何世芳,桑維鈞,曹毅,孫光軍,潘忠梅,陸寧,陳興江
摘? 要:為明確貴州煙草彎孢菌葉斑病病原菌種類及生物學(xué)特性,分別采用組織分離法和離體葉片接種法對其病原菌進(jìn)行分離和致病性測定,使用形態(tài)特征結(jié)合分子生物學(xué)方法對病原菌進(jìn)行分類鑒定,并對其生物學(xué)特性進(jìn)行研究。結(jié)果表明,該病原菌在以ITS序列構(gòu)建的發(fā)育樹中與棒狀彎孢(Curvularia clavata)聚為一支,且支持率為100%,結(jié)合形態(tài)特征將其鑒定為棒狀彎孢。生物學(xué)特性研究表明,病原菌菌絲生長最適溫度為28 ℃,最適pH為8,在燕麥瓊脂(OA)培養(yǎng)基上生長最快,以可溶性淀粉為碳源、牛肉浸粉為氮源時(shí)對菌絲生長最有利;菌絲致死溫度為53 ℃,10 min,光照對菌絲生長無顯著影響。研究結(jié)果可為煙草彎孢菌葉斑病防治提供理論依據(jù)。
關(guān)鍵詞:煙草;葉斑病;棒狀彎孢;病原菌鑒定;生物學(xué)特性
Identification and Biological Characterization of Curvularia clavata Causing the Tobacco Leaf Spot Disease
HE Shifang1,2, SANG Weijun1*, CAO Yi2*, SUN Guangjun3, PAN Zhongmei1,2, LU Ning2, CHEN Xingjiang2
(1. College of Tobacco, Guizhou University, Guiyang 550025, China; 2. Guizhou Academy of Tobacco Science, Guiyang 550081, China; 3. Tobacco Department Guizhou Branch of China Tobacco Corporation, Guiyang 550025, China)
Abstract: To clarify the pathogen causing leaf spots of tobacco in Guizhou Province and its biological characteristics, the pathogen was obtained by using the method of tissue isolation. Its pathogenicity was tested in vitro with inoculated leaves, and the pathogen was classified and identified with morphological characteristics combined with molecular biological methods. The biological characteristics of the pathogen were also studied. The results showed that the pathogen clustered with Curvularia clavata in the phylogenetic tree based on ITS sequence, and the support rate was 100%. Combined with the morphological characteristics, the pathogen was identified as Curvularia clavata. The study of biological characteristics showed that the optimum temperature for mycelium growth was 28 ℃, the optimum pH was 8, the fastest growth was on oat agar (OA), and it was most favorable for mycelium growth when soluble starch was used as carbon source and beef powder as nitrogen source, and the lethal temperature of mycelium was 53 ℃ and 10 min. The light had no significant effect on mycelial growth of Curvularia clavata. The results can provide a theoretical basis for the control of tobacco Curvularia leaf spot.
Keywords: tobacco; leaf spot disease; Curvularia clavata; pathogen identification; biological characteristics
煙草是我國重要的經(jīng)濟(jì)作物[1]。近年來,由于煙草種植制度改變、氣候條件變化、種植品種單一和煙田連作比例較高等原因,導(dǎo)致烤煙病害呈明顯上升趨勢。貴州是我國第二大煙區(qū),常年種植面積達(dá)12余萬公頃,在烤煙生長中后期葉斑類病害在部分煙區(qū)發(fā)生偏重,嚴(yán)重影響煙葉生產(chǎn)[2],病害防治形勢日益嚴(yán)峻。
彎孢屬真菌是一類重要的植物病原菌,其種類繁多[3-4],可危害玉米、燕麥、水稻、甘蔗和小麥等多種禾本科植物 [5-10],引起葉斑、種子變色和苗枯等癥狀[11]。20世紀(jì)60年代印度北部首次報(bào)道了煙草彎孢葉斑病,我國于90年代首次在廣西壯族自治區(qū)發(fā)現(xiàn)由Curvularia verruculose Tandou et Bilgrami引起的煙草彎孢菌葉斑病[12],1997年陳瑞泰等[13]在廣西發(fā)現(xiàn)煙草彎孢菌葉斑病,鑒定其病原菌為Curvularia trifolii Boed,為偶發(fā)病害;2016年CHEN等[14]在貴州遵義植煙區(qū)發(fā)現(xiàn)了由Curvularia trifolii引起的煙草葉斑病,重發(fā)地塊發(fā)病率高達(dá)30%。
2020年本課題組在對貴州主產(chǎn)煙區(qū)煙草葉斑類病害調(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn)類似癥狀病葉,通過鏡檢初步判斷病原菌為彎孢菌,現(xiàn)有研究關(guān)于該病害的報(bào)道主要集中在癥狀描述和病原菌鑒定[12-14],目前尚無生物學(xué)特性研究的報(bào)道。為掌握該病害病原菌種類及發(fā)生特征,本研究對病原菌進(jìn)行分離及致病性測定,采用形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)方法進(jìn)行病原菌鑒定,進(jìn)一步對其生物學(xué)特性進(jìn)行研究,以期為煙草彎孢菌葉斑病防治提供理論支撐。
1? 材料與方法
1.1? 材料
病害樣本:采集自貴州省遵義市煙區(qū),烤煙K326具有褐色壞死病斑、外圍具有明顯黃色暈圈的病葉。
致病性測試品種為K326,按常規(guī)方法育苗,盆栽管理至15葉期進(jìn)行測試。本研究供試培養(yǎng)基見表1。
1.2? 方法
1.2.1? 病原菌分離純化及形態(tài)學(xué)鑒定? 采用組織分離法對病害標(biāo)本進(jìn)行分離[15],獲得的純化菌株接種至PDA培養(yǎng)基,25 ℃培養(yǎng)7 d后進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定[16]。
1.2.2? 病原菌致病性測定? 選取盆栽管理的健康K326葉片,采用離體葉片刺傷和無傷接種法進(jìn)行致病性測試,并通過科赫式法則驗(yàn)證病原菌[17],選取其中一株致病性較強(qiáng)的菌株進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)(菌株編號(hào):YC1106)。
1.2.3? 病原菌分子生物學(xué)鑒定? 采用試劑盒 DNeasy UltraClean Microbial Kit,(Qiagen)并參照說明書方法提取病原菌DNA,使用引物(上海捷瑞生物工程有限公司)ITS4(5′-TCCTCCGCTTATTG ATATGC-3′)/ITS5(5′-GGAAGTAAAAGTCGTA ACA GG-3′)擴(kuò)增菌株的ITS基因,反應(yīng)體系和擴(kuò)增條件參照趙洪海等[18]的方法進(jìn)行。PCR產(chǎn)物送至生工生物工程(上海)有限公司進(jìn)行測序,序列通過NBCI數(shù)據(jù)庫進(jìn)行Blast分析,提交至GenBank獲取登錄號(hào),依據(jù)比對結(jié)果下載相關(guān)模式菌株核酸序列[19](表2),使用MAFF(http://mafft.cbrc.jp/ alignment/server/)和TrimAI (V.1.3)分別進(jìn)行序列比對和剪切[20],使用MEGA X軟件的鄰接法(Neighbor-joining,Bootstrap value=1000)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。
1.3? 病原菌生物學(xué)特性測定
1.3.1? 培養(yǎng)基類型對菌株YC1106生長的影響? 使用滅菌打孔器(直徑6 mm)在菌落邊緣打取菌餅,接種至12種不同培養(yǎng)基上[21](表1),每個(gè)培養(yǎng)基3個(gè)重復(fù),于25 ℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)5 d后觀察菌落生長情況,使用十字交叉法測量菌落直徑。下同。
1.3.2? 碳、氮源對菌株YC1106生長的影響? 參照高晉等[22]的方法,以Czapek Dox Agar為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,用等量的葡萄糖、乳糖、甘露醇、麥芽糖、果糖、山梨糖醇和可溶性淀粉代替蔗糖;同理,用等量的蛋白胨、硝酸鈉、牛肉粉、氯化銨,尿素,甘氨酸、丙氨酸和酵母粉代替硝酸鈉,制備不同碳氮源平板。在含有不同碳氮源平板中央接種菌餅,并于25 ℃恒溫下培養(yǎng)。
1.3.3? 溫度對菌株YC1106生長的影響? 將直徑為6 mm菌餅接種于PDA平板上,分別置于5、10、
15、20、25、28、30、35 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
1.3.4? pH對菌株YC1106生長的影響? 以PDA為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,使用HCl和NaOH溶液將培養(yǎng)基pH調(diào)節(jié)為8個(gè)不同梯度(4、5、6、7、8、9、10和11),將菌株接至平板中央,于25 ℃恒溫培養(yǎng)。
1.3.5? 光照對菌株YC1106生長的影響? 將菌株接種于平板中心,在連續(xù)黑暗、連續(xù)光照和光暗交替3種條件下25 ℃恒溫培養(yǎng)。
1.3.6? 菌絲體致死溫度的測定? 參照王靜等[23]的方法,設(shè)置45 ℃為基礎(chǔ)溫度,5 ℃為一個(gè)梯度,65 ℃為最大溫度進(jìn)行測定。
1.4? 數(shù)據(jù)分析
采用Excel 2010和SPSS 18.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
2? 結(jié)? 果
2.1? 癥狀描述
病害發(fā)生于烤煙成熟期(圖1),主要危害葉片,發(fā)病初期為淡黃色圓形斑點(diǎn),后發(fā)展為圓形至橢圓形褐色病斑,邊緣伴有明顯黃色暈圈;病害發(fā)生嚴(yán)重時(shí)病斑逐漸擴(kuò)大或聯(lián)合后呈近圓形或不規(guī)則形。
2.2? 病原菌致病性測定
菌株接種5 d后葉片開始出現(xiàn)病斑,病斑呈深褐色,外緣伴有明顯黃色暈圈;癥狀與原病害樣本癥狀相同,于發(fā)病處重新分離到原接種的菌株,證明為致病菌。煙葉在無傷及刺傷接種條件下均能發(fā)病,表明其致病性較強(qiáng)。
2.3? 病原菌培養(yǎng)性狀及形態(tài)特征
菌株于PDA培養(yǎng)基25 ℃培養(yǎng)5 d后,菌落直徑24.67 mm,菌落顏色淺棕色、不規(guī)則,氣生菌絲不發(fā)達(dá),絨絮狀,邊緣灰白色(圖2A),培養(yǎng)基背面有色素產(chǎn)生(圖2B)。分生孢子梗圓柱狀(圖2C),棕色或深棕色,有分隔,直立或略彎,頂部屈膝狀彎曲;分子孢子多為頂側(cè)生,棒狀,大小為21.3~
33.5 μm×9.0~15.0 μm,中部顏色略深,兩邊顏色逐漸變淺,具2~3個(gè)橫隔膜,中間1~2個(gè)細(xì)胞膨大(圖2D)。依據(jù)形態(tài)特征,將病原菌初步鑒定為棒狀彎孢。
2.4? 病原菌分子生物學(xué)鑒定
應(yīng)用引物ITS4/ITS5進(jìn)行PCR擴(kuò)增后,獲得大小584 bp的基因片段(GenBank No. MW543062),經(jīng)Blast比對,菌株YC1106與棒狀彎孢Curvularia clavata同源性高達(dá)100%,進(jìn)一步通過系統(tǒng)發(fā)育分析,該菌與Curvularia clavata(NCBI登錄號(hào): MN623415)的遺傳距離最近,聚于同一分支(圖3),且支持率為100%,結(jié)合形態(tài)特征及分子生物學(xué)鑒定結(jié)果將煙草彎孢菌葉斑病致病菌鑒定為棒狀彎孢菌。
2.5? 病原菌生物學(xué)特性
2.5.1? 培養(yǎng)基類型對菌株YC1106生長的影響? 從圖4可以看出,病原菌YC1106可在12種不同的培養(yǎng)基上生長,菌落狀態(tài)以O(shè)A培養(yǎng)基上的狀態(tài)最佳,菌落直徑也最大,菌落直徑雖在高氏1號(hào)合成瓊脂、TA和CA上與OA間差異不顯著,但菌株在這3種培養(yǎng)基上氣生菌絲更稀疏,由此判斷OA為最佳培養(yǎng)基。病原菌在WA上的生長狀態(tài)最差,菌絲尤為稀疏,不適宜病原菌生長。
2.5.2? 碳氮源對菌株YC1106生長的影響? 如圖5-6所示,菌株YC1106在所供試的8種碳、源中均能生長,在供試碳源中,病原菌對可溶性淀粉的利用效果最佳,培養(yǎng)5 d菌落直徑為52.33 mm;而對葡萄糖的利用效果最差,菌落直徑為16.5 mm。在氮源利用中,最適氮源為牛肉浸粉,菌落直徑為52.33 mm;尿素作為氮源時(shí)菌落直徑最小且菌絲尤為稀疏,不利于病原菌生長。
2.5.3? 溫度對菌株YC1106生長的影響? 如圖7所示,病原菌生長溫度較廣,在10~35 ℃范圍內(nèi)均可生長,在5 ℃時(shí)幾乎不生長,在28 ℃菌落直徑達(dá)到最大,培養(yǎng)5 d平均菌落直徑為47.17 mm;在10~28 ℃范圍內(nèi),菌落生長直徑隨著溫度的升高而增大,并且氣生菌絲更發(fā)達(dá),培養(yǎng)基背面顏色更深。
2.5.4? pH對菌株YC1106生長的影響? 圖8顯示,病原菌對酸堿環(huán)境的適應(yīng)范圍較寬,在pH 4~11內(nèi)均能生長,當(dāng)pH為8時(shí)最適宜菌絲生長,培養(yǎng)5 d菌落直徑為50.83 mm。
2.5.5? 光照對菌株YC1106生長的影響? 如圖9所示,光照處理對病原菌的生長無顯著影響,連續(xù)光照時(shí)菌絲生長平均菌落直徑最大,培養(yǎng)5 d后菌落直徑為39 mm。
2.5.6? 致死溫度的測定? 在以45 ℃為基礎(chǔ)溫度,5 ℃為梯度進(jìn)行測定,55 ℃水浴10 min后,培養(yǎng)基上未見菌落;再以51 ℃為基礎(chǔ)溫度、1 ℃為梯度,53 ℃水浴10 min后培養(yǎng)基上未見菌絲生長,因此,推斷菌株YC1106菌絲的致死溫度為53 ℃水浴10 min。
3? 討? 論
棒狀彎孢菌隸屬半知菌亞門、絲孢綱、絲孢目、暗色孢科、彎孢屬(Curvularia)[16],據(jù)報(bào)道,該菌寄主范圍較廣,可侵染溫郁金、麻風(fēng)樹、菠蘿、和玉米等[24-26]多種作物,除引起植物病害外,該屬真菌還可引起皮膚暗色絲孢霉病[27]。近年來,由該屬真菌侵染植物引發(fā)的病害不斷被報(bào)道[28-30],在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上應(yīng)引起重視。本文通過形態(tài)學(xué)結(jié)合分子生物學(xué)方法,將病原菌鑒定為棒狀彎孢(Curvularia clavata),采集到的病葉癥狀與已有報(bào)道類似[12-14],但其形態(tài)特征及分子生物學(xué)鑒定結(jié)果不同,說明該屬真菌可能有多個(gè)種能侵染煙草發(fā)病。
病原菌的生物學(xué)特性是病害早期診斷、預(yù)測與防治的基礎(chǔ),對進(jìn)一步探明病害發(fā)生規(guī)律具有重要意義。本文研究結(jié)果表明,Curvularia clavata 菌絲在10~35 ℃范圍內(nèi)均能生長,最適生長溫度為28 ℃,致死溫度為53 ℃,研究結(jié)果與陳旭玉等[31]報(bào)道的最適溫度基本相符。病原菌生長隨著溫度升高,培養(yǎng)基內(nèi)顏色更深,高溫有利于其色素產(chǎn)生,這與劉飛等[32]的研究結(jié)果一致。貴州遵義具有夏季高溫多雨的氣候條件,適宜該病菌的生長,在生產(chǎn)上應(yīng)加強(qiáng)水肥管理和田間管理抑制棒狀彎孢菌的發(fā)生,防止該病害的蔓延。病原菌對酸堿環(huán)境適應(yīng)范圍較廣,在pH 4~11內(nèi)均能生長,在pH=8時(shí)最適宜菌絲生長,表明弱堿性條件有利于菌絲生長。該菌能利用多種碳源和氮源,最適碳源為可溶性淀粉,最適氮源為牛肉浸粉,以尿素作為氮源時(shí),抑制菌絲的生長,研究結(jié)果與引起其他植物病害的同種病原最適氮源為牛肉浸粉相一致[31],而與最佳碳源為葡萄糖存在差異[33],導(dǎo)致差異的原因可能與寄主、地理來源和生態(tài)適應(yīng)性有關(guān)。
鑒于棒狀彎孢菌亦可侵染玉米,本研究對合理指導(dǎo)玉米與烤煙輪作、間作具有重要意義。目前煙草彎孢菌葉斑病研究不夠深入,今后應(yīng)對該病害抗性種質(zhì)資源、發(fā)生流行規(guī)律、防治藥劑等做進(jìn)一步研究,為該病害綠色防控技術(shù)和方法提供理論和技術(shù)支撐。
4? 結(jié)? 論
本研究通過形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法,將分離獲得的煙草彎孢菌葉斑病病原菌鑒定為棒狀彎孢(Curvularia clavata)。研究結(jié)果表明,該病原菌致死溫度為53 ℃,該病害是一種高溫型病害,與田間病情調(diào)查結(jié)果吻合;弱堿性條件有利于菌絲生長,能利用多種氮源和碳源,最適碳源為可溶性淀粉,最適氮源為牛肉浸粉,光照對菌絲生長影響不顯著。該菌致病力較強(qiáng),無傷口亦可侵染。
參考文獻(xiàn)
[1] 馬云飛,許靈杰,李德侖,等. 貴州烤煙與主要糧蔬作物的生產(chǎn)效率比較[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué),2020,48(7):18-22.
MA Y F, XU L J, LI D L, et al. Comparison of production efficiency between Flue-Cured Tobacco and main Grain & Vegetable crops in Guizhou[J]. Guizhou Agricultural Sciences, 2020, 48(7): 18-22.
[2] 陳慶園,商勝華,陸寧. 貴州烤煙葉部主要病害危害損失調(diào)查與分析[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(9):95-98.
CHEN Q Y, SHANG S H, LU N. Analysis on loss caused by main leaf diseases of flue-cured tobacco in Guizhou[J]. Guizhou Agricultural Sciences, 2009, 37(9): 95-98.
[3] 張猛,張?zhí)煊? 中國彎孢屬的分類研究II(英文)[J]. 菌物學(xué)報(bào),2005(4):3-6.
ZHANG M, ZHANG T Y. Taxonomic studies of Curvularia(Hyphomycetes)from China II (English)[J]. Mycosystema, 2005(4): 3-6.
[4] ZHANG M, ZHANG T Y. Taxonomic studies of Curvularia from China III. Two new species on Poaceae[J]. Mycotaxon, 2007, 99: 143-146.
[5] 張艷菊,趙珊,楊森,等. 黑龍江省玉米彎孢霉葉斑病病原鑒定[J]. 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2017,48(6):17-23.
ZHANG Y J, ZHAO S, YANG S, et al. Pathogen identification of Curvularia leaf spot of maize in Heilongjiang Province[J]. Journal of Northeast Agricultural University, 2017, 48(6): 17-23.
[6] 宋海超,史學(xué)群,肖敏,等. 海南水稻上一種新病害的病原鑒定及室內(nèi)藥劑毒力測定[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào),2009,30(9):1359-1363.
SONG H C, SHI X Q, XIAO M, et al. Pathogenic identification of a rice disease in Hainan and its laboratory test with fungicides[J]. Chinese Journal of Tropical Crops, 2009, 30(9): 1359-1363.
[7] 張笑宇,孫雪梅,周洪友,等. 燕麥葉斑病病原菌鑒定及其生物學(xué)特性[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào),2017,44(3):473-480.
ZHANG X Y, SUN X M, ZHOU H Y, et al. Identification and biological characteristics of leaf spot pathogen Drechslera avenacea in oat[J]. Journal of Plant Protection, 2017, 44(3): 473-480.
[8] 鄭肖蘭,趙爽,韓小雯,等. 海南省南繁區(qū)玉米鏈格孢葉斑病病原菌鑒定及其生物學(xué)特性[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2018,46(6):82-87.
ZHENG X L, ZHENG X K, ZHAO S, et al. Identification of the pathogen causing corn Curvularia leaf spot disease and Its biological characteristics in the South of Hainan[J]. Chinese Journal of Tropical Agriculture, 2019, 39(3): 44-50.
[9] 王新華,高金欣,高士剛,等. 玉米新月彎孢葉斑病研究進(jìn)展[J]. 植物病理學(xué)報(bào),2019,49(4):433-444.
WANG X H, GAO J X, GAO S G, et al. Research progress on maize Curvularia leaf spot caused by Curvularia lunata[J]. Acta Phytopathologica Sinica, 2019, 49(4): 433-444.
[10] 徐輝,侯冕,檀根甲,等. 水稻彎孢葉斑病病原鑒定及其生物學(xué)特性[J]. 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2020,47(1):129-134.
XU H, HOU M, TAN G J, et al. Identification and characterization of causal organism of rice Curvularia leaf spot disease[J]. Journal of Anhui Agricultural University, 2020, 47(1): 129-134.
[11] MARIN-FELIX Y, HERNáNdez-RESTREPO M, CROUS P W. Multi-locus phylogeny of the genus Curvularia and description of ten new species[J]. Mycological Progress, 2020, 19(6): 559-588.
[12] 朱賢朝,王彥亭,王智發(fā). 中國煙草病害[M]. 北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2002.
ZHU X C, WANG Y T, WANG Z F. Chinese tobacco disease[M]. Beijing: China Agriculture Press, 2002.
[13] 陳瑞泰,朱賢朝,王智發(fā),等. 全國16個(gè)主產(chǎn)煙?。▍^(qū))煙草侵染性病害調(diào)研報(bào)告[J]. 中國煙草科學(xué),1997(4):3-9.
CHEN T R, ZHU X C, WANG Z F, et al. A report of investigating and studying tobacco infectious diseases of 16 main tobacco producing provinces (regions) in China[J]. Chinese Tobacco Science, 1997(4): 3-9.
[14] CHEN R, ZHANG J, CHENG J, et al. Leaf spot of Tobacco (Nicotiana tabacum L.) caused by Curvularia trifolii in Guizhou Province of China[J]. Plant Disease, 2017, 101(8): 8, 1549.
[15] 方中達(dá). 植病研究方法[M]. 3版. 北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1998.
FANG Z D. Plant disease research method[M]. 3rd edition. Beijing: China Agriculture Press, 1998.
[16] 鄧叔群. 中國的真菌[M]. 北京:科學(xué)出版社,1963.
DENG S Q. Chinese fungus[M]. Beijing: China Agriculture Press, 1963.
[17] ??≥V,盧寶慧,劉麗萍,等. 吉林省和黑龍江省煙草赤星病病原鑒定[J]. 中國煙草科學(xué),2019,40(5):52-59.
NIU J K, LU B H, LIU L P, et al. Identification of the pathogens causing tobacco brown spot disease in Jilin and Heilongjiang Provinces[J]. Chinese Tobacco Science, 2019, 40(5): 52-59.
[18] 趙洪海,岳清華,梁晨. 藍(lán)莓?dāng)M盤多毛孢枝枯病的病原菌[J]. 菌物學(xué)報(bào),2014,33(3):577-583.
ZHAO H H, XUE Q H, LIANG C, et al. The pathogen causing Pestalotiopsis twig dieback of blueberry[J]. Mycosystema, 2014, 33(3): 577-583.
[19] 冉雙飛. 西南地區(qū)主要蘭科植物病原真菌鑒定及系統(tǒng)學(xué)研究[D]. 貴陽:貴州大學(xué),2017.
RAN S F. The identification and phylogenetic analysesfor fungal pathogens of mainly Orchidaceae in southwest of China[D]. Guiyang: Guizhou University, 2017.
[20] CHEN Q, ZHANG K, ZHANG G Z, et al. A polyphasic approach to characterise two novel species of Phoma (Didymellaceae) from China[J]. Phytotaxa, 2015, 197(4): 267-281.
[21] 康迅,靳鵬飛,馮霞,等. 辣木枝枯病病原菌鑒定及其生物學(xué)特
性[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào),2017,44(3):481-487.
KANG X, JIN P, FENG X, et al. Identification and biological characteristics of the pathogen causing shoot blight of Moringa oleifera[J]. Journal of Plant Protection. 2017, 44(3): 481- 487.
[22] 高晉,劉思睿,趙致,等. 魚腥草褐斑病的病原及其生物學(xué)特性[J]. 菌物學(xué)報(bào),2020,39(7):1215-1225.
GAO J, LIU S R, ZHAO Z, et al. Identification and biological characteristics of pathogen of Houttuynia cordata brown leaf spot[J]. Mycosystema, 2020, 39(7): 1215-1225.
[23] 王靜,趙杰,錢玉梅,等. 山東煙草白絹病病原鑒定及室內(nèi)防治藥劑篩選[J]. 中國煙草科學(xué),2013,34(4):55-59.
WANG J, ZHAO J, QIAN Y M, et al. Identification and pharmaceutical screening on plate of Sclerotium rolfsii Sacc. causing southern blight on Tobacco[J]. Chinese Tobacco Science, 2013, 34(4): 55-59.
[24] MANDOKHOT A M, CHAUDHARY K C B. A new leaf spot of maize incited by Curvularia clavata[J]. Netherlands Journal of Plant Pathology, 1972, 78(2): 65-68.
[25] CHEN X Y, FENG J D, SUI Z, et al. First report of curvularia leaf blight on Curcuma wenyujin caused by Curvularia clavata in China [J]. Plant Disease, 2013, 97(1): 138-138.
[26] ZHONG L C, AI Y J, CHUN R H, et al. Identification of Curvularia clavata causing leaf spot on pineapple (Ananas comosus) in China[J]. Canadian Journal of Plant Pathology, 2016, 38(2): 250-253.
[27] FAN Y M, HUANG W M, LI S F, et al. Cutaneous phaeohyphomycosis of foot caused by Curvularia clavata[J]. Mycoses. 2010, 52(6): 544-546.
[28] HAQ I U, IJAZ S, FARAZ A, et al. First report of Curvularia leaf spot of Chamaedorea seifrizii caused by Curvularia lunata in Pakistan[J]. Journal of Plant Pathology. 2021, 103(2): 713.
[29] UL HAQ I, IJAZ S, FARAZ A, et al. First report of Curvularia lunata leaf spot on Trifolium alexandrinum in Pakistan[J]. Journal of Plant Pathology. 2021, 103(1): 373.
[30] LIU Z, LIU T, CHEN D, et al. First report of Curvularia lunata causing leaf spots on partridge tea [ Mallotus oblongifolius (Miq.) M?ll. Arg.] in China[J]. Journal of Plant Pathology, 2019, 101(2),439-439.
[31] 陳旭玉,魏建和,黃嫻,等. 溫郁金彎孢霉葉枯病病原菌(Curvularia clavate)生物學(xué)特性研究[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2014,27(4):1536-1538.
CHEN X Y, WEI J H, HUANG X, et al. Biological characteristics of Curvularia clavata for Curvularia leaf blight on Curcuma Wenyujin [J]. Southwest China Journal of Agricultural Sciences, 2014, 27(4): 1536-1538.
[32] 劉飛,伍曉麗,李富華,等. 四川省玉米彎孢葉斑病菌的種類及生物學(xué)特性研究[J]. 西南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2008(1):43-48.
LIU F, WU X L, LI F H, et al. Studies on the classification and biological character of the pathogen of Maize Curvularia leaf spot in Sichuan[J]. Journal of Southwest China Normal University (Natural Science Edition), 2008(1): 43-48.
[33] 李曉宇,石潔,董金皋. 幾種玉米彎孢霉葉斑病菌生物學(xué)特性的比較[J]. 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2002(3):61-64.
LI X Y, SHI J, DONG J G. The comparison on biological characteristics of four kinds of Curvularia species[J]. Journal of Hebei Agricultural University, 2002(3): 61-64.