苦參功勞顆粒對雞大腸桿菌病治療效果評價試驗

潘貴珍，李召斌，凍楊美，周德剛

摘要：目的：本研究旨在觀察苦參功勞顆粒對雞大腸桿菌病的治療效果。方法：患大腸桿菌病肉雞，2棟，每棟16，000只，分為苦參功勞顆粒組（1g/L）和鹽酸多西環(huán)素可溶性粉組（3g/L），于給藥前和試驗期間觀察并記錄雞只采食量、糞便狀況和死亡情況。結果：肉雞給藥后采食量和糞便基本恢復，可極顯著降低動物的死亡率（P<0.01），表明苦參功勞顆粒對雞的大腸桿菌病有效。結論：苦參功勞顆粒，1g/L，連用3d，對雞大腸桿菌病有較好的治療作用。

關鍵詞：苦參功勞顆粒;大腸桿菌;蛋雞腹瀉;死亡率;耐藥

雞大腸桿菌病是一種由致病性大腸桿菌引起的急性或慢性傳染病，具有發(fā)病率高、發(fā)病快、死亡率高的特點，給養(yǎng)殖業(yè)造成嚴重的經濟損失[1，2]。目前，在飲水或飼料中添加抗生素是預防和治療雞大腸桿菌病的主要手段，然而由于抗菌藥的長期不合理使用，導致細菌耐藥性日益嚴重，臨床上分離多重耐藥菌的報道日益增多[3]。此外，由于長期在飼料中添加抗菌藥物導致的動物源性食品藥物殘留威脅公眾的生命健康安全，我國開始實施藥物飼料添加劑退出計劃，給大腸桿菌病防控帶來新的挑戰(zhàn)?？鄥⒐陬w粒是按傳統(tǒng)中獸醫(yī)理論開發(fā)的中獸藥復方制劑，由十大功勞、苦參、木香3味藥物組成，有清熱解毒，燥濕止痢的功效，藥效學研究表明苦參功勞顆粒對人工感染大腸桿菌的小鼠具有治療作用[4]。為了考察苦參功勞顆粒對雞大腸桿菌病的臨床治療效果，筆者采用自然感染病例進行臨床效果評價。

1 試驗材料

1.1 藥品

苦參功勞顆粒，批號：20171101，洛陽惠中獸藥有限公司，每1L水，雞1g，規(guī)格為每1g相當于原生藥3g。

鹽酸多西環(huán)素可溶性粉，批號：2017030501，青島康地恩動物藥業(yè)有限公司，混飲，每1L水，雞3g。

1.2 培養(yǎng)基及主要試劑

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、革蘭氏染液，均購于青島海博生物技術有限公司。葡萄糖生化管、乳糖生化管、麥芽糖生化管、蔗糖生化管、甘露醇生化管、硫化氫生化管、葡萄糖磷酸鹽蛋白胨水、枸櫞酸鹽生化管，購于杭州微生物試劑有限公司。靛基質試劑、甲基紅（MR）試驗試劑、VP試驗用試劑甲/乙液，杭州微生物試劑有限公司生產。

1.3 試驗動物及試驗地點

洛陽伊川縣白沙鎮(zhèn)肉雞，16，000只/棟，共兩棟，8日齡時免疫新流二聯(lián)滅活疫苗后發(fā)病，前期使用過恩諾沙星溶液、硫酸新霉素可溶性粉、雙黃連口服液。

2 試驗方法

2.1 臨床癥狀與解剖學觀察

肉雞臨床癥狀表現(xiàn)為精神沉郁、腹瀉、采食量下降，死亡率為0.5%;剖檢主要癥狀為心包炎、肝周炎和氣囊炎，次癥為腎臟表現(xiàn)為花斑腎。因此，初步診斷為大腸桿菌病，腎臟損傷推測可能是由于使用較多藥物所導致。

2.2 實驗室檢查

無菌采集病雞心臟和肝臟于自封袋中標記，采用無菌操作程序，用刀片灼燒心臟和肝臟表面，暴露干凈切面并涂麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板，進行細菌鑒定，37℃恒溫培養(yǎng)24h。判定標準：麥康凱瓊脂平板上出現(xiàn)桃紅色菌落為大腸桿菌陽性。參考大腸埃希菌檢查方法進行IMVIC試驗，進行確診。

2.3 藥物敏感試驗

對于高死亡率肉雞場，采集組織進行藥敏試驗。分別取心臟和肝臟，置于超凈工作臺中無菌平皿內，用熱的刀片在肝臟和心臟表面灼燒，用無菌刀片切一面，鑷子夾住組織后用切面涂布營養(yǎng)瓊脂平皿，然后貼藥敏片，培養(yǎng)24h后觀察結果。

2.4 動物的分組處理與給藥

2棟雞舍共分為2組，一棟按照1g/L劑量給予苦參功勞顆粒，另一棟按照3g/L劑量給予鹽酸多西環(huán)素可溶性粉，集中飲水，連用3d。

2.5 觀察指標

1） 精神狀況觀察 觀察雞群精神狀況并記錄雞只給藥前后采食量。

2） 糞便狀況觀察 觀察雞只糞便，糞便觀察方法：選5個區(qū)域（每個區(qū)域約0.64m2）進行糞便觀察，記錄糞便狀況（黃白色、黃綠色稀便）。糞便評分情況見表1。

3） 死亡率 給藥前和試驗期間統(tǒng)計雞群的死亡率。死亡率=死亡動物數(shù)/試驗雞只總數(shù)×100%

3 統(tǒng)計分析

死亡率用卡方檢驗進行顯著性分析，各組之間顯著性用P值表示，其中P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著。

4 試驗結果

4.1 實驗室檢查結果

肉雞場剖檢癥狀為心包炎、肝周炎，見圖1。鑒別診斷在麥康凱瓊脂平板上生長的菌落為粉紅色，見圖2;IMVIC結果顯示，分離到的細菌可分解葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、甘露醇，產酸產氣，VP試驗陰性，MR試驗陽性，不利用枸櫞酸鹽，可初步確診為大腸桿菌。

4.2 肉雞場藥物敏感試驗結果

藥敏試驗結果表明粘菌素屬于高敏，多西環(huán)素屬于中敏，本試驗中根據(jù)藥敏試驗結果選擇多西環(huán)素作為陽性對照藥物。

4.3 苦參功勞顆粒對雞群糞便和采食量影響

肉雞5個區(qū)域糞便，給藥前每個區(qū)域中個別幾堆黃白色或黃綠色稀便，給藥3d后稀便恢復正常。肉雞采食量逐步上升，給藥結束時采食量基本恢復正常。

4.4 苦參功勞顆粒對肉雞死亡率的影響

苦參功勞顆粒對肉雞死亡率的影響見表2、圖3。

由表2可知，不同給藥組在給藥2d、給藥3d、給藥結束后1d分別與給藥前相比死亡率極顯著降低（P<0.01），同一時間點兩組相比，差異不顯著。

5 分析與討論

臨床上由于飼養(yǎng)管理不當和疫苗免疫失敗，造成雞大腸桿菌病的暴發(fā)，以及抗菌藥物的不合理使用導致細菌耐藥菌株增加、治療失去效果，因此探索替代抗菌藥物治療雞大腸桿菌病的復方中藥，將為獸醫(yī)臨床找到有效替代抗菌藥物防治雞大腸桿菌病具有重要指導意義。由肉雞藥敏試驗可知，目前大腸桿菌類疾病難以控制的根本原因為其對藥物已經產生了耐藥性。宋海霞等[5]對河南致雞腹瀉病原的藥敏試驗表明，病原菌對14種藥物耐藥性很嚴重，以耐10～13種藥居多，且有嚴重的交叉耐藥現(xiàn)象，因此迫切需要根據(jù)中獸藥對其進行治療，苦參功勞顆粒對耐藥大腸桿菌所造成的雞只死亡，有極顯著的降低作用，且苦參功勞顆粒與多西環(huán)素可溶性粉藥物對照組相比，差異不顯著。

國家對食品安全的監(jiān)管越來越嚴格，肉雞出售前用于治療大腸桿菌病引起的腹瀉類的抗生素均不能使用，臨床上可用于治療的中獸藥并不多，本研究結果證明苦參功勞顆粒對肉雞的大腸桿菌病具有較好治療效果，為解決該類問題提供一種新的方案。腹瀉具有極強傳染性的疾病，索朗扎西、王亞芳、張耀東等[6-8]報道大腸桿菌多表現(xiàn)為熱證或以熱為主兼濕，或以濕為主兼熱，治則主要以清熱解毒為主?？鄥⒐陬w粒中含有木香，木香具有行氣止痛、健脾和胃，可用于治療脾胃氣滯等諸癥。晏磊等[9]把苦參功勞顆粒按0.1、0.2和0.4g/kg體重的劑量灌胃給藥，連續(xù)5d，治愈率分別為67.5%、77.5%和80.0%，體重增重率分別為56.91%、63.56%和61.36%。

本試驗中黃色稀便是熱為主兼濕，因此治則以清熱解毒為主，本試驗報告中苦參功勞顆粒主要功能為清熱解毒、兼具有行氣作用，因此符合癥狀，死亡率由0.49%降至0.01%，能極顯著的降低肉雞的死亡率，并且與多西環(huán)素藥物對照組效果相當;給藥結束時肉雞采食量恢復正常水平，雞的糞便恢復正常狀態(tài)。采食量、糞便、雞只死亡率是評價藥物效果重要指標，因此從這三個方面進行評價，苦參功勞顆粒對治療雞的大腸桿菌病有較好的治療作用。

6 小結

苦參功勞顆粒，1g/L，連用3d，對雞大腸桿菌病有較好的治療作用。

參考文獻：

[1] 甘孟侯.中國禽病學[M].北京：中國農業(yè)出版社，2003：167-171.

[2] SAIF Y M.禽病學[M].11版.蘇敬良，高福，索勛，譯.北京：中國農業(yè)出版社，2011：712-726.

[3] SUN H， LI S S， XIE Z J， et al. A novel multidrug resistance plasmid isolated from an Escherichia coli strain resistant to aminoglycosides[J]. J Antimi-crobial Chemother， 2012， 67（7）：1635-1638.

[4] 高艷艷，潘貴珍，李召斌，等.苦參功勞顆粒的體內抗菌試驗研究[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2019，38（1）：38-42.

[5] 宋海霞.河南省雞腹瀉重要病原菌的分離鑒定與耐藥性及PCR檢測方法的研究[D].河南農業(yè)大學，2010.

[6] 索朗扎西.中藥錦珠草顆粒對雞大腸桿菌病的防治試驗[D].西北農林科技大學，2014.

[7] 王亞芳，賈召鋒，秦俊杰，等.中西醫(yī)結合治療雞大腸桿菌病[J].當代畜牧，2014（6）：17-18.

[8] 張耀東，朱偉山，凌征廉，等.中草藥防治雞大腸桿菌病的用藥程序[J].農村養(yǎng)殖技術，2013（3）：63-64.

[9] 晏磊，高艷艷，潘貴珍，等.苦參功勞顆粒對人工感染雞大腸桿菌病的臨床療效研究[J].安徽農業(yè)科學，2019，47（10）：82-85.