李偉生,謝敏靜
(珠海市人民醫(yī)院高欄港醫(yī)院,廣東 珠海 519050)
下呼吸道感染是兒科患者的常見病,高居5歲以下兒童死亡原因的第二位[1]。采用呼吸道感染患兒的病原檢測(cè)能識(shí)別呼吸道感染病原的流行現(xiàn)狀和分布特征,為臨床診斷和精準(zhǔn)治療提供科學(xué)依據(jù)。與傳統(tǒng)病原學(xué)、核酸分離培養(yǎng)檢測(cè)相比,基于液相芯片技術(shù)的核酸檢測(cè)具有效率高、通量大的優(yōu)勢(shì)[2]。本研究對(duì)我院收治的312例下呼吸道感染患兒采用液相芯片技術(shù)進(jìn)行13種呼吸道病原體核酸檢測(cè),以期為呼吸道感染的臨床診斷提供科學(xué)參考。
選取2019年11月—2020年10月珠海市人民醫(yī)院高欄港醫(yī)院收治的312例下呼吸道感染患兒為研究對(duì)象,男176例,女136例。
納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合下呼吸道感染診斷標(biāo)準(zhǔn);(2)臨床檢查體內(nèi)炎性指標(biāo)升高,胸片顯示肺部病變;(3)患兒家屬知情同意。
排除標(biāo)準(zhǔn):(1)非感染原因致胸片顯示肺部病變;(2)肝腎功能不全;(3)合并其他嚴(yán)重器質(zhì)性病變。
入院當(dāng)日采集患兒咽拭子,置于2 mL保存液中4℃保存,于24 h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。用核酸提取試劑提取患兒的DNA和RNA,提取完成后,將待檢核酸與13項(xiàng)呼吸道病原體核酸檢測(cè)試劑盒(RNA/DNA)擴(kuò)增試劑混合后進(jìn)行PCR擴(kuò)增,操作按照擴(kuò)增試劑盒說明書進(jìn)行。進(jìn)行DNA 檢測(cè)的病原體為:SP、CMV、博卡病毒(hBoV)、MC、Hi、ADV、MP、BP;進(jìn)行RNA檢測(cè)的病原體為:RSV、鼻病毒(HRV)、副流感病毒(HIV)、INF-A、乙型流感病毒(INF-B)。將已擴(kuò)增樣本進(jìn)行雜交檢測(cè),開啟Luminex Magpix液相芯片檢測(cè)平臺(tái),在核酸雜交試劑加入擴(kuò)增產(chǎn)物,通過PCR儀行雜交顯色反應(yīng)。顯色結(jié)束后,將樣品放入孔板加熱模塊,運(yùn)行待檢測(cè)批次并完成檢測(cè)。
將患兒按年齡劃分標(biāo)準(zhǔn)分為<1歲組、1~3歲組、3~5歲組和≥5歲組,比較13種呼吸道病原體的檢出情況、混合感染及不同年齡組間病原體的檢出情況。混合感染率=病原體檢出2種及以上病原體陽(yáng)性例數(shù)/該病原體檢出陽(yáng)性總數(shù)[3]。
采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)數(shù)資料用例數(shù)(%)表示,行χ2或秩和檢驗(yàn);P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
在312例患兒中,有215例患兒至少有一種呼吸道病原體檢測(cè)陽(yáng)性,陽(yáng)性檢出率為68.91%,其中檢出單一病原體陽(yáng)性患兒134例,占42.94%,檢出兩種及兩種以上病原體陽(yáng)性患兒81例,占25.96%。檢出率最高的3種病原體為SP、CMV和RSV。13種呼吸道病原體檢出中,混合感染率排名前5位的病原體為MP、BP、Hi、INF-A和MC,見表1。
表1 13種呼吸道病原體檢出情況 例
不同年齡組的SP、CMV、RSV、INF-A、ADV陽(yáng)性檢出率差異顯著(P<0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。低年齡段患兒常見的病原體為CMV、RSV,SP的檢出率隨患兒年齡的增長(zhǎng)而升高。高年齡段患兒常見的病原體為INF-A、ADV。不同年齡組間(<1歲組、1~3歲組、3~5歲組、≥5歲組)其他病原體的陽(yáng)性檢出率差異不顯著(P>0.05),見表2。
表2 不同年齡組病的病原體檢出情況 例(%)
建立一種能同時(shí)檢測(cè)多種呼吸道病原體的快速有效的檢測(cè)技術(shù)對(duì)兒童呼吸道感染的臨床診斷具有十分重要的臨床價(jià)值。本次檢測(cè)結(jié)果顯示,215例患兒中至少有一種呼吸道病原體檢測(cè)陽(yáng)性,陽(yáng)性檢出率為68.91%,說明基于液相芯片技術(shù)的核酸檢測(cè)具有較高的陽(yáng)性檢測(cè)率。SP、CMV和RSV是檢出率最高的3種病原體,提示細(xì)菌和病毒是本地區(qū)呼吸道感染患兒的主要病原體,臨床診斷應(yīng)在參照血常規(guī)、X線檢查的基礎(chǔ)上重視病原學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果,科學(xué)合理使用抗生素[4]。檢出兩種及兩種以上病原體陽(yáng)性患兒81例,占25.96%,提示呼吸道感染患兒存在多重呼吸道病原體混合感染的情況。混合感染率排名前5位的病原體為MP、BP、Hi、INF-A和MC,可能是因?yàn)樵l(fā)病原體感染后損壞了呼吸道黏膜的防護(hù)屏障,其他病原體入侵更容易,或者是患兒感染后體質(zhì)變差,自身抵抗力下降。
不同年齡組間SP、CMV、RSV、INF-A、ADV的陽(yáng)性檢出率存在顯著差異。低年齡段患兒常見的病原體為CMV、RSV,可能與低年齡患兒自身免疫力相對(duì)較低有關(guān)[5]。SP的檢出率隨年齡增長(zhǎng)而升高,高年齡段患兒常見的病原體為INF-A、ADV,可能受機(jī)體呼吸道正常菌群建立過程的影響。
基于液相芯片技術(shù)的核酸檢測(cè)效率高、通量大,13種呼吸道病原體核酸檢測(cè)能快速有效地滿足呼吸道病原體檢測(cè)的需要,具有檢測(cè)簡(jiǎn)單、敏感度高等優(yōu)點(diǎn),可用于輔助診斷兒童呼吸道感染的相關(guān)疾病。在臨床診斷時(shí)要注意不同年齡組間病原體的差異和多重病原體感染。