徐曉薇 都思哲

摘 要 為探索青島地區(qū)無花果葉補(bǔ)骨脂素含量隨時(shí)間的變化情況，確立無花果葉的最佳采摘時(shí)間，將無花果葉茂盛期內(nèi)每隔15 d采集的葉子利用乙醇浸提，然后采用薄層層析法和高效液相色譜（HPLC）分析法測(cè)定葉中補(bǔ)骨脂素的含量。結(jié)果表明，6月中旬采集的無花果葉中補(bǔ)骨脂素的含量最低，10月初采集的無花果葉中補(bǔ)骨脂素的含量最高，為無花果葉中補(bǔ)骨脂素的開發(fā)應(yīng)用提供參考。

關(guān)鍵詞 無花果葉;采收期;補(bǔ)骨脂素含量

中圖分類號(hào)：R284 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2021.27.001

無花果（Ficus carica L.）屬?？崎艑僦参?，是人類最早栽培的古老果樹樹種之一，在我國(guó)南北各省份均有栽培[1-2]。無花果是目前研究較多的藥食兼優(yōu)的植物，其果、根、葉均可藥用，具有潤(rùn)肺止咳、健胃清腸、消腫解毒的功效，主治咽喉腫痛、喘咳、腸炎、痢疾、便秘、痔瘡及疥癬等，《神農(nóng)本草經(jīng)》《救荒本草》《滇南本草》《本草綱目》《草木便方》等多部本草古籍均有記載[3-4]。無花果易于栽培，產(chǎn)業(yè)化勢(shì)頭較強(qiáng)，但目前主要集中在其果實(shí)制品的開發(fā)，無花果葉開發(fā)并未被重視，多被廢棄[5-6]，然而根據(jù)近些年來的研究成果，無花果葉提取物具有抗腫瘤、抗菌、抗炎、降低血糖和血脂、抗病毒、抑制白斑、抗骨質(zhì)疏松等多種生物活性[6-8]，值得開發(fā)利用。香豆素類物質(zhì)是無花果葉中最主要的一類活性成分，趙萍等報(bào)道香豆素類物質(zhì)占無花果葉揮發(fā)油的51.46%，其中的補(bǔ)骨脂素（屬呋喃香豆素）占44.83%[2]。補(bǔ)骨脂素是一種具有廣泛生物活性的光敏物質(zhì)，具有鎮(zhèn)靜、解痙、止血、抗腫瘤、殺滅白血病細(xì)胞、抗骨質(zhì)疏松等作用[9-11]，尤其是抗腫瘤作用，近年來補(bǔ)骨脂素的體內(nèi)外抗癌實(shí)驗(yàn)表明其對(duì)黏液表皮樣癌、胃癌、乳腺癌等多種癌細(xì)胞具有良好的抑制作用[9，12]，補(bǔ)骨脂素也是治療白癜風(fēng)、斑禿、牛皮癬及瘤樣皮膚病的有效藥物。鑒于補(bǔ)骨脂素良好的生理活性及豐富的無花果葉資源，從無花果葉提取分離補(bǔ)骨脂素具有重要的現(xiàn)

實(shí)意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

無花果葉，采集于青島大學(xué)浮山校區(qū)東院;補(bǔ)骨脂素標(biāo)準(zhǔn)品（HPLC≥98%），購(gòu)于上海源葉生物科技有限公司。

1.2 主要儀器

HR2006果蔬粉碎機(jī)（飛利浦電子香港有限公司）、真空抽濾裝置、GF254硅膠薄層層析板（煙臺(tái)江友硅膠開發(fā)有限公司）、移液槍、ZF-1三用紫外分析儀（上海力辰邦西儀器科技有限公司）、LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 無花果葉的采集及處理

于無花果葉茂盛期（2020年6月15日—2020年10月31日）每隔15 d采集一次，采集時(shí)間依次為6月15日、7月1日、7月15日、8月1日、8月15日、9月1日、9月15日、10月1日、10月15日及10月31日，共10批次，分別標(biāo)記為1#～10#。

將無花果葉洗凈晾干，用果蔬粉碎機(jī)打碎后，取10 g置于500 mL錐形瓶中，加入200 mL無水乙醇浸提48 h，真空抽濾，濾液采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸餾，得到無花果葉乙醇提取物。將無花果葉乙醇提取物配成500 mg·L-1的乙醇溶液，以備檢測(cè)其中的補(bǔ)骨脂素含量。另配制500 mg·L-1補(bǔ)骨脂素標(biāo)準(zhǔn)品的乙醇溶液，作為補(bǔ)骨脂素的檢測(cè)對(duì)照。

1.3.2 補(bǔ)骨脂素的薄層層析分析

取12 cm×10 cm硅膠（GF254）薄層層析板，硅膠板下方離底邊約1 cm處用鉛筆劃線，作為樣品線。將補(bǔ)骨脂素標(biāo)準(zhǔn)溶液及10個(gè)批次的無花果葉乙醇提取物溶液用移液槍各取5 μL依次滴加到硅膠板樣品線上，每樣品點(diǎn)間隔約1 cm。以石油醚-乙酸乙酯（2∶1）為展開劑做硅膠薄層層析，層析結(jié)果采用紫外分析儀于254 nm下觀察，參照補(bǔ)骨脂素標(biāo)準(zhǔn)品的樣品點(diǎn)找到各批次無花果葉乙醇提取物中補(bǔ)骨脂素的組分點(diǎn)，并比對(duì)各提取物補(bǔ)骨脂素組分點(diǎn)的顏色深淺。

1.3.3 補(bǔ)骨脂素的HPLC分析

采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）方法對(duì)補(bǔ)骨脂素系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液（50 μg·mL-1、100 μg·mL-1、150 μg·mL-1、200 μg·mL-1及250 μg·mL-1）及各批次無花果葉乙醇提取物溶液中補(bǔ)骨脂素含量進(jìn)行測(cè)定。色譜條件為：色譜柱為ODS柱（大連依利特，150 mm×4.6 mm）;流動(dòng)相為甲醇-水（7∶3）;流速每分鐘為0.8 mL;進(jìn)樣量為10 μL; 柱溫為30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)為268 nm。

2 結(jié)果與分析

2.1 薄層層析結(jié)果

10個(gè)批次的無花果葉乙醇提取物的薄層層析結(jié)果表明（見圖1），10月1日和10月15日采收的無花果葉乙醇提取物中補(bǔ)骨脂素組分點(diǎn)顏色明顯較深，而6月15日至9月15日及10月31日采收的無花果葉乙醇提取物中補(bǔ)骨脂素組分點(diǎn)較淺，說明不同采收期的無花果葉中補(bǔ)骨脂素含量存在顯著差異。

0號(hào)樣品點(diǎn)為補(bǔ)骨脂素標(biāo)準(zhǔn)品，1～10號(hào)樣品點(diǎn)分別為1#～10#無花果葉乙醇提取物

2.2 HPLC分析結(jié)果

HPLC檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2所示，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=22 871.534 0x+7 595.100 0，相關(guān)系數(shù)R2=0.000 9，線性關(guān)系良好。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算不同采收時(shí)間無花果葉乙醇提取物中補(bǔ)骨脂素含量如圖3所示，HPLC檢測(cè)結(jié)果與紙層析結(jié)果一致，更準(zhǔn)確地反映出不同采收期無花果葉中補(bǔ)骨脂素含量存在的明顯差異。9月1日至10月31日采集的無花果葉中補(bǔ)骨脂素含量變化最為顯著，10月1日采集的無花果葉中補(bǔ)骨脂素含量最高。

3 討論

采用2種檢測(cè)方法對(duì)不同采收期無花果葉乙醇提取物中補(bǔ)骨脂素的含量進(jìn)行檢測(cè)，先采用薄層層析法簡(jiǎn)便快速地反映出不同時(shí)間采收的無花果葉中補(bǔ)骨脂素含量存在差異，而后采用HPLC方法檢測(cè)了各試樣中補(bǔ)骨脂素的含量，更準(zhǔn)確靈敏地反映出補(bǔ)骨脂素含量隨時(shí)間的變化情況。研究發(fā)現(xiàn)，青島地區(qū)無花果葉在茂盛期內(nèi)其中的補(bǔ)骨脂素含量隨著時(shí)間變化明顯，尤其是9月1日至10月31日時(shí)間段變化最為顯著，10月初的無花果葉補(bǔ)骨脂素含量最高。

目前，天然源補(bǔ)骨脂素主要從中分離獲得，成本較高，研究發(fā)現(xiàn)無花果葉中補(bǔ)骨脂素含量也很高，而且來源便捷、成本低廉，是替代中藥材補(bǔ)骨脂生產(chǎn)補(bǔ)骨脂素的理想原料，對(duì)于以無花果葉為原料的補(bǔ)骨脂素產(chǎn)業(yè)化具有實(shí)用價(jià)值。

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（責(zé)任編輯：趙中正）

收稿日期：2021-08-22

作者簡(jiǎn)介：徐曉薇（1995—），女，山東招遠(yuǎn)人，本科，研究方向?yàn)樘烊换钚晕镔|(zhì)。E-mail：1054382426@qq.com。