探討外院會診玻片行全自動免疫組化儀染色異常的優(yōu)化方法

脫 穎，梁英杰

免疫組化技術(shù)可以檢測細(xì)胞來源、辨認(rèn)細(xì)胞產(chǎn)物及了解分化程度等，為病理診斷和鑒別診斷提供客觀依據(jù)，并為疾病治療提供指導(dǎo)。在精準(zhǔn)醫(yī)療時代，全自動免疫組化儀以其自動化程度高、操作簡便、染色流程標(biāo)準(zhǔn)化等特點，在病理科廣泛應(yīng)用[1-2]。但全自動免疫組化儀染色也會遇到組織玻片非特異染色、染色偏弱或無法著色等問題[3]，其中以外院送檢的會診組織在羅氏Ventana免疫組化染色時最為常見。常規(guī)處理方法是對組織玻片進(jìn)行脫脂奶粉浸泡，但并不能完全解決問題。本科室通過增加二甲苯脫蠟、重復(fù)抗原修復(fù)及更換免疫組化染色儀的方法，對會診組織染色異常的切片進(jìn)行優(yōu)化，取得理想效果，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料收集2021年1～4月中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科異常染色的組織玻片30例，分別行免疫組化染色檢測HER-2/NEU、Rb、Ki-67的表達(dá)。免疫組化染色儀：Ventana Benchmark XT(羅氏公司)，Leica BOND Ⅲ(Leica公司)、DAKO Omnis(DAKO公司)；二抗檢測顯色系統(tǒng)均為各公司機(jī)器配套試劑。

1.2 方法(1)二甲苯預(yù)處理組：用常規(guī)10%的脫脂奶粉溶液浸泡30 min前，增加二甲苯脫蠟環(huán)節(jié)(5 min×3次)，蒸餾水沖洗后上機(jī)，行HER-2/NEU染色。(2)重復(fù)儀器修復(fù)環(huán)節(jié)組：手工滴加抗體見油膜下沉，抗體無法充分覆蓋組織，停止運行。將組織玻片重新上機(jī)，重復(fù)自動化染色儀脫蠟熱修復(fù)環(huán)節(jié)，行Rb蛋白染色。(3)更換免疫組化染色儀組：在Leica BOND Ⅲ、DAKO Omnis全自動免疫組化染色儀行Ki-67染色。組織玻片拷片65 ℃，60 min。Ventana免疫組化染色儀選擇HER-2/NEU、Rb蛋白、Ki-67染色后，運行修復(fù)染色；Leica BOND Ⅲ、DAKO Omnis分別選擇Ki-67染色后，運行修復(fù)染色。梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

2 結(jié)果

2.1 二甲苯預(yù)處理組未經(jīng)處理的會診組織玻片，HER-2/NEU在Ventana染色平臺上染色異常，呈胞質(zhì)非特異陽性，甚至核未著色(圖1A)。若只經(jīng)牛奶浸泡，免疫組化染色儀染色后只改善蘇木精復(fù)染細(xì)胞核著色，HER-2/NEU仍呈陰性(圖1B)。增加二甲苯脫蠟，會診組織染色效果佳，HER-2/NEU陽性，與原送檢單位染色結(jié)果一致(圖1C)。

2.2 重復(fù)儀器修復(fù)環(huán)節(jié)組未經(jīng)處理的會診組織玻片，Rb蛋白在Ventana染色平臺上染色呈陰性(圖2A)?？贵w未完全覆蓋組織，停止染色并在Ventana平臺重新上機(jī)，重復(fù)自動化染色儀脫蠟熱修復(fù)環(huán)節(jié)，Rb蛋白染色呈陽性(圖2B)。

2.3 更換免疫組化染色儀組未經(jīng)處理的會診組織玻片，Ki-67在Ventana染色平臺上染色呈弱陽性，基底細(xì)胞只有極少量陽性(圖3A)；更換為DAKO Omnis、Leica BOND Ⅲ全自動免疫組化染色平臺，染色效果明顯改善，Ki-67呈陽性(圖3B)。

①A①B①C②A②B③A③B

3 討論

全自動免疫組化儀染色由于其自動化程度高、操作簡便、染色流程標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點，已成為各病理科常規(guī)配置。染色過程中會出現(xiàn)對照組織染色佳，但待檢組織染色結(jié)果與原單位送檢結(jié)果不一致，或組織內(nèi)對照染色陰性及偏弱現(xiàn)象。文獻(xiàn)報道除浸泡奶粉溶液外[4-5]，并未見其他相應(yīng)的處理措施。

本科室對部分會診“問題組織玻片”的相同品牌玻片，加貼本院組織制片，在Ventana免疫組化平臺進(jìn)行組織染色后發(fā)現(xiàn)結(jié)果正常，提示異常染色并不完全是玻片問題。原因可能是由于會診“問題玻片”的原單位組織脫水流程不佳或組織蠟塊質(zhì)量層次不齊，機(jī)器自帶的脫蠟液對會診組織脫蠟不徹底，使組織玻片上殘留油污或油泡等物質(zhì)，產(chǎn)生親油現(xiàn)象使油膜下沉，導(dǎo)致抗體分布不均勻，阻礙抗原抗體結(jié)合，造成部分未處理會診玻片較難獲得理想染色[5-6]。日常實驗中，奶粉浸泡只是增加玻片親水性，使正電荷分布更均勻，并不能徹底解決問題。

本科室通過對三種染色平臺的會診組織染色效果的長期觀察，發(fā)現(xiàn)Leica及DAKO公司的免疫組化染色平臺較少有組織玻片出現(xiàn)類似Ventana染色平臺非特異染色現(xiàn)象。文獻(xiàn)報道，部分外院組織玻片染色前不處理也能獲得到良好的染色，但為了保證各染色平臺的染色結(jié)果一致性，應(yīng)盡量避開含油性試劑的Ventana染色儀[8-9]。如某些醫(yī)院僅有Ventana染色平臺時，應(yīng)在染色前增加二甲苯上機(jī)前處理及后續(xù)全自動免疫組化儀脫蠟和修復(fù)多重環(huán)節(jié)，可達(dá)到理想染色效果。其操作簡單易行，經(jīng)本科室長期驗證均取得良好效果，值得推廣。