歐陽依娜 王思宇 梁家充 薛 白 李衛(wèi)娟 李銀江 洪瓊花*

(1.云南省畜牧獸醫(yī)科學院，昆明 650224；2.四川農(nóng)業(yè)大學動物營養(yǎng)研究所，溫江 611130)

云南半細毛羊是在云南省昭通市當?shù)厣a(chǎn)條件下經(jīng)過長期選育而形成的毛肉兼用型半細毛羊新品種，是我國西南高原、高寒山區(qū)農(nóng)牧民脫貧致富的優(yōu)勢畜種[1]。磷是動物體內(nèi)僅次于鈣的含量最多的必需礦物元素，在機體骨骼發(fā)育、遺傳信息傳遞、能量代謝和酸堿平衡等方面發(fā)揮重要作用[2]。飼糧磷營養(yǎng)水平?jīng)Q定了空懷期母羊體況恢復、繁殖性能和其他養(yǎng)分的代謝利用，磷攝入過量則使母羊糞尿排磷量增加，造成環(huán)境污染和磷資源浪費[3-4]。ARC(1980)[5]給出了綿羊磷的維持需要量和凈生長需要量分別為0.014 g/(kg BW·d)和6.0 g/kg EBW(其中BW為體重，EBW為空腹體重，后同)；INRA[6]則推薦綿羊磷的生長需要量為5.5 g/kg BW。Bellof等[7]研究發(fā)現(xiàn)德國美利奴羔羊磷需要量則為7.5 g/kg EBW，高于ARC(1980)推薦值；De Almeida等[8]對Ideal×Ile de France羔羊和Santa Inê羊的測定結果顯示，其磷的生長需要量分別為4.14～4.54 g/kg BW和4.91～5.39 g/kg BW，明顯低于ARC(1980)推薦值。國內(nèi)研究學者Ji等[9]研究證明20～35 kg杜泊×小尾寒羊F1代公羔羊磷的維持需要量和生長需要量分別為0.025 g/(kg EBW·d)和5.27～5.83 g/kg EBW；張浩等[10]則發(fā)現(xiàn)20～35 kg杜湖F1代母羔羊磷的凈維持需要量和凈生長需要量分別為0.012 g/(kg EBW·d)和5.71～6.12 g/kg EBWG(其中EBWG為空腹體增重)，揭示出我國地方品種雜交羔羊對磷需要量與國外推薦量存在差異。因此，根據(jù)不同綿羊品種及其所處生理階段和特定生態(tài)環(huán)境進行磷需要量的研究對于我國羊產(chǎn)業(yè)持續(xù)健康發(fā)展更具指導意義。近年來，國內(nèi)外研究者已對綿羊和山羊磷需要量開展了一系列研究，但有關空懷期母綿羊磷需要量的研究卻未見報道。本試驗旨在研究飼糧磷水平對空懷期云南半細毛羊母羊生長性能、磷消化代謝和血清生化指標的影響，確定飼糧磷的適宜添加水平，以期提高飼糧磷的利用率，減少磷排泄，為制定云南半細毛羊飼養(yǎng)標準提供基礎數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設計

試驗選擇50只體況良好、體重 [(44.85±3.62)kg]相近、年齡一致的經(jīng)產(chǎn)2胎空懷期云南半細毛羊，按體重分層隨機分為5組，每組10只，每只羊為1個重復，分別飼喂磷水平為0.19%、0.32%、0.45%、0.56%和0.64%的試驗飼糧，飼糧其他營養(yǎng)水平保持一致。試驗飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗期共44 d，包括14 d的預試期和30 d的正試期。

表1 試驗飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) %

1.2 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗在云南省昆明易興恒畜牧科技有限公司進行。試驗前對欄舍進行打掃和嚴格消毒。試驗羊采用單欄飼養(yǎng)，進入羊舍后進行藥物驅蟲處理，每天08:00和17:00各飼喂1次，按先粗料后精料進行飼喂，5 d后稱重分組，隨后進入14 d預試期。在預試期，熟悉試驗羊飼養(yǎng)管理流程，觀察母羊健康狀況，記錄各組試驗羊的采食量，根據(jù)前1天的采食量調(diào)整第2天飼喂量，確保飼槽內(nèi)有10%左右的剩料。預試期結束后進入正試期，正試期飼養(yǎng)管理流程同預試期。

1.3 消化代謝試驗

在正試期第9天從各組中選取體重相近的5只健康母羊放入單獨的消化代謝籠中進行3 d預飼，正試期第12～16天采用全糞尿收集法進行為期5 d的消化代謝試驗，每天記錄每只羊的排糞量和排尿量。每天收集的鮮糞樣混勻稱重后按質(zhì)量的20%取樣，平均分成2份，其中一份按5%的比例加入10%稀鹽酸固氮，用于測定粗蛋白質(zhì)含量；另一份按3%的比例加入10%甲醛溶液殺滅微生物，用于測定其他養(yǎng)分的含量。每天收集的尿樣經(jīng)8層紗布過濾稱重后按體積的10%取樣，加入10%稀鹽酸使pH低于3.0固氮。每天采集各組200 g混合精料、200 g粗料和剩料樣本。全部樣品均于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 測定指標及方法

1.4.1 生長性能

正試期開始后，每天準確記錄每只羊的采食量及剩料量，計算整個正試期各組試驗羊的干物質(zhì)采食量(DMI)。在正試期開始和結束當天對試驗羊進行空腹稱重，并依據(jù)稱重結果計算各組試驗羊的平均凈增重(ANG)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.4.2 飼糧、糞和尿中常規(guī)養(yǎng)分含量

飼糧、糞樣測定初水分后經(jīng)65 ℃烘干48 h，回潮24 h，利用粉碎機粉碎過60目篩后用于養(yǎng)分含量測定，尿樣經(jīng)濕法消解后用于養(yǎng)分含量測定。粗灰分、粗脂肪、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維、鈣、磷等含量參照《飼料分析及飼料質(zhì)量檢測技術》[11]測定；粗蛋白質(zhì)含量采用KT200 KjeltecTM凱氏定氮儀(FOSS，丹麥)測定。

1.4.3 血清生化指標

分別在正試期結束前3天，每組隨機挑選5只試驗羊在清晨空腹頸靜脈采血10 mL，室溫下自然凝固20 min后，3 000 r/min離心15 min，收集上清并將其分裝于1.5 mL離心管中，-80 ℃保存?zhèn)溆谩２捎妹嘎?lián)免疫吸附試驗(ELISA)法測定母羊血清中甲狀旁腺激素(PTH)、降鈣素(CT)、骨鈣素(BGP)、羥脯胺酸(HYP)和瘦素(LEP)含量及堿性磷酸酶(ALP)活性，由北京華英生物技術研究所完成。采用上海尤尼柯UV-2600紫外可見分光光度計測定血清中鈣、磷的含量，鈣和磷試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.5 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2013進行初步統(tǒng)計后用SPSS 23.0軟件中ANOVA程序進行單因素方差分析，用Duncan氏法進行多重比較，結果以“平均值±標準差”表示，當P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結果與分析

2.1 飼糧磷水平對空懷期云南半細毛羊生長性能的影響

由表2可知，空懷期云南半細毛羊初始體重(IBW)和結束體重(FBW)在不同磷水平組間差異不顯著(P>0.05)；0.19%磷水平組平均凈增重和平均日增重極顯著高于0.45%和0.64%磷水平組(P<0.01)，0.32%磷水平組平均凈增重和平均日增重顯著高于0.45%和0.64%磷水平組(P<0.05)，而0.19%、0.32%和0.56%磷水平組間以及0.45%、0.56%和0.64%磷水平組間差異不顯著(P>0.05)；0.19%磷水平組干物質(zhì)采食量最高，顯著高于0.45%、0.56%和0.64%磷水平組(P<0.05)，0.32%磷水平組次之，顯著高于0.56%和0.64%磷水平組(P<0.05)；料重比以0.19%和0.32%磷水平組較低，顯著低于0.45%和0.64%磷水平組(P<0.05)，而與0.56%磷水平組差異不顯著(P>0.05)。

表2 飼糧磷水平對空懷期云南半細毛羊生長性能的影響Table 2 Effects of dietary P level on growth performance of Yunnan semi-fine wool sheep during non-pregnancy

2.2 飼糧磷水平對空懷期云南半細毛羊磷消化代謝的影響

由表3可知，空懷期母羊進食磷、糞磷和排泄磷皆隨著飼糧磷水平的提高而極顯著提高(P<0.01)；0.64%、0.56%、0.45%和0.32%磷水平組尿磷極顯著高于0.19%磷水平組(P<0.01)，0.64%磷水平組顯著高于0.45%磷水平組(P<0.05)，而0.64%、0.56%和0.32%磷水平組間差異不顯著(P>0.05)；0.64%、0.56%和0.45%磷水平組可消化磷和沉積磷極顯著高于0.19%和0.32%磷水平組(P<0.01)，而0.64%、0.56%和0.45%磷水平組間差異極顯著(P<0.01)，0.19%和0.32%磷水平組間差異不顯著(P>0.05)；0.64%磷水平組磷表觀消化率極顯著高于0.32%和0.45%磷水平組(P<0.01)，顯著高于0.19%磷水平組(P<0.05)，而與0.56%磷水平組差異不顯著(P>0.05)；0.64%磷水平組磷利用率極顯著高于0.32%和0.45%磷水平組(P<0.01)，與0.19%和0.56%磷水平組差異不顯著(P>0.05)。

表3 飼糧磷水平對空懷期云南半細毛羊磷消化代謝的影響Table 3 Effects of dietary P level on P digestion and metabolism of Yunnan semi-fine wool sheep during non-pregnancy

2.3 飼糧磷水平對空懷期云南半細毛羊血清生化指標的影響

由表4可知，0.45%磷水平組血清CT含量顯著高于0.19%和0.56%磷水平組(P<0.05)，極顯著高于0.64%磷水平組(P<0.01)，而與0.32%磷水平組差異不顯著(P>0.05)；0.56%和0.64%磷水平組血清ALP活性顯著高于0.19%、0.32%和0.45%磷水平組(P<0.05)；0.32%磷水平組血清HYP含量顯著高于0.45%和0.56%磷水平組(P<0.05)，而0.19%、0.32%和0.64%磷水平組差異不顯著(P>0.05)；0.45%磷水平組血清LEP含量顯著高于0.19%和0.64%磷水平組(P<0.05)，而與0.32%、0.45%和0.56%磷水平組差異不顯著(P>0.05)；0.56%磷水平組血清磷含量顯著高于0.45%磷水平組(P<0.05)，極顯著高于0.19%和0.32%磷水平組(P<0.01)，而與0.64%磷水平組差異不顯著(P>0.05)；血清PTH、BGP和鈣含量在不同磷水平組間無顯著差異(P>0.05)。

表4 飼糧磷水平對空懷期云南半細毛羊血清生化指標的影響Table 4 Effects of dietary P level on serum biochemical indexes of Yunnan semi-fine wool sheep during non-pregnancy

2.4 空懷期云南半細毛羊磷的需要量

由表5可知，空懷期云南半細毛羊進食磷(x)與沉積磷(y3)的回歸方程為y3=0.309 1x-0.025 4(R2=0.893 4)，進食磷與沉積磷呈線性相關，可用于空懷期云南半細毛羊磷需要量的預測。

表5 空懷期云南半細毛羊磷消化代謝指標[y,g/(kg W0.75·d)]與進食磷[x,g/(kg W0.75·d)]的線性回歸關系Table 5 Linear relationship between P digestion and metabolism indexes [y,g/(kg W0.75·d)] and P intake [x,g/(kg W0.75·d)] of Yunnan semi-fine wool sheep during non-pregnancy

3 討 論

3.1 飼糧磷水平對空懷期云南半細毛羊生長性能的影響

反芻動物的生長性能是反映其生長狀況的重要指標之一。袁浩容等[12]報道了歐拉型后備母羊分別飼喂0.23%、0.27%、0.48%和0.70%磷水平飼糧，其總采食量、日增重和料重比無顯著變化；司丙文等[13]報道了烏珠穆沁斷奶羔羊的總采食量、日增重和料重比也不受飼糧磷水平(0.38%、0.48%和0.65%)的顯著影響。本研究中低磷水平(0.19%和0.32%)飼糧顯著提高了空懷期云南半細毛羊的干物質(zhì)采食量、平均凈增重和平均日增重，而過高的飼糧磷水平(0.45%、0.56%和0.64%)以上3個指標則出現(xiàn)下降趨勢，料重比也較高。王慧敏等[14]對育成期嶗山奶山羊的研究表明，飼糧磷水平為0.45%時較飼糧磷水平為0.25%和0.35%時干物質(zhì)采食量有下降趨勢，與本研究結果一致，說明云南半細毛羊對磷的耐受量有一定的范圍，當飼糧磷水平超過適宜磷水平時，將影響母羊的食欲，減少干物質(zhì)采食量，并使生長性能下降，進而可能影響空懷期母羊再次配種時的受胎率、產(chǎn)羔率和羔羊成活率[15]。但趙智力[16]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧高磷水平(非產(chǎn)絨期0.30%～0.35%，產(chǎn)絨期0.41%～0.55%)比低磷水平(非產(chǎn)絨期0.20%，產(chǎn)絨期0.18%)能顯著提高內(nèi)蒙古白絨山羊生長羯羊的日增重和料重比，對干物質(zhì)采食量卻無顯著。飼糧磷水平對羊生長性能的影響不同可能是由于羊品種及所處生理階段和飼養(yǎng)方式不同而導致。本試驗結果提示，飼糧磷水平在0.19%～0.32%時，云南半細毛羊空懷期母羊可獲得最佳生長性能。

3.2 飼糧磷水平對空懷期云南半細毛羊磷消化代謝的影響

磷的消化代謝會顯著影響空懷期母羊配種前體況恢復及繁殖性能。目前，關于飼糧磷水平對羊磷消化代謝影響的報道各有不同。袁浩容等[12]研究發(fā)現(xiàn)，歐拉型后備母羊磷排出量隨著飼糧磷水平的升高而顯著增加，進食磷和磷表觀消化率卻不受飼糧磷水平的顯著影響。胡鳳明等[17]研究表明，飼糧磷水平升高顯著增加了察哈爾羔羊的進食磷和排泄磷，提高了羔羊骨骼磷沉積，對磷表觀消化率則無顯著影響。王浩等[18]報道，飼糧磷水平越高，陜北白絨山羊斷奶羔羊的進食磷、糞磷、尿磷及磷表觀消化率就越大，磷利用率則不受飼糧磷水平的顯著影響。趙智力[16]對內(nèi)蒙古白絨山羊生長羯羊的研究發(fā)現(xiàn)，高磷水平飼糧組羊的進食磷、糞磷、磷表觀消化率和沉積磷顯著高于低磷水平飼糧組，而低磷水平飼糧組磷利用率則最高。王慧敏[19]研究發(fā)現(xiàn)，隨著飼糧磷水平的升高，育成期嶗山奶山羊進食磷、糞磷、尿磷和沉積磷顯著增加，磷表觀消化率顯著降低，而泌乳期母羊進食磷和糞磷顯著增加，磷表觀消化率和沉積磷則呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，0.36%磷水平為其拐點。本試驗結果顯示，隨著飼糧磷水平的升高，空懷期母羊進食磷、糞磷、尿磷、排泄磷、可消化磷和沉積磷顯著增加，而磷表觀消化率和磷利用率呈先降低后升高的趨勢，低磷水平(0.19%)飼糧和高磷水平(0.56%和0.64%)飼糧磷利用率無顯著差異，說明當提供0.19%磷水平飼糧時，即可保證云南半細毛羊母羊對磷的有效利用吸收，過量的磷主要通過糞便排出后易造成磷資源浪費和環(huán)境污染。

3.3 飼糧磷水平對空懷期云南半細毛羊血清生化指標的影響

血清鈣、磷含量是反映機體鈣磷代謝的重要指標。王俊東等[20]報道了綿羊血清磷含量參考值為1.61～2.35 mmol/L，血清鈣含量參考值為2.88～3.20 mmol/L。本研究結果表明，空懷期云南半細毛羊各組血清磷含量在參考值范圍內(nèi)，而血清鈣含量則略低于參考值臨界值，可能與空懷期母羊體況快速恢復有關。同時，隨著飼糧磷水平的升高，血清磷含量呈上升趨勢，而血清鈣含量卻無顯著變化，該結果與袁浩容等[12]和司丙文等[13]對歐拉型后備母羊和烏珠穆沁羔羊中血清磷和鈣含量的研究結果相似。

反芻動物體內(nèi)鈣磷代謝調(diào)節(jié)和控制主要由PTH、CT和維生素D3協(xié)調(diào)完成[2]。PTH由甲狀腺主細胞分泌，可促使血清鈣含量升高和血清磷含量下降；CT由甲狀腺和甲狀旁腺濾泡旁細胞分泌，通過抑制骨組織中破骨細胞活性，減少鈣從骨中釋放，從而降低血清鈣含量；此外，血清磷和鈣含量又以負反饋的方式調(diào)節(jié)PTH和CT分泌。在本試驗中，血清PTH含量不受飼糧磷水平的影響，與血清鈣含量變化結果一致，而血清CT含量隨飼糧磷水平的升高呈先升高后下降趨勢。司丙文等[13]研究發(fā)現(xiàn)，隨著飼糧鈣和磷水平的增加，穆沁羔羊血清PTH含量無顯著變化，該結果與本研究結果一致。ALP是一種成骨細胞的細胞外酶，當動物缺鈣、缺磷或鈣磷比例不當時，成骨細胞活動增強，血清ALP釋放量增加以調(diào)節(jié)血清磷含量的穩(wěn)定[12]。王慧敏等[21]研究表明不同飼糧磷水平對嶗山奶山羊血清ALP活性無顯著影響，而胡鳳明等[17]則發(fā)現(xiàn)隨著飼糧鈣與磷水平的升高，察哈爾羔羊血清ALP活性有降低的趨勢。本研究發(fā)現(xiàn)，高磷水平飼糧組血清ALP活性顯著高于低磷水平飼糧組，說明0.56%和0.64%磷水平飼糧可能影響了空懷期云南半細毛羊母羊鈣磷代謝的平衡。BGP是由成骨細胞分泌的一種非膠原骨基質(zhì)蛋白，血清BGP含量反映了骨形成和骨轉化狀況的狀況[22]。本試驗中隨著飼糧磷水平的不斷提高，血清BGP含量無顯著變化，這表明飼糧磷水平并不影響云南半細毛羊骨代謝的活躍程度，該結果與胡鳳明等[17]對察哈爾羔羊的研究結果一致。HYP為骨膠原特有的非必需氨基酸，血清HYP含量多與骨膠原分解代謝情況有關，對早期診斷骨營養(yǎng)不良具有重要價值[23]。本研究中0.32%磷水平組血清HYP含量高于0.45%和0.56%磷水平組，而與0.19%和0.64%磷水平組無顯著差異，說明0.32%磷水平組母羊存在一定程度的溶骨反應，可能是為了彌補哺乳后機體骨礦化不足而發(fā)生的代償作用。LEP作為一種脂肪細胞分泌的蛋白質(zhì)，在脂肪、能量和骨代謝過程中發(fā)揮著重要的作用[24]。李雙慶等[25]發(fā)現(xiàn)LEP可刺激ALP和BGP分泌，加速骨吸收和抑制骨形成。本研究表明，血清LEP含量隨飼糧磷水平的升高呈先升高后下降的趨勢，與CT的變化趨勢一致，提示CT和LEP可能共同參與了空懷期母羊鈣磷代謝平衡的調(diào)節(jié)，具體機制有待進一步研究探討。

3.4 空懷期云南半細毛羊磷需要量

關于空懷期母羊磷的維持需要量，國內(nèi)外報道較少。本研究通過梯度飼養(yǎng)試驗，得到空懷期云南半細毛羊進食磷與沉積磷之間的線性回歸關系，根據(jù)回歸方程，當沉積磷為零時，對應的進食磷即為母羊在維持情況下的磷需要量，即空懷期云南半細毛羊的磷維持需要量為0.082 2 g/(kg W0.75·d)。NRC(2007)[26]中推薦40～50 kg成年母綿羊的磷維持需要量為0.079 8～0.081 7 g/(kg W0.75·d)，而40～50 kg配種母綿羊的磷維持需要量為0.094 3～0.095 7 g/(kg W0.75·d)；Suttle等[27]獲得了磷維持需要量與干物質(zhì)采食量之間的關系式：磷維持需要量=0.693×干物質(zhì)采食量(kg)-0.06，對應空懷期云南半細毛羊維持需要量為0.051 9～0.060 0 g/(kg W0.75·d)，略低于本試驗結果，可能是由于試驗環(huán)境和羊品種不同導致的，因此，本研究所建立的線性回歸模型仍需要大量試驗來進行驗證。

根據(jù)營養(yǎng)學原理，本研究應用綜合法以空懷期母羊平均日增重為標識進行了總磷需要量的測定，結果表明，飼糧磷水平顯著影響了空懷期云南半細毛羊的干物質(zhì)采食量、凈增重和平均日增重，飼糧磷水平在0.19%～0.32%時有利于空懷期云南半細毛羊的生長，結合干物質(zhì)采食量可得出空懷期云南半細毛羊總磷需要量為0.21～0.33 g/(kg W0.75·d)。張昌吉等[28]研究表明，40 kg甘肅高山細毛羊成年母羊磷需要量為0.32～0.37 g/(kg W0.75·d)；而袁浩容等[12]則發(fā)現(xiàn)40 kg歐拉型藏系母羊磷需要量為0.130 8 g/(kg W0.75·d)；刁其玉[29]研究表明，40～50 kg肉用綿羊磷需要量為0.22～0.27 g/(kg W0.75·d)；我國《肉羊飼養(yǎng)標準》(NT/T 816—2004)推薦40～50 kg育成母綿羊磷需要量為0.133 0～0.144 6 g/(kg W0.75·d)，40～50 kg妊娠前期母綿羊磷需要量為0.125 7～0.139 2 g/(kg W0.75·d)。以上研究結果說明云南半細毛羊總磷需要量與甘肅高山細毛羊相近，而略高于歐拉型藏系母羊。

4 結 論

① 在本試驗條件下，低磷水平(0.19%和0.32%)飼糧顯著提高了空懷期云南半細毛羊的干物質(zhì)采食量、平均凈增重和平均日增重，而過高磷水平(0.45%、0.56%和0.64%)飼糧使得以上3個指標均出現(xiàn)下降趨勢。

② 隨著飼糧磷水平的升高，空懷期母羊進食磷、糞磷、尿磷、可消化磷和沉積磷顯著或極顯著增加，而磷表觀消化率和磷利用率呈先降低后升高的趨勢。

③ 隨著飼糧磷水平的升高，空懷期云南半細毛羊的血清磷含量、ALP活性呈上升趨勢，血清CT和LEP含量呈先升高后下降趨勢；0.32%磷水平組血清HYP含量顯著高于0.45%和0.56%磷水平組；血清鈣、PTH和BGP含量不受飼糧磷水平的顯著影響。

④ 空懷期云南半細毛羊磷維持需要量為0.082 2 g/(kg W0.75·d)，總磷需要量為0.21～0.33 g/(kg W0.75·d)。