江其朋，江連強(qiáng)，龔杰，余佳敏，楊橙，劉東陽，王金峰，陳樹鴻，李石力，杜娟，丁偉，王勇*

1 西南大學(xué)，植物保護(hù)學(xué)院，重慶 400715；2 中國煙草總公司四川省公司涼山州公司，西昌 615000；3 中國煙草總公司四川省公司，成都 610041；4 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，玉米研究所，成都 611130；5 四川大學(xué)，生命科學(xué)學(xué)院，成都 610064

根結(jié)線蟲病是由根結(jié)線蟲（Meloidogynespp.）侵染引起的土傳病害，嚴(yán)重危害作物根系，造成農(nóng)作物減產(chǎn)[1]。20世紀(jì)80年代以來，根結(jié)線蟲病逐步上升成為我國煙草上的主要病害之一[2]。目前，該病在我國主要煙區(qū)均有分布[3]，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)可造成30%～50%煙葉產(chǎn)量損失，危害程度呈逐年上升的趨勢[4]，對該病的監(jiān)測預(yù)警和防治難度較大。研究表明，根結(jié)線蟲病的發(fā)生發(fā)展與土壤的類型[5]、理化性質(zhì)[6-7]、微生物數(shù)量和結(jié)構(gòu)等因子有著密切的關(guān)聯(lián)[8-10]。2020年，涼山州煙草根結(jié)線蟲病發(fā)生面積超過3000 hm2，會(huì)理縣發(fā)生尤為嚴(yán)重，部分感病煙田煙株死棵率超過80%，造成極大的經(jīng)濟(jì)損失和負(fù)面影響。本研究基于對四川省涼山州會(huì)理縣煙草根結(jié)線蟲病土壤數(shù)據(jù)的采集和分析，系統(tǒng)解析了土壤理化性質(zhì)、微生物因子與煙草根結(jié)線蟲病發(fā)生的相關(guān)性，旨在為涼山煙區(qū)根結(jié)線蟲病的監(jiān)測預(yù)警和防控技術(shù)研發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

煙草根結(jié)線蟲病發(fā)病和未發(fā)病土壤以及發(fā)病煙株根系采自四川省涼山州會(huì)理縣黎溪鎮(zhèn)新堰村。采樣點(diǎn)為4塊相鄰但獨(dú)立的發(fā)病和未發(fā)病煙田（共8塊）。發(fā)病煙田前茬作物為玉米，未發(fā)病煙田前茬作物為小麥。種植的煙草品種均為中川208，采用統(tǒng)一漂浮育苗和田間管理，移栽時(shí)間為2020年5月2日，移栽后20 d田間煙株根系出現(xiàn)明顯根結(jié)且煙株有一定矮化（5月22日），移栽后90 d，煙草線蟲病害發(fā)生到達(dá)發(fā)病高峰期，煙葉采收后期（9月上旬），煙田根結(jié)線蟲病發(fā)生趨于穩(wěn)定，按GB/23222—2008《煙草病蟲害分級(jí)及調(diào)查方法》國家標(biāo)準(zhǔn)調(diào)查根結(jié)線蟲病發(fā)生情況，發(fā)病煙田根結(jié)線蟲病發(fā)病率為95.00%，病情指數(shù)為94.78，未發(fā)病地塊煙株無明顯根結(jié)線蟲病癥狀。

發(fā)病和未發(fā)病土壤樣品采集時(shí)間為3月14日，為煙苗移栽和施肥前。采用5點(diǎn)取樣法，每塊煙田采集的5份樣品混勻?yàn)?個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)500 g，發(fā)病和未發(fā)病各4份土壤樣品。發(fā)病煙株根系樣品采集時(shí)間為6月30日，每塊發(fā)病煙田采集3株發(fā)病煙株根系樣品，共12份根系樣品。樣品詳細(xì)信息如表1所示。

表1 土壤及感病煙草根系樣品采集地理信息Tab. 1 Information of soil samples and root of infected tobacco

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 土壤二齡線蟲計(jì)數(shù)

分別稱取挑除雜質(zhì)的發(fā)病和未發(fā)病煙田土壤100 g，采用貝曼漏斗法對土壤中的線蟲進(jìn)行分離，并對二齡線蟲（J2）進(jìn)行計(jì)數(shù)。測定土壤含水量，計(jì)算100 g干土中二齡線蟲數(shù)。

1.2.2 煙草根結(jié)線蟲的形態(tài)學(xué)鑒定

采用直接解剖法，從病株根結(jié)中分離根結(jié)線蟲雌蟲和雄蟲。將分離得到的根結(jié)線蟲雌蟲置45%乳酸溶液中，制備會(huì)陰花紋和雌蟲蟲體前部樣本。將分離得到的根結(jié)線蟲雄蟲采用溫?zé)岱⑺?，?.5%福爾馬林固定液固定。將雌蟲的會(huì)陰花紋、蟲體前部、雄蟲等挑到載玻片上制成臨時(shí)玻片，在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、拍照和測量，記錄線蟲群體口針長度（ST）、背食道腺開口到口針基部球的距離（DGO）、排泄孔到頭端的距離（EP-HE）和口針基球圓寬高比（STKW/STKH），并對照已報(bào)道根結(jié)線蟲的種類特征進(jìn)行形態(tài)學(xué)種類鑒定。

1.2.3 煙草根結(jié)線蟲的分子鑒定

采用淺盤法對根結(jié)線蟲病發(fā)生煙株根系中的線蟲進(jìn)行分離[11]，采用離心法收集線蟲，按照林伯榮等的方法提取樣品線蟲DNA[12]。采用PCR特異擴(kuò)增方法對根結(jié)線蟲種類進(jìn)行分子鑒定，8種常見的根結(jié)線蟲序列特異性擴(kuò)增區(qū)標(biāo)記的特異引物如表2所示，以南方根結(jié)線蟲DNA為陽性對照。

表2 8種常見根結(jié)線蟲鑒定特異性引物Tab. 2 Specific primers for identification of 8 kinds of common root-knot nematodes

25 μL PCR擴(kuò)增體系：10×PCR Buffer 2.5 μL、5 U/μL Taq酶0.5 μL、2.5 mmol/L dNTPs 0.5 μL、20 mmol/L MgCl21.5 μL、10 μmol/L引物各1 μL、DNA模板2 μL，ddH2O補(bǔ)足至25 μL。

PCR擴(kuò)增條件：95℃預(yù)變性5 min；94℃變性15 s，55℃退火15 s，72℃延伸1 min，35個(gè)循環(huán)；72℃再延伸10 min，擴(kuò)增產(chǎn)物于4℃保存。

擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測，利用凝膠成像系統(tǒng)觀測拍照。

1.2.4 土壤理化性質(zhì)分析

土壤理化性質(zhì)測定參照《土壤農(nóng)化分析》[13]。土壤有效磷含量測定采用Olsen法，速效鉀采用醋酸銨浸提-火焰光度法，交換性鈣、交換性鎂采用醋酸銨法，有效銅采用DTPA/HCl浸提-原子吸收光譜法。

pH采用電極法（水土比1:2.5）進(jìn)行測定。稱取10 g室溫自然風(fēng)干后過10目（2 mm）尼龍網(wǎng)篩的土壤樣品于50 mL小燒杯中，加入25 mL超純水，攪拌5 min，靜置30 min，取上清液用pH計(jì)測定土壤溶液pH。

1.2.5 土壤微生物群落結(jié)構(gòu)分析

采用土壤微生物DNA快速提取試劑盒（FastDNA Spin Kit，MP Biomedicals，美國）對土壤樣品微生物總DNA進(jìn)行提取。

將提取的土壤微生物總DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增建立測序文庫。對細(xì)菌16S rRNA特異性V3～V4可變區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增，上游引物為515F（5’-GTGCCAGCMG CCGCGG-3’），下 游 引 物 為806R（5’-GGACT ACHVGGGTWTCTAAT-3’）。對真菌ITS特異性可變區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增，上游引物為ITS1F （5’-CTTGGTCA TTTAGAGGAAGTAA-3’），下游引物為ITS2R（5’-GCT GCGTTCTTCATCGATGC-3’）。

擴(kuò)增結(jié)束后，采用Illumina MiSeq PE300平臺(tái)進(jìn)行測序分析，通過對原始測序數(shù)據(jù)獲得樣本中真實(shí)的序列信息ASVs（Amplicon Sequence Variant），基于ASVs代表序列信息和豐度信息，進(jìn)行后續(xù)的物種分類學(xué)分析、群落多樣性分析、物種組成分析。

1.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析和圖表制作

利用Excel 2016進(jìn)行數(shù)據(jù)整理；使用SPSS 17.0軟件計(jì)算每組數(shù)據(jù)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤，并檢驗(yàn)組間差異顯著性；使用Origin 2019b進(jìn)行繪圖。

2 結(jié)果

2.1 會(huì)理縣黎溪鎮(zhèn)煙草根結(jié)線蟲種類鑒定

對會(huì)理縣黎溪鎮(zhèn)分離的煙草根結(jié)線蟲進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察和拍照，結(jié)果如圖1所示，線蟲ST值、DGO值和EP-HE值等測量參數(shù)如表3所示。雌蟲會(huì)陰花紋背弓高、近方形、線紋平滑到波浪形，側(cè)線不明顯，側(cè)區(qū)線紋有明顯間斷和分岔（圖1b）。雌蟲的會(huì)陰花紋、口針形態(tài)、ST值、DGO值、EP-HE值基本符合南方根結(jié)線蟲的特征，初步鑒定為南方根結(jié)線蟲（Meloidogyne incognita）。

圖1 煙草根結(jié)線蟲雌蟲前體(a)、雌蟲會(huì)陰花紋(b)和雄蟲前體(c)形態(tài)Fig. 1 Morphology characteristics of female (a), perineal pattern(b) and male(c) of tobacco root-knot nematode

表3 煙草根結(jié)線蟲雌蟲群體測量參數(shù)Tab. 3 Parameter of female tobacco root-knot nematodes

進(jìn)一步對黎溪鎮(zhèn)采集的煙草根結(jié)線蟲進(jìn)行分子鑒定，結(jié)果如圖2所示。經(jīng)南方根結(jié)線蟲特異性引物MiSF/MiSD擴(kuò)增后，南方根結(jié)線蟲DNA和檢測樣品DNA均擴(kuò)增出約500 bp的條帶，其他7種根結(jié)線蟲特異性引物均未獲得有效擴(kuò)增條帶，說明會(huì)理縣黎溪鎮(zhèn)煙草根結(jié)線蟲種類為南方根結(jié)線蟲。

圖2 煙草根結(jié)線蟲PCR擴(kuò)增鑒定結(jié)果Fig. 2 PCR amplification results of specific primers of different tobacco nematodes

2.2 影響煙草根結(jié)線蟲病的土壤理化因子分析

會(huì)理縣黎溪鎮(zhèn)煙草根結(jié)線蟲病發(fā)病和未發(fā)病土壤二齡線蟲數(shù)和理化性質(zhì)檢測結(jié)果表明（表4），煙草根結(jié)線蟲病發(fā)病和未發(fā)病煙田土壤中均檢測出二齡根結(jié)線蟲，發(fā)病煙田100 g干土中二齡線蟲數(shù)均值達(dá)312個(gè)，未發(fā)病煙田僅為106個(gè)。

表4 煙草線蟲病發(fā)病與未發(fā)病土壤二齡線蟲數(shù)和理化性質(zhì)Tab. 4 Number of second-stage juvenile (J2) and soil physical and chemical properties of diseased soil and Non-disease soil

發(fā)病土壤理化性質(zhì)數(shù)值與未發(fā)病土壤呈現(xiàn)出明顯的差異。其中，發(fā)病土壤pH較未發(fā)病土壤低0.88（P<0.001）。同時(shí)，發(fā)病土壤的交換性鈣、交換性鎂、有效銅和有效硼含量分別較未發(fā)病土壤低71.76%（P<0.001）、80.90%（P<0.001）、52.25%（P<0.01）和52.50%（P>0.05）。

2.3 影響煙草根結(jié)線蟲病的細(xì)菌群落分析

根結(jié)線蟲病發(fā)病和未發(fā)病的土壤的細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)α多樣性分析結(jié)果如表5所示。線蟲發(fā)病土壤的細(xì)菌ASVs（Amplicon Sequence Variant）總數(shù)、Chao1指數(shù)和Shannon多樣性指數(shù)均低于未發(fā)病土壤，表明發(fā)病土壤細(xì)菌群落的豐富度和多樣性均低于未發(fā)病土壤，但僅Shannon多樣性指數(shù)的組間差異性達(dá)到顯著性水平（P<0.05）。

表5 煙草根結(jié)線蟲病發(fā)病與未發(fā)病土壤細(xì)菌的Alpha多樣性Tab. 5 Bacterial alpha diversity of tobacco root-knot nematodes diseased soil and Non-disease soil

線蟲發(fā)病與未發(fā)病土壤細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)β多樣性分析結(jié)果如圖3所示。發(fā)病土壤共檢測出3668個(gè)細(xì)菌ASVs，歸類到28個(gè)細(xì)菌門，未發(fā)病土壤共檢測出4735個(gè)細(xì)菌ASVs，歸類到35個(gè)門，其中27個(gè)門（864個(gè)ASVs）為發(fā)病和未發(fā)病土壤所共有（圖3a）。發(fā)病土壤的綠彎菌門（Chloroflexi）豐度顯著高于未發(fā)病土壤，而發(fā)病土壤中的芽單胞菌門（Gemmatimonadota）、擬桿菌門（Bacteroidetes）、Myxococcota、Nitrospirota和Methylomirabilota均 顯著低于未發(fā)病土壤（圖3b）。在屬水平上，發(fā)病土壤中的類諾卡氏菌屬（Nocardioides）、芽單胞菌屬（Gemmatimonas）、Gaiella、Haliangium均顯著低于未發(fā)病土壤（圖3c）。

土壤理化性質(zhì)和細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的冗余分析結(jié)果表明，土壤交換性鈣（R2=0.9133，P=0.015）、交換性鎂（R2=0.9441，P=0.017）和有效銅（R2=0.7926，P=0.025）含量以及pH值（R2=0.9441，P=0.017）對整體土壤細(xì)菌群落的結(jié)構(gòu)產(chǎn)生顯著影響，同時(shí)，這4種關(guān)鍵的土壤理化性質(zhì)對芽單胞菌屬（Gemmatimonas）和類諾卡氏菌屬（Nocardioides）有較高的正相關(guān)性（圖3d）。

圖3 煙草根結(jié)線蟲病發(fā)病和未發(fā)病土壤細(xì)菌群落組成及其影響因子Fig. 3 Bacterial community composition of tobacco root-knot nematodes diseased soil and Non-disease soil and the influence factors

2.4 影響煙草根結(jié)線蟲病的真菌群落分析

根結(jié)線蟲病發(fā)病和未發(fā)病的土壤的真菌群落結(jié)構(gòu)α多樣性分析結(jié)果如表6所示。線蟲發(fā)病土壤的真菌ASVs總數(shù)、Chao1指數(shù)和Shannon多樣性指數(shù)均低于未發(fā)病土壤，表明發(fā)病土壤真菌群落的豐富度和多樣性均低于未發(fā)病土壤，但僅Chao1指數(shù)的組間差異性達(dá)到顯著性水平（P<0.05）。

表6 煙草根結(jié)線蟲病發(fā)病與未發(fā)病土壤真菌的Alpha多樣性Tab. 6 Fungal alpha diversity of tobacco root-knot nematodes diseased soil and Non-disease soil

根結(jié)線蟲病發(fā)病與未發(fā)病土壤真菌群落結(jié)構(gòu)β多樣性分析結(jié)果如圖4所示。發(fā)病土壤共檢測出653個(gè)真菌ASVs，歸類到10個(gè)真菌門，未發(fā)病土壤共檢測出987個(gè)真菌ASVs，歸類到12個(gè)門，其中9個(gè)門（260個(gè)ASVs）為發(fā)病和未發(fā)病土壤所共有（圖4a）。發(fā)病土壤與未發(fā)病土壤中，子囊菌門（Ascomycota）均為豐度最高的真菌門，豐度超過80%。發(fā)病土壤的Basidiomycota門、鐮刀菌屬（Fusarium）和赤霉菌屬（Gibbererlla）豐度均顯著低于未發(fā)病土壤（圖4b、圖4c）。

土壤理化性質(zhì)和真菌群落結(jié)構(gòu)的冗余分析結(jié)果表明，土壤交換性鎂（R2=0.9327，P=0.012）和交換性鈣（R2=0.8920，P=0.016）含量以及pH值（R2=0.7914，P=0.027）對整體土壤真菌群落的結(jié)構(gòu)產(chǎn)生顯著的影響，同時(shí)，這3種關(guān)鍵的土壤理化性質(zhì)與赤霉菌屬（Gibbererlla）、鐮刀菌屬（Fusarium）、Ramophialophora和新赤殼屬（Neocosmospora）具有較高的正相關(guān)性（圖4d）。

圖4 煙草根結(jié)線蟲病發(fā)病和未發(fā)病土壤真菌群落組成及其影響因子Fig. 4 Fungal community composition of tobacco root-knot nematodes diseased soil and Non-disease soil and the influence factors

2.5 根結(jié)線蟲與土壤理化性質(zhì)和微生物群落的互作關(guān)系分析

土壤中二齡線蟲數(shù)與土壤理化性質(zhì)和細(xì)菌、真菌主要類群的相關(guān)性分析結(jié)果如圖5所示。結(jié)果表明，交換性鎂（R=-0.945，P<0.01）、交換性鈣（R=-0.952，P<0.01）、有效銅（R=-0.977，P<0.01）含量和pH值（R=-0.865，P<0.01）與土壤中二齡線蟲數(shù)呈顯著負(fù)相關(guān)（P<0.01），相關(guān)性均高于0.86，有機(jī)質(zhì)含量與二齡線蟲數(shù)顯著正相關(guān)（R=0.856，P<0.01，圖5a）。細(xì)菌群落Chao1指數(shù)（R=0.656，P>0.05）、Shannon指數(shù)（R=0.688，P>0.05）和ASV數(shù)（R=0.077，P>0.05）與二齡線蟲數(shù)正相關(guān)，但均未達(dá)到顯著性水平。真菌群落Chao1指數(shù)與二齡線蟲數(shù)顯著負(fù)相關(guān)（R=-0.792，P<0.05），Shannon指 數(shù)（R=-0.632，P>0.05）和ASV數(shù)（R=-0.162，P>0.05）也與二齡線蟲數(shù)呈負(fù)相關(guān)，但未達(dá)到顯著性水平。

細(xì)菌群落芽單胞菌門（Gemmatimonadota，R= -0.865，P<0.01）、類諾卡氏菌屬（Nocardioides，R=-0.729，P<0.05）、芽單胞菌屬（Gemmatimonas，R=-0.766，P<0.05）、Gaiella（R=-0.902，P<0.01）和Haliangium（R=-0.870，P<0.01）的相對豐度與二齡線蟲數(shù)呈顯著負(fù)相關(guān)，而綠彎菌門（Chloroflexi，R=0.882，P<0.01）、Bryobacter（R=0.921，P<0.01）、Conexibacter（R=0.879，P<0.01）和 慢生 根 瘤 菌 屬（Bradyrhizobium，R=0.912，P<0.01）與二齡線蟲數(shù)呈顯著正相關(guān)。真菌群落擔(dān)子菌門（Basidiomycota，R=-0.792，P<0.05）、鐮 刀 菌 屬（Fusarium，R=-0.768，P<0.05）、Saitozyma（R=-0.723，P<0.05）和 赤 霉 菌 屬（Gibberella，R=-0.851，P<0.05）與土壤中二齡線蟲數(shù)呈顯著負(fù)相關(guān)。

3 討論

3.1 土壤微生物群落與煙草根結(jié)線蟲病發(fā)生的關(guān)系

豐富度高、多樣性強(qiáng)且處于動(dòng)態(tài)平衡的土壤微生物區(qū)系能有效抑制土壤中病原微生物的數(shù)量和活性，減輕土傳病害的發(fā)生[14-15]，而土傳病害的發(fā)生往往與土壤微生物群落結(jié)構(gòu)失衡有著密切關(guān)聯(lián)[16-17]。研究表明，土壤改良能顯著提高土壤微生物多樣性，促進(jìn)食細(xì)菌和食真菌類線蟲的種類和數(shù)量，從而抑制植食性線蟲的繁殖，實(shí)現(xiàn)對根結(jié)線蟲病的有效控制[18-19]。本研究發(fā)現(xiàn)，煙草根結(jié)線蟲病未發(fā)生土壤的細(xì)菌和真菌豐富度和多樣性均高于發(fā)病土壤，這與祝明亮[8]和冀宇等[20]的研究結(jié)果相符。一些土壤微生物類群在整個(gè)抑病微生物群落中具有突出的地位，對根結(jié)線蟲的生長和繁殖具有顯著的抑制作用[21-22]。黃闊等對影響四川涼山地區(qū)煙草根結(jié)線蟲病發(fā)生的微生物因子分析結(jié)果表明，假單胞菌屬（Pseudomonas）與煙草根結(jié)線蟲病發(fā)生呈負(fù)相關(guān)，Bryobacter、錐毛殼屬（Coniochaeta）與煙草根結(jié)線蟲病發(fā)生呈正相關(guān)[1,20]。本研究發(fā)現(xiàn)的可能具有抑制根結(jié)線蟲病發(fā)生功能的關(guān)鍵微生物類群在根結(jié)線蟲病未發(fā)病土壤中的相對豐度均高于發(fā)病土壤，且其相對豐度與土壤二齡線蟲數(shù)呈顯著負(fù)相關(guān)，其中，細(xì)菌類群芽單胞菌屬（Gemmatimonas）、類諾卡氏菌屬（Nocardioides）和真菌類群鐮刀菌屬（Fusarium）和赤霉菌屬（Gibbererlla）等均未見報(bào)道，但芽單胞菌屬（Gemmatimonas）[23]和赤霉菌屬（Gibbererlla）[24]等曾多次被報(bào)道在煙草青枯病未發(fā)病的土壤中豐度更高，被認(rèn)為可能與維護(hù)土壤健康有關(guān)[25]。因此，相關(guān)結(jié)論有待進(jìn)一步研究確認(rèn)。

3.2 土壤理化性質(zhì)與煙草根結(jié)線蟲病以及土壤微生物群落的關(guān)系

土壤pH[26]、交換性鈣等土壤理化性質(zhì)能塑造土壤微生物的群落結(jié)構(gòu)[27]，對植物病害產(chǎn)生重要影響[28]。本研究和施河麗等[7]的研究均發(fā)現(xiàn)，煙草根結(jié)線蟲病發(fā)病和未發(fā)病的土壤理化因子存在明顯的差異，未發(fā)病土壤交換性鈣和有效銅含量均顯著高于發(fā)病土壤。呂和平等[29]的研究表明，土壤中添加含銅鹽類物質(zhì)對土壤中根結(jié)線蟲卵囊、卵孵化及其幼蟲存活均有不同程度的影響，這從側(cè)面說明有效銅與根結(jié)線蟲病的發(fā)生可能存在密切的關(guān)聯(lián)。同時(shí)，本研究還進(jìn)一步揭示了土壤交換性鈣、交換性鎂、有效銅和pH值與土壤中二齡線蟲數(shù)呈顯著負(fù)相關(guān)，且土壤理化因子顯著影響土壤細(xì)菌和真菌的微生物群落組成和多樣性，但對于土壤理化性質(zhì)與二齡線蟲以及土壤微生物的相互作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

本研究探究的影響煙草根結(jié)線蟲病發(fā)生的關(guān)鍵因子僅基于對會(huì)理縣黎溪鎮(zhèn)相關(guān)數(shù)據(jù)的分析，具有一定的局限性，后續(xù)需進(jìn)一步開展相關(guān)驗(yàn)證研究，明確關(guān)鍵因子與病原根結(jié)線蟲和根結(jié)線蟲病發(fā)生的關(guān)系。

4 結(jié)論

本研究通過分析涼山州會(huì)理縣發(fā)病土壤和未發(fā)病土壤的二齡線蟲數(shù)、土壤理化性質(zhì)和微生物群落組成，找到了影響煙草根結(jié)線蟲病發(fā)生的關(guān)鍵因子。結(jié)果表明：（1）土壤交換性鈣、交換性鎂、有效銅和pH值含量偏低有利于煙草根結(jié)線蟲病的發(fā)生；（2）土壤中細(xì)菌芽單胞菌屬（Gemmatimonas）、類諾卡氏菌屬（Nocardioides）、真菌鐮刀菌屬（Fusarium）和赤霉菌屬（Gibbererlla）等微生物類群可能對煙草根結(jié)線蟲和根結(jié)線蟲病具有一定抑制作用。本研究為涼山煙區(qū)根結(jié)線蟲病的監(jiān)測預(yù)警和及時(shí)有效防控提供理論依據(jù)，后續(xù)可對這些關(guān)鍵因子開展進(jìn)一步的驗(yàn)證研究，以明確其影響根結(jié)線蟲病發(fā)生的內(nèi)在機(jī)制。