應(yīng)用SE-μPADs法檢測庫爾勒市動(dòng)物源食品中沙門菌的效果評價(jià)

◎ 余佳敏，周 瑄，楊煥煥，吳麗麗，張余俊

（1.武漢尚碼生物科技有限公司，湖北 武漢 430000；2.湖北省阿克瑞德檢驗(yàn)檢測有限公司，湖北 武漢 430000；3.湖北中檢檢測有限公司，湖北 武漢 430000）

沙門菌廣泛分布在人與動(dòng)物的腸道中，屬革蘭陰性直桿菌，其菌型較為復(fù)雜，已成為人畜共患的病原菌，對豬沙門菌病、雞白痢、流產(chǎn)、副傷寒等疾病的發(fā)生與發(fā)展具有重要意義，受到臨床重點(diǎn)關(guān)注[1-2]。相關(guān)數(shù)據(jù)顯示[3]，由沙門菌引起的食源性疾病占全部動(dòng)物源疾病的首位，隨著沙門菌感染的患病率不斷升高，由此造成的食物中毒事件不斷增多?；诖?，臨床選擇快速有效且準(zhǔn)確的檢測方式，對沙門菌感染的預(yù)防和控制具有重要作用[4]。本文利用SE-μPADs法測定樣品中沙門菌情況，并對此展開試驗(yàn)，以快速檢測動(dòng)物性食品中沙門菌的污染。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

樣品：收集庫爾勒市羊肉22份、牛肉30份、雞蛋20份作為觀察對象。

材料：營養(yǎng)肉湯、四硫磺酸鈉煌綠增菌液、亞硫酸鉍培養(yǎng)基、木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂、營養(yǎng)瓊脂、沙門菌顯色培養(yǎng)基、蛋白胨緩沖液、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液、無水乙醇、SE-μPADs試紙和沙門菌菌株等。

儀器：恒溫培養(yǎng)箱、壓力蒸汽滅菌器、電子天平、電泳儀、多功能振蕩器和水平電泳槽。

1.2 方法

樣本處理：分別稱取5 g羊肉、牛肉、雞蛋，切碎（或打散）后放入營養(yǎng)肉湯內(nèi)，均勻搖晃3 min，添加蛋白胨緩沖液，密封后置于37 ℃培養(yǎng)箱，時(shí)間15 h。

沙門菌檢測：在處理后的樣本內(nèi)添加亞硒酸鹽胱氨酸及四硫磺酸鈉煌綠增菌液，放入培養(yǎng)箱中，18 h后接種于瓊脂培養(yǎng)基上。利用水煮法提取沙門菌培養(yǎng)基上的疑似菌株的菌落DNA，并實(shí)施PCR檢測，其中invA-F引物序列為GTGAAATTATCGCCACGTTCGGGCAA，invA-R引物序列為TCATCGCACCGTCAAAGGAACC，16S-F為AGAGTTTGATCCTGGCTCAG，16S-R為GGTTACCTTGTTACGACTT。invA基因PCR參數(shù)94 ℃、5 min，95 ℃、30 s，55 ℃、30 s，70 ℃、30 s，70 ℃、10 min，重復(fù)30次。陽性對照模板設(shè)置成沙門菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的DNA。

選擇樣本（1 mL）放入離心管內(nèi)，37 ℃條件下以180～200 r·min-1速度培養(yǎng)，5 h后將其置于SE-μPADs點(diǎn)樣區(qū)，再將其置于37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)90 min。各組選擇不添加菌液的蛋白胨緩沖液。在沙門菌底物區(qū)域加入固藍(lán)B鹽，顯色后檢查SE-μPADs顯色結(jié)果，試紙雙側(cè)顯色結(jié)果與陽性均為紫色即為陽性；而顯色區(qū)域與對照組均為粉色即為陰性。隨后對SE-μPADs區(qū)域進(jìn)行掃描，利用專用軟件測定試紙的灰度。顯色區(qū)域的灰度超出對照組即為檢出沙門菌；若灰度值低于對照組則未檢出。

1.3 觀察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)羊肉、牛肉以及雞蛋的SE-μPADs檢測結(jié)果，并對比SE-μPADs與國家標(biāo)準(zhǔn)方式的靈敏度與特異度，設(shè)定真陽性為a，假陰性為b，真陰性為c，假陽性為d，靈敏度=a/（a+b）×100%，特異度=c/（c+d）×100%[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

選取SPSS19.0系統(tǒng)計(jì)算數(shù)據(jù)，其中x—±s表達(dá)計(jì)量數(shù)據(jù)，選擇t檢查，而百分比表達(dá)計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)，選擇χ2檢查，兩組數(shù)據(jù)存在差異后選用P＜0.05表達(dá)。

2 結(jié)果與分析

2.1 SE-μPADs的檢測結(jié)果

經(jīng)SE-μPADs檢測，發(fā)現(xiàn)羊肉陽性率為13.64%，牛肉陽性率為13.33%，雞蛋陽性率為10.00%，見表1。

表1 SE-μPADs的檢測結(jié)果表

2.2 SE-μPADs的靈敏度與特異度

SE-μPADs的靈敏度為80.00%（4/5），特異度為100.00%（67/67）；國家標(biāo)準(zhǔn)方式的靈敏度為100.00%（4/4），特異度為98.53%（67/68），兩者相比無顯著差異（P＞0.05），見表2。

表2 SE-μPADs的靈敏度與特異度表

3 結(jié)論與討論

臨床針對沙門菌感染多選擇常規(guī)培養(yǎng)方式，其雖然取得過一定的應(yīng)用價(jià)值，但檢驗(yàn)時(shí)間通常為5 d左右，檢驗(yàn)時(shí)間較長，從而限制其在臨床的應(yīng)用，此外，復(fù)雜的生化反應(yīng)可提升常規(guī)培養(yǎng)的復(fù)雜程度，同時(shí)加重檢驗(yàn)部門的工作負(fù)擔(dān)與壓力，甚至延長產(chǎn)品轉(zhuǎn)運(yùn)及儲(chǔ)存時(shí)間，顯著增加檢驗(yàn)費(fèi)用[6]。

近年來，隨著檢驗(yàn)技術(shù)的完善發(fā)展，SE-μPADs檢測方式被提出，其在動(dòng)物性食品的檢測中效果顯著[7]。本次研究結(jié)果表明，SE-μPADs檢測的羊肉陽性率為13.64%，牛肉陽性率為13.33%，雞蛋陽性率為10.00%；SE-μPADs靈敏度為80.00%，特異度為100.00%；與國家標(biāo)準(zhǔn)方式相比無顯著差異（P＞0.05），證實(shí)SE-μPADs的靈敏度與特異度較高，可成為動(dòng)物源食物中檢出沙門菌的重要方式。

經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，沙門菌廣泛存在于環(huán)境中，尤其是庫爾勒市養(yǎng)殖場以及菜市場周邊土壤、水質(zhì)中較多見，極易使畜禽受到感染，而畜禽作為菜市場肉制品的主要來源，若未能夠積極控制其污染源，易導(dǎo)致污染傳播擴(kuò)散，因此，相關(guān)部門應(yīng)進(jìn)一步提高重視程度，加大對肉制品的監(jiān)管力度，以此避免或降低食物中毒的發(fā)生概率[8]。此外，SE-μPADs法通過試紙進(jìn)行檢查，可有效縮短檢驗(yàn)時(shí)長，試紙成本較低，存在費(fèi)用低廉的優(yōu)勢。且檢測期間無需利用熒光儀器，通過肉眼觀察試紙顏色，按照比色方式即可檢出食品中沙門菌[9]。由此看出，SE-μPADs法通過富集培養(yǎng)基，并抑制微生物生長的方式，顯著提升了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，并縮短檢測時(shí)間，避免假陽性出現(xiàn)，值得推廣。

綜上，SE-μPADs法測定動(dòng)物源食品中沙門菌的效果顯著，其靈敏度與特異度較高。