p16 與PIK3CA、PIK3CB 突變在食管鱗癌中的表達及臨床意義

溫菲菲 何 雙 許曉陽 李揚揚 吳淑華

（濱州醫(yī)學院附屬醫(yī)院，山東 濱州 256603）

0 引言

PI3K/AKT 通路作為重要途徑之一， 多類腫瘤的發(fā)生與其失調(diào)有關(guān)。 PI3KCA、PIK3CB 編碼的p110α、p110β 存在于機體內(nèi)， 當其表達增多，PI3K/AKT 通路失調(diào)[1]。 在許多HPV 相關(guān)人類癌癥中，亦存在PI3K/Akt 途徑的失調(diào)。 Syrjanen 等人第一次發(fā)現(xiàn)部分食管癌的發(fā)生與HPV 有關(guān)[2]。 在高危HPV 不斷感染中，HPV E6/E7 的表達增加可能會干擾細胞周期控制，使pRb 失活，導致p16 表達增加。 因此，針對 p16 表達的免疫組化（IHC）被作為診斷是否有HPV 感染的替代檢法[3]。

本研究在食管正常黏膜、鱗癌病例中，檢測p16、PI3Kp110α、p110β 蛋白的表達差異及相關(guān)性， 探討p16 與 PI3Kp110α、p110β 蛋白的作用，以期發(fā)現(xiàn)新的靶標與思路指導食管鱗癌的治療。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集2014 年1 月至2015 年12 月于濱醫(yī)附院病理科根治切除的食管鱗癌病例137 例、 正常黏膜32例。 由2 位消化亞專科病理醫(yī)生參照《WHO 消化系統(tǒng)腫瘤分類》（2019 版）[4]，對其閱片分類。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學

應(yīng)用免疫組化染色， 一抗?jié)舛?PI3Kp110α （1∶150）、p110β（1∶250）、p16 應(yīng)用即用型工作液。 陰性對照為 PBS；p16、PI3Kp110α、p110β 指標的陽性對照分別為宮頸癌切片、正常腦組織切片、扁桃體切片。

1.2.2 結(jié)果判斷

p16 陽性在鱗癌細胞質(zhì)和細胞核中；PI3Kp110α、p110β 陽性在鱗癌的細胞膜和細胞質(zhì)。 對所染切片，鏡下觀察10 個高倍視野。 p16 指標評判標準：鱗癌細胞陽性表達面積≥70%判定為陽性。 PI3Kp110α、p110β 的評判標準如表 1 所示。

表1 PI3Kp110α、p110β 的免疫組化評判標準表

1.3 統(tǒng)計學分析

統(tǒng)計學處理采用SPSS 23.0 軟件。 正常食管黏膜與鱗癌組間蛋白的表達采用 χ2檢驗；p16、PI3Kp110α、p110β 與各臨床病理因素間、 不同蛋白間的表達的相互關(guān)系均應(yīng)用Spearman 相關(guān)性分析； 顯著性檢驗標準為P≤0.05。

2 結(jié)果

2.1 p16、PI3Kp110α、p110β 在食管鱗癌與正常黏膜中的表達差異

采用 χ2檢驗，p16、PI3Kp110α、p110β 在鱗癌中的表達，與正常黏膜相比，表達量顯著增多（P＜0.05，見圖1、表2）。

圖1 p16、PIKp110α、p110β 在食管鱗癌中的表達

表2 p16、PI3Kp110α、p110β 在食管鱗癌中的表達差異

2.2 食管鱗癌中 p16、PI3Kp110α、p110β 與臨床特征的相關(guān)性

在食管鱗癌中，p16 的表達與發(fā)病部位、 分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性。 其中相對于食管中段與下段，頸段與上段p16 表達高，差異均具有顯著性（P<0.05）。PI3Kp110α、p110β 與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著正相關(guān)（P＜0.05，見表 3）。

表3 p16、PI3Kp110α、p110β 與臨床特征的相關(guān)性

2.3 p16 與 PI3Kp110α、p110β 表達的關(guān)系

p16 與PI3Kp110α 在食管鱗癌中有顯著相關(guān)性（r=0.177，P=0.039）； 然而，p16 與 PI3Kp110β 在食管鱗癌中的表達無相關(guān)性（P=0.760，見表4）。

表4 p16 與 PI3Kp110α、p110β 表達的相關(guān)性

3 討論

食管癌是一種極具侵襲性的腫瘤，由于缺乏特定的初始癥狀，通常在晚期診斷，5 年生存率僅為15%～34%[5，6]。 食管鱗癌的治療主要是手術(shù)輔以放化療，但對于臨床分期Ⅲ~Ⅳ期的患者，預后仍然較差[7]。 因此，研究能夠預警食管癌發(fā)生的分子指標迫在眉睫。 本實驗中，鱗癌組織中p16 蛋白的陽性率為34.3%，明顯高于食管正常黏膜的陽性率0， 表明食管鱗癌的發(fā)生與HPV 的感染有關(guān)。 同時分析顯示，p16 與食管部位有明顯相關(guān)性。 筆者認為，食管頸段與上段距離外環(huán)境近， 更易感染HPV。 分化程度高的食管鱗癌病例中，p16 的表達高，提示在HPV 感染誘導的腫瘤中，分化程度較高。 在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中，p16 的表達高，HPV 感染以后，腫瘤分化程度較高，發(fā)展相對緩慢，進而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率低。

HPV 的持續(xù)感染，病毒多量復制，會異常激活多種信號途徑[8，9]。在本實驗中，與正常黏膜相比，PI3Kp110α、p110β 在食管鱗癌中表達增多， 提示在食管鱗癌中，PIK3CA、CB 被激活。研究亦顯示，PI3Kp110α、p110β 與食管鱗癌的轉(zhuǎn)移有關(guān)。 筆者認為，PIK3CA、CB 蛋白異常表達會使PI3K/AKT 途徑失衡，失衡后的PI3K/AKT途徑可導致mTOR 的異常表達，進而調(diào)控內(nèi)皮細胞生長，導致腫瘤的轉(zhuǎn)移。 p16 蛋白的表達均與PIK3CA 呈正相關(guān)，當食管發(fā)生HPV 的持續(xù)感染時，HPV 感染刺激 IL-17 誘導 Mcl-1 突變，導致 PIK3CA 的激活，PI3K途徑失衡，誘導了腫瘤進展。

總之，在食管鱗癌的發(fā)生中，會有HPV 的感染，同時存在PI3K/AKT 信號途徑失衡。聯(lián)合檢測PIK3CA和p16 可能有助于優(yōu)化食管鱗癌的治療。