV 基因的特異性引物。采集送檢病死鴨的脾臟等組織，按常規(guī)方法制成勻漿后，12000r/min 離心5min，取上清。用Trizol 法抽提病毒的總RNA。再利用HiFiScript cDNA Syntheisis Kit試劑盒（北京天根公司）進行反轉(zhuǎn)錄，以cDNA 為模板進行PCR 擴增。PCR產(chǎn)物用2%瓊脂糖電泳進行檢測。另外用本實驗室建立的番鴨呼腸孤病毒病的診斷方法檢測上述病料組織的核酸模板。

結(jié)果表明，用鴨坦布蘇病毒特異性的引物可擴增到1 條大小約為358bp的特異性目的條帶（圖1），而未擴增到番鴨呼腸孤病毒的特異性目的條帶，說明病死鴨感染了鴨坦布蘇病毒。

圖1 臨床樣品DTMUV 及番鴨呼腸孤病毒的PCR 檢測結(jié)果

3.3 藥敏試驗無菌采取各組細菌純培養(yǎng)物200μL 置于TSA 平板上，用玻璃棒將其涂勻，然后用鑷子將阿莫西林等17 種藥物紙片貼在瓊脂上，置于37℃培養(yǎng) 24h，觀察到該菌對阿莫西林、氨芐西林、甲氧嘧啶、磺胺異噁唑等耐藥；對鏈霉素低敏；對頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢他定、慶大霉素、丁胺卡那等極敏。具體結(jié)果如表2。

表2 細菌分離物藥敏試驗結(jié)果（單位：mm）

4 診斷與防治

4.1 診斷根據(jù)送檢鴨臨床癥狀及細菌學和病毒分子生物學檢測結(jié)果，病鴨最后診斷為DTMUV 和大腸桿菌混合感染。

4.2 防控首先應加強衛(wèi)生消毒等生物安全措施，尤其是病死鴨的無害化處理。發(fā)病鴨群首先采取適當?shù)闹С中灾委煟陲嬎刑砑臃暇S生素和葡萄糖，以增強抵抗力。結(jié)合鴨群的具體情況，給予敏感抗生素，防治細菌混合感染。此外，用弱毒疫苗接種健康鴨，可使鴨群獲得免疫力，從而使發(fā)病鴨群得到控制。

5 結(jié)語

鴨群發(fā)病可能與養(yǎng)殖環(huán)境差，疫苗保護效果欠佳有關(guān)。送檢的五個不同鴨場同時發(fā)病，可能是其五個鴨場相隔不遠，疫病易通過各種途徑傳播。另外五個鴨場同屬一家公司，故在平時飼養(yǎng)、管理不足方面都較為一致。而且廣西南寧夏季時間長，蚊蟲較多，即使是十一月份氣候溫度仍較高，因此給作為蟲媒病毒的DTMUV 提供了有利的傳播條件。

DTMUV 可感染多個品種的產(chǎn)蛋鴨。此外，產(chǎn)蛋雞、鵝也曾有過發(fā)病的報道。鴨群在感染坦布蘇病毒后機體免疫力下降，易感染大腸桿菌，DTMUV和大腸桿菌混合感染將造成嚴重的經(jīng)濟損失。鴨坦布蘇病毒主要是破壞鴨生殖系統(tǒng)，所以種鴨場和蛋鴨場應以預防為主，開產(chǎn)前應免疫鴨坦布蘇病毒病活疫苗，由于該病是由蟲媒傳播病毒，因此做好生物安全防疫措施是必要的。此外，應該重視提升鴨群的免疫力和抵抗力，重視鴨場的環(huán)境衛(wèi)生和通風條件。