孫軍華 韓祥林

（泰州市動物疫病預(yù)防控制中心，江蘇泰州 225300）

為做好生豬重大疫病強制免疫工作，探索生豬便捷有效的強制免疫方式，有效降低生豬強制免疫的勞動強度，提高生豬免疫密度和免疫質(zhì)量，江蘇省泰州市動物疫病預(yù)防控制中心針對本地區(qū)防疫工作實際情況，自2014年起，組織人員對生豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病強制免疫“三針同免”技術(shù)開展了田間試驗、推廣應(yīng)用等一系列研究，檢驗該技術(shù)的可行性、實用性、有效性，確保提供準(zhǔn)確可靠的田間試驗數(shù)據(jù)和決策依據(jù)，為全市的生豬重大動物疫病強制免疫工作提供科學(xué)的技術(shù)支撐。

1 免疫效力試驗

1.1 免疫豬場選擇及操作方法

在泰州海陵區(qū)某豬場，選取斷奶仔豬20頭，每組10頭，品種一致，體重相近，臨床健康，平均約28日齡開展試驗，經(jīng)檢測藍(lán)耳病病原陰性（RT-PCR），豬瘟抗原陰性（夾心ELISA），口蹄疫病原學(xué)陰性（RT-PCR）[1]。根據(jù)泰州地區(qū)強制免疫工作實際，選擇了高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗（江西株和天津株）、豬口蹄疫O型合成肽疫苗、豬瘟傳代細(xì)胞源活疫苗進(jìn)行防疫。試驗分組見表1。

表1 免疫試驗分組及疫苗使用情況

1.2 試驗結(jié)果及分析

由表2可知，第一組免疫高致病性豬藍(lán)耳病前，母源抗體陽性，在首免后21 d抗體水平達(dá)到峰值，之后逐步下降，但一直在保護(hù)水平之上；第二組母源抗體陽性，在首免后28 d抗體水平達(dá)到峰值，之后逐步下降略有波動，但一直在保護(hù)水平之上[1]。

表2 高致病性豬藍(lán)耳病免疫抗體生成情況

由表3可知，第一組在首免豬瘟疫苗后14 d抗體水平即能達(dá)標(biāo)，并在42 d（二免后14 d）后達(dá)到峰值，之后緩慢下降，但保持較高水平；第二組在首免豬瘟疫苗后14 d抗體水平即能達(dá)標(biāo)，并在49 d（二免后21 d）后達(dá)到峰值，之后緩慢下降，但一直保持較高水平[1]。

表3 豬瘟免疫抗體生成情況

由表4可知，第一組口蹄疫母源抗體陽性，首免口蹄疫疫苗后一直提供有效保護(hù)，在42 d（二免后14 d）后達(dá)到峰值，之后緩慢下降，但保持較高水平；第二組母源抗體陽性，首免口蹄疫疫苗后抗體水平持續(xù)上升，在58 d（二免后28 d）達(dá)到峰值，并一直保持[1]。

表4 口蹄疫免疫抗體生成情況

免疫效力試驗顯示，試驗豬疫苗免疫后抗體水平一直保持較高水平，免疫效果較好，按照現(xiàn)行的免疫程序執(zhí)行，相互之間沒有效力干擾，在二免后14～28 d抗體水平即能達(dá)到高峰，并保持高水平保護(hù)[1]，免疫效力試驗表明“三針同免”技術(shù)是可行的。

2 第一次擴(kuò)大試驗

2.1 試驗豬場及疫苗選擇

泰州市動物疫病預(yù)防控制中心于2015年4月在全市選擇了19個生豬養(yǎng)殖較多的鄉(xiāng)鎮(zhèn)，村級動物防疫員專業(yè)素質(zhì)相對較高，近年來未出現(xiàn)過較大動物疫情的21個村作為擴(kuò)大試驗的試點村，同時確定了21名防疫員具體負(fù)責(zé)實施免疫工作，選用江蘇省中標(biāo)疫苗生產(chǎn)廠家供應(yīng)的豬口蹄疫疫苗（合成肽苗和206佐劑滅活苗）、豬瘟疫苗（傳代細(xì)胞源苗和耐熱普通細(xì)胞弱毒苗）、高致病性豬藍(lán)耳病疫苗（疫苗江西株和天津株弱毒苗），并根據(jù)本地實際使用的疫苗情況選擇合適的分組（見表5）進(jìn)行免疫注射。

表5 擴(kuò)大試驗分組及疫苗使用情況

2.2 第一次擴(kuò)大試驗豬群的抗體檢測

各地在選擇合適的分組后，按照相關(guān)防疫工作要求，規(guī)范開展免疫，及時觀察有無明顯的臨床副反應(yīng)，給生豬佩戴免疫耳標(biāo)，并及時完成免疫記錄（含免疫時間、免疫豬頭數(shù)、疫苗批號、生產(chǎn)廠家、耳標(biāo)號碼等）和副反應(yīng)記錄。整個試驗過程中，未發(fā)現(xiàn)有異常情況。按照制定的試驗方案要求，在二免28 d后，及時采集血樣，由泰州市動物疫病控制中心組織技術(shù)人員對所有樣品進(jìn)行免疫抗體檢測，共檢測豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病、口蹄疫免疫抗體2 202份次。結(jié)果顯示，免疫豬的高致病性藍(lán)耳病抗體的合格率最低為80%，最高為100%，整體均值為91.29%，效果優(yōu)秀。免疫豬瘟疫苗的合格率最低為53.33%，最高為100%，整體為84.74%，效果良好。免疫口蹄疫206苗后合格率最低為16%，最高為100%，整體為56.96%，效果較差；免疫口蹄疫合成肽后合格率最低為83.33%，最高為100%，整體為97.79%，效果優(yōu)秀。

2.3 第一次擴(kuò)大試驗結(jié)果與分析

從免疫和抗體檢測結(jié)果分析，部分試點村免疫豬瘟疫苗和口蹄疫206疫苗抗體不合格的原因有：⑴豬瘟疫苗在一免二免時使用不同類型的疫苗、免疫劑量為1頭份（可能不足）；⑵口蹄疫206疫苗抗體不合格的原因可能是疫苗免疫劑量不足；⑶還可能是疫苗保管不當(dāng)、免疫操作不規(guī)范、生豬個體差異等原因造成免疫效果不理想。因此，可以推廣豬瘟疫苗、高致病性藍(lán)耳病疫苗、口蹄疫合成肽苗“三針同免”，豬瘟疫苗、高致病性藍(lán)耳病疫苗、口蹄疫206疫苗“三針同免”的研究有待下一步試驗中確認(rèn)。

3 第二次擴(kuò)大試驗

3.1 第二次擴(kuò)大試驗疫苗選擇分組

泰州市動物疫病預(yù)防控制中心于2016年3月組織實施了第二次擴(kuò)大試驗，并具體負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)、制定實施方案、技術(shù)培訓(xùn)與指導(dǎo)、樣品檢測、數(shù)據(jù)分析及結(jié)果評估，在每個區(qū)（縣）選取3個村進(jìn)行推廣應(yīng)用試驗，并負(fù)責(zé)指導(dǎo)做好免疫、建檔和采樣等工作，免疫情況如實填寫在統(tǒng)一制作的采樣單上，采集血樣時樣品編號按要求填寫，保證唯一性。具體疫苗分組如下，各地可根據(jù)本地使用的疫苗情況選擇合適的疫苗組合。豬瘟活疫苗、高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗用一種稀釋液等量混合稀釋后一次性注射到豬耳后頸部一側(cè)肌肉，另外一側(cè)肌肉注射豬口蹄疫疫苗[2]。免疫注射要科學(xué)、規(guī)范、安全操作，一免和二免要使用同一類型的疫苗，劑量按照疫苗說明書使用劑量進(jìn)行，原則上每頭豬免疫劑量為1頭份，豬瘟疫苗和口蹄疫206滅活疫苗免疫劑量可加大到2頭份，同時做好記錄。

表6 第二次擴(kuò)大試驗的疫苗使用分組

3.2 免疫抗體合格率檢測結(jié)果

二免28 d后，由各市（區(qū)）疫病控制中心負(fù)責(zé)采集免疫豬只的血清樣品，填寫采樣單，送泰州市疫病控制中心進(jìn)行免疫抗體檢測。共采集18個推廣應(yīng)用村和4個非推廣應(yīng)用村的生豬血樣740份樣品進(jìn)行了抗體水平檢測。在檢測中，免疫高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗（江西株）的22個村豬群中，有72.73%的豬群藍(lán)耳病疫苗的抗體合格率達(dá)到100%，有1個村的豬群藍(lán)耳病抗體水平僅53.33%，整體的疫苗免疫抗體合格率水平在96.49%，達(dá)到效果優(yōu)秀。22個村的豬群中，免疫豬瘟疫苗后抗體合格率最低為80%，最高為100%，整體為91.08%，效果優(yōu)秀。22個村的豬群中，免疫口蹄疫合成肽疫苗后的抗體合格率最低為95%，最高為100%，整體為99.66%，效果優(yōu)秀。有4個村的豬群免疫了口蹄疫206疫苗，免疫后的抗體合格率最低為27.5%，最高為65%，整體為49.38%，效果較差。

3.3 第二次擴(kuò)大試驗結(jié)果分析

從免疫情況反饋和抗體檢測結(jié)果分析，個別村的豬瘟免疫抗體不合格的原因為疫苗保存不當(dāng)；口蹄疫206疫苗抗體不合格的原因不明，有待進(jìn)一步分析探討。綜合2次擴(kuò)大試驗結(jié)果分析，按照本地生豬疫苗使用實際情況，在全市推廣豬瘟疫苗、高致病性豬藍(lán)耳病疫苗、口蹄疫（合成肽苗）疫苗“三針同免”技術(shù)模式是切實可行、科學(xué)有效的。

4 “三針同免”的全面推廣應(yīng)用

結(jié)合泰州市各地實際情況，2017年繼續(xù)進(jìn)行了“三針同免”技術(shù)模式的推廣應(yīng)用，全市生豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病的群體免疫抗體水平均保持在85%以上，成效明顯。2018年和2019年由于非洲豬瘟疫情的影響，生豬產(chǎn)業(yè)損失巨大，期間未能及時統(tǒng)計分析相關(guān)數(shù)據(jù)。2020年在加快推進(jìn)恢復(fù)生豬生產(chǎn)的要求下，泰州市動物疫病預(yù)防控制中心將“三針同免”技術(shù)列入了2020年全市十大新型農(nóng)業(yè)推廣技術(shù)之一，在全市全面推廣應(yīng)用。

4.1 疫苗選擇

生豬在28日齡時用高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗（JXA1-R株或TJM-F92株）、豬瘟活疫苗（細(xì)胞源或傳代細(xì)胞源）、O型口蹄疫合成肽苗免疫；56日齡用豬瘟活疫苗（細(xì)胞源或傳代細(xì)胞源）、O型口蹄疫合成肽苗加強免疫[3]。

4.2 免疫操作

免疫注射時規(guī)范操作方法，一免和二免要使用同一類型的疫苗，劑量按照疫苗說明書使用劑量進(jìn)行。首次免疫時，高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗和豬瘟疫苗可稀釋至同一瓶中，也可分別稀釋分點注射。防疫人員要做好生物安全防護(hù)措施，免疫注射操作要科學(xué)、規(guī)范、安全。免疫后應(yīng)注意觀察生豬有無明顯的臨床副反應(yīng)，及時做好免疫記錄，佩戴免疫耳標(biāo)。

4.3 采樣檢測

二免注射28 d后，由各地疫病控制中心按照要求，規(guī)范采集樣品，填寫采樣單，進(jìn)行相關(guān)病種的免疫抗體水平檢測，科學(xué)、真實、準(zhǔn)確地評價免疫效果。同時積極分析、研究不同種類疫苗在強制免疫后的免疫效果差異。

4.4 監(jiān)測結(jié)果

據(jù)各區(qū)（縣）春秋防控集中檢測和日常檢測結(jié)果統(tǒng)計，2020年全年各地累計采集生豬血樣2 500余份[4,5]，平均免疫抗體水平分別為：生豬O型口蹄疫抗體水平95.5%、豬瘟抗體水平91.3%、高致病性豬藍(lán)耳病抗體水平98.6%。同時市級在春秋兩季，通過隨機(jī)采樣集中監(jiān)測生豬血樣420份次，平均免疫抗體水平分別為：生豬O型口蹄疫抗體水平95.8%、豬瘟抗體水平94.5%、高致病性豬藍(lán)耳病抗體水平97.2%。全市生豬三大疫病免疫效果優(yōu)秀，不同種類和廠家的強制免疫疫苗間的免疫效果差異性不顯著。

5 推廣應(yīng)用效果小結(jié)

經(jīng)過多年的探索試驗和總結(jié)推廣，截至2020年年底，“三針同免”技術(shù)在全市85%以上的年出欄生豬500頭以下的中小型生豬養(yǎng)殖場（戶）全部進(jìn)行了推廣應(yīng)用；年出欄生豬500頭以上的規(guī)模豬場約100余家結(jié)合本場實際進(jìn)行了推廣應(yīng)用。近年來的實驗室檢測結(jié)果表明，全市生豬三大疫病整體免疫抗體水平保持較好，均達(dá)到并超過了部省的統(tǒng)一要求。同時，據(jù)基層獸醫(yī)防疫人員反饋，該技術(shù)有效降低強制免疫勞動強度，生豬免疫密度有效提升，免疫效果有效保持在較高水平。綜上所述，生豬豬瘟疫苗、高致病性豬藍(lán)耳病疫苗、口蹄疫（合成肽苗）疫苗“三針同免”技術(shù)在泰州市推廣應(yīng)用取得了良好的效果，可以持續(xù)穩(wěn)步推廣應(yīng)用。