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      透骨草不同溶劑提取物對蚜蟲的殺蟲效果研究

      2021-11-22 02:00:40邢浩春魏娜李同慶葉嘉楊明建昝立峰李偉偉丁岐峰
      河北農(nóng)業(yè) 2021年10期
      關(guān)鍵詞:透骨草溶劑萃取正丁醇

      □文/邢浩春 魏娜 李同慶 葉嘉 楊明建 昝立峰 李偉偉 丁岐峰

      透骨草(Phryma leptostachya L.)是我國傳統(tǒng)中藥材,有鎮(zhèn)痛抗菌、抗過敏、抗搔癢等作用,且有一定毒性,據(jù)記載透骨草全株煎水去渣后噴灑菜青蟲、蛆等害蟲,殺蟲率可達100%。在我國分布廣泛,河北是產(chǎn)地之一(別名為藥曲草)。近年來,國內(nèi)外學者陸續(xù)研究了透骨草全株、根、地上部分提取物對家蠅、黏蟲、淡色庫蚊、菇蠅、黏蟲和小菜蛾幼蟲等的殺蟲活性,表明透骨草對上述害蟲均有明顯的殺蟲活性,但對豆蚜、無翅成蚜、蘋果黃蚜、白粉虱、葉螨沒有明顯效果。本實驗通過超聲波提取、萃取透骨草,得到的有效成分進行蚜蟲體外殺蟲活性測定,為透骨草在新型植物源農(nóng)藥研制方面提供參考依據(jù)。

      一、材料與方法

      1.實驗材料

      (1)植物:透骨草(Phryma leptostachya L.)干燥全草,購于藥店。

      (2)設(shè)備:電子天平、AS系列超聲波清洗機、粉碎機、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、循環(huán)水式多用真空泵、電熱恒溫鼓風干燥箱、冰箱、智能編程人工氣候箱。

      (3)試蟲:桃蚜(Myzus persicae S.)采于校園未噴灑農(nóng)藥的桃樹樹葉上,為自然種群。

      2.實驗方法

      (1)透骨草提取物的制備

      將全株透骨草干品打粉過60目篩。準確稱取透骨草干燥粉末與90%甲醇溶液混合冷漬1天,60℃條件下超聲波輔助提取,再抽濾,完成后收集濾液,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮成浸膏,干燥后收集稱重計算得率。放入4℃冰箱中保存。得到浸膏即為透骨草甲醇提取物。

      (2)三種溶劑對透骨草提取物的萃取

      將透骨草甲醇提取物浸膏加水溶解,加入等量石油醚溶液,超聲波輔助萃取,分離水相和石油醚相。繼續(xù)向水相中加入同等體積乙酸乙酯和正丁醇,進行萃取,分離得乙酸乙酯相和正丁醇相。分離后石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相分別用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮成浸膏,稱重計算得萃取率。

      (3)透骨草甲醇提取物不同溶劑萃取相對蚜蟲生物活性測定

      將得到的石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物,分別配成0.5毫克/毫升、1毫克/毫升、2毫克/毫升、4毫克/毫升濃度進行蚜蟲的觸殺活性測定,比較不同溶劑萃取物對蚜蟲的生物活性效果。載毒葉片法:選取大小相同、新鮮程度一樣的樹葉浸入藥液中,20秒后取出風干,對照組以丙酮溶液做相同處理。于培養(yǎng)皿底部墊上濕潤濾紙,待葉片上溶劑揮發(fā)后將葉片放入培養(yǎng)皿中,每個培養(yǎng)皿中接入20頭個體大小相同、健康活波的無翅蚜蟲,重復3次。放置于人工氣候箱中培養(yǎng)。24小時后觀察記錄中毒癥狀,計算死亡率與校正死亡率。

      二、結(jié)果討論

      1.甲醇對透骨草的提取率

      300克透骨草得到提取物37.38克,可知甲醇對透骨草有效成分的提取率為12.46%。

      2.三種有機溶劑對透骨草甲醇提取物的萃取率

      石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后得到萃取物質(zhì)量分別為0.93克、2.34克、3.84克,萃取率分別為0.31%、0.78%、1.28%。可以看出,乙酸乙酯和正丁醇比較適合透骨草提取物的進一步萃取純化。

      3.透骨草不同溶劑萃取物對蚜蟲的生物活性測定

      (1)三種溶劑萃取物對蚜蟲的毒殺效果

      結(jié)果表明:不同濃度3種萃取物對蚜蟲的毒殺活性有顯著差異(p<0.05)。4毫克/毫升石油醚萃取物對蚜蟲的校正死亡率顯著高于其它處理組;4毫克/毫升、2毫克/毫升、1毫克/毫升的乙酸乙酯萃取物對蚜蟲的校正死亡率均顯著高于0.5毫克/毫升組;4毫克/毫升、2毫克/毫升的正丁醇萃取物對蚜蟲校正死亡率顯著高于1毫克/毫升、0.5毫克/毫升處理組。說明高濃度的溶劑萃取物毒殺蚜蟲活性明顯高于低濃度組,乙酸乙酯萃取物毒殺活性總體最好,在濃度為4毫克/毫升時矯正死亡率達85.07%,其次是石油醚萃取物。

      (2)三種溶劑萃取物對蚜蟲毒殺作用的回歸分析

      通過對比不同濃度3種溶劑萃取物對蚜蟲的毒殺活性回歸方程及LC50分析,在相同處理時間內(nèi),不同提取物和萃取物處理濃度與毒殺蚜蟲的校正死亡率之間均呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系。乙酸乙酯萃取物的致死中濃度(LC50)值最低,說明其對蚜蟲的毒殺活性最強,其次是石油醚萃取物和正丁醇萃取物。因此從這個角度分析可以說明,對蚜蟲的毒殺活性依次為乙酸乙酯萃取物>石油醚萃取物>正丁醇萃取物。

      表1 三種溶劑萃取物對蚜蟲毒殺效果的方差分析和多重比較(S±M)

      表2 三種溶劑萃取物對蚜蟲的毒殺作用回歸方程及LC50

      三、結(jié)論

      本試驗測定了不同濃度提取物和萃取物對蚜蟲的毒殺效果。結(jié)果顯示,乙酸乙酯對透骨草有效殺蟲成分萃取效果較好。在4毫克/毫升濃度處理下,各組分萃取物均有明顯的毒殺活性效果,但乙酸乙酯的毒殺活性效果最強達到85.07%,且在處理濃度為0.5毫克/毫升、1毫克/毫升、2毫克/毫升時,乙酸乙酯的毒殺作用效果均比其它萃取物效果好。因此綜合不同溶劑對透骨草提取物的萃取率和對蚜蟲的毒殺效果,認為乙酸乙酯更適合作為透骨草提取物的萃取劑來防治蚜蟲。

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