• 
    

    
    

      99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

      高糖環(huán)境下BCA-1通過(guò)血管平滑肌細(xì)胞對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和凋亡的影響

      2021-12-17 08:27:10李永濤沈雷張善強(qiáng)姜楊孫石柱
      中外醫(yī)療 2021年28期
      關(guān)鍵詞:高糖抑制劑培養(yǎng)基

      李永濤,沈雷,張善強(qiáng),姜楊,孫石柱

      齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院解剖教研室,黑龍江齊齊哈爾 161006

      糖尿病患者全球約4.51億人[1],我國(guó)糖尿病患發(fā)病率保守估計(jì)約為11%[2]??刂铺悄虿〖捌洳l(fā)癥卻不理想。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSC)作為細(xì)胞治療的首選細(xì)胞被用于多種疾病的治療[3-5]。提高M(jìn)SC歸巢效率將促進(jìn)MSC的再生修復(fù)能力。B淋巴細(xì)胞化學(xué)引誘物-1(b-lymphocyte chemical attractants-1,BCA-1)又稱趨化因子13(CXC motif chemokine ligand 13,CXCL-13),不僅作為判斷肝癌預(yù)后的良好指標(biāo)[6],還可以激活CXCR5/ERK信號(hào)通路而加速乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移[7]。CXCL-13可以降低癌細(xì)胞免疫原性,在腫瘤免疫逃避中發(fā)揮作用[8]。此外發(fā)現(xiàn)MSC分泌的CXCL-13可促進(jìn)骨髓瘤細(xì)胞侵襲,增加耐藥性[9]。也有研究發(fā)現(xiàn),BCA-1結(jié)合于MSC的CXCR5受體,誘導(dǎo)MSC成骨分化、成肌腱分化,在肌腱-骨愈合過(guò)程中發(fā)揮再生修復(fù)作用[10-11]。缺氧環(huán)境下,BCA-1通過(guò)MAPK/NFκB信號(hào)通路促進(jìn)MSC自噬和增殖[12]。因此,BCA-1可能在招募MSC遷移或降低MSC低免疫原性等“干性”作用中發(fā)揮著重要作用。

      MSC由血管遷移到組織是MSC穿過(guò)血管的過(guò)程,目前還不清楚BCA-1招募MSC歸巢與血管平滑肌細(xì)胞的關(guān)系。該研究在細(xì)胞高糖模型下,以BCA-1刺激主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(aortic smooth muscle cells,ASMC)的上清液制備條件培養(yǎng)基,觀察各組ASMC對(duì)MSC增殖和凋亡作用及分子機(jī)制,為BCA-1誘導(dǎo)MSC歸巢穿越血管壁,治療糖尿病及其并發(fā)癥提供研究數(shù)據(jù)。

      1 材料與方法

      1.1 材料

      小鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(mASMC)、小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mBMSC)均購(gòu)自深圳豪地華拓生物科技有限公司;小鼠BCA-1重組蛋白購(gòu)自武漢艾美捷科技有限公司;LY294002重組蛋白購(gòu)自美國(guó)Selleck公司;胎牛血清(Fetal Bovine Serum,F(xiàn)BS)、α-MEM培養(yǎng)基、RPMI-1640培養(yǎng)基均購(gòu)自美國(guó)Hyclone公司;Annexin VFITC/PI細(xì)胞凋亡試劑盒購(gòu)自南京凱基生物科技發(fā)展有限公司;CCK-8購(gòu)自日本Dojindo公司;苯甲基磺酰氟(Phenylmethylsulfonyl fluoride,PMSF)購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司;小鼠IL-8、Akt、磷酸化-Akt(Phosphorylation-Akt,p-Akt)蛋白的ELISA試劑盒購(gòu)自美國(guó)R&D公司。兔抗小鼠Caspase-8、兔抗小鼠β-actin和HRP標(biāo)記羊抗兔IgG購(gòu)于Abcam公司。美國(guó)Molecular Devices公司的Emax酶標(biāo)儀;美國(guó)BD公司的FACSAria II型流式細(xì)胞儀。

      1.2 方法

      1.2.1 細(xì)胞高糖模型 含30 mmol/L葡萄糖的培養(yǎng)基為細(xì)胞高糖培養(yǎng)基,用細(xì)胞高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)胞為高糖細(xì)胞模型[13]。

      1.2.2 mASMC培養(yǎng)與分組 含10%FBS的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)mASMC。正常條件下培養(yǎng)的mASMC為正常對(duì)照組。高糖環(huán)境下培養(yǎng)的mASMC為高糖對(duì)照組;以50 ng/mL BCA-1刺激者為高糖BCA-1組;若預(yù)先加入10μmol/L LY294002培養(yǎng)60 min,0.01 mmol/L PBS清洗后,再以50 ng/mL BCA-1刺激則為高糖PI3K抑制劑組。

      1.2.3 條件培養(yǎng)基1.5×105各組mASMC,在37℃,5%CO2培養(yǎng)12 h后,取上清液;1 000 r/min離心5 min,0.22μm濾器抽濾;與mBMSC培養(yǎng)基按1:5稀釋,即為各組mASMC的條件培養(yǎng)基(Conditioned medium,CM)[13],用于培養(yǎng)mBMSC。

      1.2.4 mBMSC培養(yǎng)與分組 含10%FBS的α-MEM培養(yǎng)基培養(yǎng)mBMSC。正常條件下培養(yǎng)mBMSC為正常對(duì)照組:高糖環(huán)境下無(wú)任何刺激者為高糖對(duì)照組。以mASMC的高糖對(duì)照組CM、高糖BCA-1組CM和高糖PI3K抑制劑組CM培養(yǎng)的mBMSC,分別為高糖CM組、高糖BCA-1CM組和高糖PI3K抑制劑CM組。

      1.2.5 CCK-8實(shí)驗(yàn) 8.0×103mBMSC培養(yǎng)在96孔板,37℃、5%CO2培養(yǎng)12 h;0.01 mmol/L PBS清洗3次,1 min/min。按照mBMSC分組而加入相應(yīng)的培養(yǎng)基或試劑,繼續(xù)培養(yǎng)12 h。各孔加入CCK-8溶液10μL,37℃、5%CO2培養(yǎng)2 h后,Emax酶標(biāo)儀于450 nm處檢測(cè)各組mBMSC吸光度值(Absorbance value,A)。

      1.2.6 流式細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn) 2.0×105各組mBMSC細(xì)胞重懸于1.25%Annexin V-FITC溶液中,室溫孵育15 min,4℃,10 000 r/min離心5 min后,加入等體積的2%PI溶液,冰上孵育2 min,4℃,10 000 r/min離心5 min后,0.01 mmol/L PBS重懸,F(xiàn)ACSAria II流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。

      1.2.7 West er n bl ot 含1 mmol/L PMSF的細(xì)胞裂解液裂解各組5.0×106 mBMSC,4℃,12 000 r/min離心60 min。BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒定量。濃縮膠75 V電泳30 min,分離膠110 V電泳45 min;75 V轉(zhuǎn)膜2 h至硝酸纖維素膜。脫脂奶粉封閉后,加入兔抗小鼠Caspase-8抗體 (1∶550),兔抗小鼠β-actin抗體(1:800),4℃過(guò)夜后;加入HRP標(biāo)記羊抗兔IgG(1∶500),室溫孵育120 min;滴加ECL試劑,Tanon 6 200發(fā)光成像工作站顯影。Image-Pro Plus 6.0.1圖像分析軟件檢測(cè)各蛋白條帶的相對(duì)光密度值 (Optical density value,OD),并計(jì)算各蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

      1.2.8 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)提取5.0×106各組mASMC上清液,小鼠IL-8蛋白ELISA試劑盒檢測(cè)各組mASMC上清液中IL-8蛋白含量。含1 mmol/L PMSF的裂解液裂解各組mASMC,4℃,12 000 r/min離心8 min,提取各組細(xì)胞裂解液。小鼠Akt、p-Akt蛋白ELISA試劑盒檢測(cè)各組mASMC裂解液中Akt、p-Akt蛋白含量。

      1.3 統(tǒng)計(jì)方法

      采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)量資料用(±s)表示,多組間比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用Q檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料用[n(%)]表示,采用χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      2 結(jié)果

      2.1 各組條件培養(yǎng)基對(duì)mBMSC增殖的影響

      正常對(duì)照組、高糖對(duì)照組、高糖CM組、高糖BCA-1CM組、高糖PI3K抑制劑CM組mBMSC的A值分別為(1.47±0.20)、(0.62±0.39)、(0.85±0.22)、(1.31±0.15)、(0.53±0.34),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=80.33,P<0.01)。高糖對(duì)照組A值是正常對(duì)照組的0.42倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);高糖對(duì)照CM組A值是高糖對(duì)照組的1.37倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);高糖BCA-1CM組A值是高糖對(duì)照CM組1.54倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);高糖PI3K抑制劑CM組A值是高糖BCA-1CM組的0.40倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),見(jiàn)圖1。結(jié)果提示高糖環(huán)境下,BCA-1刺激的mASMC條件培養(yǎng)基能促進(jìn)mBMSC增殖。

      圖1 CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組mBMSC增殖

      2.2 各組條件培養(yǎng)基對(duì)mBMSC凋亡率的影響

      各組mBMSC的細(xì)胞凋亡率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。高糖對(duì)照組mBMSC細(xì)胞凋亡率是正常對(duì)照組的2.02倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);高糖BCA-1CM組mBMSC細(xì)胞凋亡率是高糖CM組的62.2%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);高糖PI3K抑制劑CM組mBMSC凋亡率是高糖BCA-1CM組的1.37倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)圖2。

      圖2 流式細(xì)胞術(shù)分析各組mBMSC凋亡

      2.3 各組條件培養(yǎng)基對(duì)mBMSC的Caspase-8蛋白表達(dá)的影響

      為了進(jìn)一步驗(yàn)證各組條件培養(yǎng)基對(duì)mBMSC凋亡的影響,Western blot檢測(cè)各組mBMSC的Caspase-8蛋白表達(dá)。正常對(duì)照組、高糖對(duì)照組、高糖CM組、高糖BCA-1CM組、高糖PI3K抑制劑CM組的Caspase-8蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為(0.52±0.03)、(0.75±0.08)、(0.70±0.06)、(0.42±0.04)、(1.10±0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=488.00,P<0.01)。高糖對(duì)照組Caspase-8蛋白是正常對(duì)照組的1.44倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);高糖CM組Caspase-8蛋白是高糖對(duì)照組的0.93倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);高糖BCA-1CM組Caspase-8蛋白是高糖CM組0.60倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);高糖PI3K抑制劑CM組Caspase-8蛋白是高糖BCA-1CM組2.38倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),見(jiàn)圖3。兩種細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果均提示高糖環(huán)境下,BCA-1通過(guò)激活mASMC內(nèi)PI3K信號(hào)通路,受BCA-1刺激的mASMC條件培養(yǎng)基能降低mBMSC凋亡。

      圖3 Western blot法檢測(cè)各組mBMSC的Caspase-8蛋白表達(dá)

      2.4 BCA-1對(duì)mASMC的Akt、p-Akt、IL-8蛋白表達(dá)的影響

      ELISA檢測(cè)各組mASMC裂解液中Akt、p-Akt蛋白含量。高糖對(duì)照組的Akt、p-Akt蛋白量分別是正常對(duì)照組的1.27倍、1.06倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001);高糖BCA-1組的Akt、p-Akt蛋白含量分別是高糖對(duì)照組的1.54倍、1.40倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001);高糖PI3K抑制劑組的Akt、p-Akt蛋白含量分別是高糖BCA-1組的0.68倍、0.79倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。ELISA檢測(cè)各組mASMC上清液中IL-8含量發(fā)現(xiàn),高糖對(duì)照組的IL-8蛋白量是正常對(duì)照組的1.50倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001);高糖BCA-1組的IL-8蛋白含量是高糖對(duì)照組的1.92倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001);高糖PI3K抑制劑組的IL-8蛋白含量是高糖BCA-1組的0.77倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001),見(jiàn)表1。這說(shuō)明BCA-1激活mASMC內(nèi)Akt通路,促進(jìn)mASMC表達(dá)IL-8蛋白,PI3K抑制劑能夠阻斷這一過(guò)程。

      表1 BCA-1對(duì)mASMC的Akt、p-Akt蛋白表達(dá)的影響[(±s),μg/mL]

      表1 BCA-1對(duì)mASMC的Akt、p-Akt蛋白表達(dá)的影響[(±s),μg/mL]

      注:a P<0.001,與正常對(duì)照組比較;b P<0.001,與高糖對(duì)照組比較;c P<0.001,與高糖BCA-1組比較

      指標(biāo)正常對(duì)照組(n=16)高糖對(duì)照組(n=16)高糖BCA-1組(n=16)高糖PI3K抑制劑組(n=16)F值 P值A(chǔ)kt p-Akt IL-8 6.03±0.14 5.16±0.09 2.38±0.34(7.71±0.29)a(5.48±0.15)a(3.57±0.28)a(11.85±0.18)b(7.69±0.13)b(6.84±0.21)b(8.16±0.24)c(6.10±0.12)c(5.33±0.67)c 1987.68 1308.22 357.74<0.001<0.001<0.001

      3 討論

      糖尿病及其相關(guān)并發(fā)癥造成患者生活質(zhì)量的下降[14]。胰腺及胰島細(xì)胞的移植雖可解決上述弊端,但由于供體來(lái)源短缺,易出現(xiàn)免疫排斥反應(yīng),致使移植手術(shù)難以在臨床廣泛推廣[15]。體內(nèi)分布廣泛的MSC具有容易提取、易于培養(yǎng)、多分化性、低免疫原性等特點(diǎn),為糖尿病及其并發(fā)癥的治療帶來(lái)希望。趨化因子是一族小的多肽,主要作用為活化細(xì)胞,促進(jìn)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)[16]。研究發(fā)現(xiàn)MSC可表達(dá)CCR1、CCR7、CCR9、CXCR4、CXCR5等多種趨化因子配體[8],趨化因子可促進(jìn)MSC等細(xì)胞歸巢并在組織中集聚[17]。BCA-1(CXC13)可與MSC表達(dá)的CXCR5配體結(jié)合,促進(jìn)人骨髓MSC的增殖和自噬[12],并能夠提高M(jìn)SC成骨分化的能力[10],BCA-1提高了大鼠損傷肌腱張力負(fù)荷水平,促進(jìn)小鼠C3HIOT1/2間充質(zhì)細(xì)胞系ERK1/2、JNK和p38蛋白的表達(dá),提高C3HIOT1/2細(xì)胞成骨能力[10]。但是BCA-1在高糖環(huán)境下對(duì)MSC增殖或凋亡的影響卻鮮見(jiàn)報(bào)道。

      該研究探討高糖環(huán)境下,BCA-1處理的ASMC對(duì)MSC增殖和凋亡的影響。30 mmol/L葡萄糖建立的細(xì)胞高糖模型相當(dāng)于血糖濃度540 mg/dl,Shen L等[13]也據(jù)此建立細(xì)胞高糖模型,是比較認(rèn)可的細(xì)胞高糖模型。高糖對(duì)照組mBMSC的A值與正常對(duì)照組相比,出現(xiàn)明顯降低,其原因可能與高糖環(huán)境導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)活性氧、氧自由基等物質(zhì)增多有關(guān)。張磊等[18]研究HK-2正常人近端腎小管上皮細(xì)胞發(fā)現(xiàn),30 mmol/L葡萄糖通過(guò)激活活性氧介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路,誘導(dǎo)HK-2人腎小管上皮細(xì)胞NF-κBp65及α-SMA表達(dá)升高,細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)分化,賀今等[19]在動(dòng)物研究中報(bào)道,苯能夠誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞活性氧(ROS)表達(dá)增高,阻滯造血干細(xì)胞S期,最終出現(xiàn)苯所致小鼠再生障礙性貧血。這再次證明ROS阻斷了線粒體呼吸鏈的傳遞,抑制了細(xì)胞的代謝,引起細(xì)胞有絲分裂周期延長(zhǎng)[19],致使細(xì)胞增殖能力降低有關(guān),該研究結(jié)果與Shen L、張磊、賀今等學(xué)者的觀點(diǎn)和研究結(jié)果相符,即高糖環(huán)境下mBMSC的A值明顯降低。與高糖對(duì)照組相比,高糖CM組和高糖BCA-1CM組mBMSC的A值逐漸增加,這可能是高糖環(huán)境使mASMC產(chǎn)生ROS、氧自由基等有害物質(zhì),mASMC能啟動(dòng)、釋放清除氧自由基的超氧化物歧化酶等抗氧化酶家族成員有關(guān)。岳萌等[20]在鏈脲佐菌素誘導(dǎo)聯(lián)合大腦中動(dòng)脈栓塞動(dòng)物模型的缺血再灌注后5、24 h收集腦組織,利用免疫熒光等試驗(yàn)均發(fā)現(xiàn)ROS增加的同時(shí),腦組織抗氧化酶的表達(dá)也呈現(xiàn)逐漸增多的趨勢(shì),或Huang F等[21]研究高濃度葡萄糖誘導(dǎo)的人系膜細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn),高糖組人系膜細(xì)胞釋放IL-8、TNF-1α等炎癥因子,以維持細(xì)胞自身生存或能量供給,該研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比,高糖對(duì)照組IL-8蛋白表達(dá)增高,富含白介素等細(xì)胞因子的mASMC條件培養(yǎng)基培養(yǎng)mBMSC,促進(jìn)了高糖環(huán)境下mBMSC的增殖。

      高糖BCA-1CM組mBMSC的A值明顯增加,并結(jié)合mASMC內(nèi)Akt蛋白含量與其他組相比,有較大上調(diào)的ELISA研究結(jié)果,認(rèn)為BCA-1與mASMC表面CXCR5相結(jié)合[12],啟動(dòng)了mASMC內(nèi)部的PI3K-Akt信號(hào)通路。張超等[22]研究發(fā)現(xiàn),Akt信號(hào)通路是經(jīng)典而復(fù)雜的信號(hào)網(wǎng)絡(luò),其主要作用為維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài),促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化和運(yùn)動(dòng)。PI3K蛋白是激活A(yù)kt信號(hào)通路的關(guān)鍵原件,PI3K被激活后可進(jìn)一步磷酸化Akt信號(hào)通路。此外,Akt通路還與人肺成纖維細(xì)胞分泌IL-6、IL-8等細(xì)胞因子密切相關(guān)[23]。該研究也發(fā)現(xiàn)BCA-1促進(jìn)mASMC分泌IL-8,IL-8能促進(jìn)MSC在高糖環(huán)境下增殖,降低MSC凋亡,并能夠招募MSC歸巢運(yùn)動(dòng),Hou Y等[24]研究發(fā)現(xiàn)IL-8不僅增強(qiáng)人骨髓MSC歸巢,還能夠促進(jìn)人骨髓MSC表達(dá)VEGF蛋白,加速血管生成潛能。BCA-1與CXCR5結(jié)合的信號(hào)過(guò)程被PI3K抑制劑阻斷,抑制了PI3K-Akt信號(hào)通路的活化,導(dǎo)致mASMC旁分泌障礙,進(jìn)而使mBMSC的A值降低。

      為了驗(yàn)證BCA-1處理的mASMC對(duì)mBMSC凋亡的影響,采用兩種細(xì)胞凋亡研究方法。研究均發(fā)現(xiàn)各組mBMSC凋亡的情況與mBMSC的A值趨勢(shì)明顯相反。與正常對(duì)照組相比,高糖對(duì)照組mBMSC的Caspase-8蛋白的相對(duì)表達(dá)量和細(xì)胞凋亡率增高的原因是由于mBMSC群落為對(duì)抗高糖損傷,部分衰老的細(xì)胞率先出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象,為其余細(xì)胞提供能量和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),以維持細(xì)胞整體的生長(zhǎng)。Davydov VV等[25]研究認(rèn)為氧化應(yīng)激及凋亡反應(yīng)的生理意義在于避免細(xì)胞接觸有害物質(zhì)的損傷,促進(jìn)細(xì)胞集落的生長(zhǎng),這是機(jī)體的本能反應(yīng)機(jī)制的細(xì)胞生物學(xué)表現(xiàn)形式。高糖BCA-1CM組mBMSC的Caspase-8蛋白相對(duì)表達(dá)量降低,而高糖PI3K抑制劑CM組的Caspase-8蛋白相對(duì)表達(dá)量又升高,進(jìn)一步提示BCA-1激活mASMC內(nèi)PI3K-Akt信號(hào)通路,促進(jìn)mASMC表達(dá)IL-8等細(xì)胞因子上調(diào)mBMSC的增殖,抑制細(xì)胞凋亡的表達(dá)。

      綜上所述,高糖環(huán)境下,BCA-1能夠通過(guò)激活mASMC內(nèi)的PI3K-Akt信號(hào),發(fā)揮保護(hù)MSC對(duì)抗高糖環(huán)境的作用。后續(xù)研究還將建立糖尿病足動(dòng)物模型,在動(dòng)物研究水平,闡述BCA-1通過(guò)ASMC招募MSC的效果和機(jī)制。

      猜你喜歡
      高糖抑制劑培養(yǎng)基
      葛根素對(duì)高糖誘導(dǎo)HUVEC-12細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用
      中成藥(2018年6期)2018-07-11 03:01:04
      丹紅注射液對(duì)高糖引起腹膜間皮細(xì)胞損傷的作用
      中成藥(2017年8期)2017-11-22 03:18:21
      凋亡抑制劑Z-VAD-FMK在豬卵母細(xì)胞冷凍保存中的應(yīng)用
      蛹蟲(chóng)草液體發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選
      各種培養(yǎng)基制作應(yīng)注意的幾個(gè)事項(xiàng)
      KBM581培養(yǎng)基:人T細(xì)胞誘導(dǎo)與擴(kuò)增培養(yǎng)基應(yīng)用指南
      張掖市甜菜高產(chǎn)高糖栽培技術(shù)
      組蛋白去乙?;敢种苿┑难芯窟M(jìn)展
      磷酸二酯酶及其抑制劑的研究進(jìn)展
      大黃素對(duì)高糖培養(yǎng)的GMC增殖、FN表達(dá)及p38MAPK的影響
      巍山| 双城市| 山东省| 泰顺县| 稷山县| 福建省| 大化| 兴安县| 乾安县| 济南市| 辉南县| 安徽省| 韩城市| 沙洋县| 罗甸县| 长宁区| 宜兰市| 宁德市| 平昌县| 古浪县| 青冈县| 宁明县| 女性| 墨竹工卡县| 龙口市| 马尔康县| 来宾市| 海兴县| 巴中市| 台东县| 泗洪县| 长泰县| 和平县| 唐河县| 建始县| 兴山县| 万载县| 桐庐县| 洛阳市| 昌图县| 阆中市|