郭煥裕 王亮 葛海霞
摘要 隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展,水產(chǎn)動(dòng)物感染性疾病頻發(fā),給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。傳統(tǒng)的防治方法以抗生素和化學(xué)合成抗菌藥為主,然而長期不合理應(yīng)用抗生素類藥物易產(chǎn)生耐藥性、藥物殘留和環(huán)境污染等問題。中草藥具有資源豐富、安全性高、殘留低、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn),在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)抗菌、抗病毒、抗寄生蟲等方面得到了越來越廣泛的應(yīng)用。綜述了中草藥在抗水產(chǎn)動(dòng)物常見致病菌中的應(yīng)用,以期為進(jìn)一步開發(fā)和拓展中草藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用提供思路。
關(guān)鍵詞 中草藥;水產(chǎn)動(dòng)物;致病菌;抑菌作用
中圖分類號(hào) S 948文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A文章編號(hào) 0517-6611(2022)02-0019-04
doi:10.3969/j.issn.0517-6611.2022.02.006
開放科學(xué)(資源服務(wù))標(biāo)識(shí)碼(OSID):
Application of Chinese Herbal Medicine in Pathogenic Bacteria of Aquatic Animals
GUO Huan-yu1,WANG Liang2,GE Hai-xia1 (1.College of Life Sciences,Huzhou University,Huzhou,Zhejiang 313000;2.Chengxi Hospital,The First People's Hospital of Xiaoshan District,Hangzhou,Zhejiang 311200)
Abstract With the rapid development of aquaculture,infectious diseases of aquatic animals occur frequently,causing huge economic losses to the aquaculture industry.The traditional prevention and treatment methods are mainly antibiotics and chemical synthetic antibacterial agents,however,the long-term unreasonable use of antibiotics is easy to produce problems such as drug resistance,drug residues and environmental pollution.With the advantages of rich resources,high safety,low residue and not easy to produce drug resistance,Chinese herbal medicine has been more and more widely used in aquaculture,such as antibacterial,anti-virus,anti-parasite and so on.This paper summarizes the application of Chinese herbal medicine in resisting common pathogenic bacteria of aquatic animals,and provides ideas for further developing and expanding the application of Chinese herbal medicine in aquaculture.
Key words Chinese herbal medicine;Aquatic animals;Pathogenic bacteria;Antibacterial effect
基金項(xiàng)目 湖州市重點(diǎn)研發(fā)項(xiàng)目(2019ZD2027);浙江省基礎(chǔ)公益研究計(jì)劃項(xiàng)目(LGN22C190007)。
作者簡介 郭煥裕(1998—),男,浙江諸暨人,碩士研究生,研究方向:天然漁藥研發(fā)。*通信作者,副教授,博士,從事天然漁藥研究。
收稿日期 2021-04-14;修回日期 2021-06-09
隨著生活水平的提高,人們對(duì)水產(chǎn)品的需求逐年增加,水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)得到了迅猛發(fā)展。為提高養(yǎng)殖效益,養(yǎng)殖密度也顯著增長,隨之而來的就是大量的水產(chǎn)病害問題,如細(xì)菌性疾病、真菌性疾病、病毒性疾病和寄生蟲疾病,其中細(xì)菌性疾病是制約水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)持續(xù)健康發(fā)展的主要疾病之一。常見的致病菌有嗜水氣單胞菌、弧菌、鏈球菌、遲緩愛德華氏菌等,感染了病原菌的水產(chǎn)動(dòng)物通常表現(xiàn)出食欲不振且浮游于水表,內(nèi)臟膨脹且表皮出現(xiàn)褪色和斑塊,嚴(yán)重的出現(xiàn)表皮潰爛或鱗片脫落現(xiàn)象。水產(chǎn)動(dòng)物一旦感染了細(xì)菌性疾病,其發(fā)病率和死亡率極高[1],從而嚴(yán)重影響水產(chǎn)養(yǎng)殖的健康可持續(xù)發(fā)展,并導(dǎo)致養(yǎng)殖戶遭受巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
目前防治水產(chǎn)養(yǎng)殖中的細(xì)菌感染性疾病的常用藥物是抗生素及其他化學(xué)合成的抗菌藥物,常用的類型有β-內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、磺胺類、喹諾酮類等[2];但抗生素類藥物的長期不合理使用以及濫用,會(huì)導(dǎo)致水產(chǎn)動(dòng)物致病菌出現(xiàn)耐藥性、水產(chǎn)品中藥物殘留以及環(huán)境污染等一系列問題[1,3]。根據(jù)《中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第194號(hào)》的規(guī)定,我國自2020年1月1日起,退出除中藥外的所有促生長類藥物飼料添加劑品種,獸藥生產(chǎn)企業(yè)停止生產(chǎn)、進(jìn)口獸藥代理商停止進(jìn)口相應(yīng)獸藥產(chǎn)品,同時(shí)注銷相應(yīng)的獸藥產(chǎn)品批準(zhǔn)文號(hào)和進(jìn)口獸藥注冊(cè)證書,這被認(rèn)為是我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要全面“禁抗”的公告[4]。目前已有多個(gè)國家限制了抗生素的使用[5]。另外,由于暫無有效的藥物替代禁用漁藥,致使養(yǎng)殖業(yè)使用違禁藥物現(xiàn)象屢禁不止。
中草藥資源豐富,使用歷史悠久,許多中草藥含有有機(jī)酸、黃酮類、萜類、皂苷類、生物堿類等天然活性成分,具有抑菌殺菌、增強(qiáng)機(jī)體免疫力和抗應(yīng)激能力的作用,同時(shí)還能從多靶點(diǎn)、多途徑作用于病原體進(jìn)行協(xié)同抑制和殺滅作用,具有安全性高、殘留低、不易產(chǎn)生耐藥性等特點(diǎn)[6-7]。因此,中草藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖中對(duì)抗感染性疾病具有很大的優(yōu)勢(shì)和應(yīng)用前景。目前,引起水產(chǎn)動(dòng)物感染的微生物主要是嗜水氣單胞菌、弧菌、鏈球菌、遲緩愛德華氏菌等,該研究就中草藥在抗該類水產(chǎn)動(dòng)物致病菌中的應(yīng)用進(jìn)行了綜述,以期為進(jìn)一步深入開發(fā)和拓展中草藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用提供借鑒。
1 嗜水氣單胞菌
嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)屬類弧菌科,革蘭染色陰性,廣泛分布于自然界的各種水體,對(duì)魚、蛙等冷血?jiǎng)游锖托∈?、豚鼠、家兔等溫血?jiǎng)游锞兄虏⌒浴J人畾鈫伟抢^發(fā)性或條件性致病菌,是能引起人類-畜類-魚類共患的病原菌[8];也是我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中影響區(qū)域最廣、流行季節(jié)最長、發(fā)病率和死亡率高、造成經(jīng)濟(jì)損失最嚴(yán)重的致病菌。
目前,中草藥提取物及其有效成分在抑制嗜水氣單胞菌方面已有廣泛的研究。謝麗玲等[9]報(bào)道大黃醇提物對(duì)嗜水氣單胞菌的最小抑菌濃度(MIC)為1.0 mg/mL,最小殺菌濃度(MBC)為4.0 mg/mL,其抑菌機(jī)制是通過影響菌體內(nèi)30S核糖體蛋白(S1)、F0F1ATP合酶β亞基(ATPase-β)、異檸檬酸裂解酶(isocitrate lyase)和烯醇酶(NSE)4種蛋白質(zhì)的mRNA,從而影響蛋白的表達(dá),最終達(dá)到抑菌的效果。周亮等[10]的研究也得到了類似的結(jié)果。此外,黃芩對(duì)嗜水氣單胞菌也有較好的抑制作用,其醇提物的MIC為20.0~25.0 mg/mL,而其水提物的MIC為10.0~12.5 mg/mL[11-12];由此可見,黃芩水提物比醇提物對(duì)嗜水氣單胞菌的抑制活性更好,其活性成分在水提物中含量可能更高。石洪玥等[13]研究了五倍子、石榴皮、訶子、黃芩和烏梅5味中草藥的水提物對(duì)嗜水氣單胞菌的抑菌效果,抑菌效果最好的是石榴皮和黃芩,MIC為6.25 mg/mL;其次是五倍子和訶子,MIC為12.5 mg/mL;最后是烏梅,MIC為25.0 mg/mL。夏與晴等[14]對(duì)25種中草藥水提物中抑制嗜水氣單胞菌效果較強(qiáng)的幾味中草藥進(jìn)行配伍正交試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)烏梅和石榴皮的組合對(duì)嗜水氣單胞菌的抑菌效果最好,MIC為7.81 mg/mL;而烏梅單用時(shí)對(duì)嗜水氣單胞菌的MIC為15.63 mg/mL,石榴皮單用時(shí)的MIC為31.25 mg/mL;說明不同中草藥的配伍對(duì)抑菌活性可起到協(xié)同增效作用。
朱璐丹等[15]報(bào)道,中藥秦皮中的有效成分秦皮素對(duì)嗜水氣單胞菌的MIC為0.128 mg/mL。陳杰豪等[16]通過試驗(yàn)得出,中藥姜黃中的有效成分山姜素對(duì)5株魚源耐藥性嗜水氣單胞菌的MIC和MBC范圍分別為0.128~0.256和0.512~1.024 mg/mL。由此可見,中草藥中的單體成分具有很好的抑菌作用,同時(shí)也可推測(cè)中草藥中含該類成分類型的部位也具有較強(qiáng)的抑菌作用。
中草藥及其提取物還可以作為飼料添加劑,通過調(diào)節(jié)免疫功能對(duì)嗜水氣單胞菌起到抑制的作用。Zhao等[17]發(fā)現(xiàn)將忍冬藤的醇提取物添加到飼料中飼喂感染嗜水氣單胞菌的中華絨螯蟹可以提高其存活率;另外,在飼料中添加番石榴葉提取物可以有效地降低由嗜水氣單胞菌導(dǎo)致的羅非魚的死亡率[18]。
2 溶藻弧菌
溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是一種嗜鹽嗜溫型的革蘭氏陰性細(xì)菌,可產(chǎn)生黏附因子、脂多糖、Ⅲ型分泌系統(tǒng)、外膜蛋白等毒力因子[19],是引起弧菌病暴發(fā)的主要病原,也是一種人、水生動(dòng)物共感染菌。該菌感染宿主廣泛、流行面積廣、發(fā)病率及死亡率高,是水產(chǎn)養(yǎng)殖中重點(diǎn)防控的病原菌之一[20]。
劉克奉[21]研究發(fā)現(xiàn),6種中草藥的水提物對(duì)溶藻弧菌的體外抑菌效果為:蒲公英、連翹、石榴皮>黃芩>魚腥草、黃柏,其24 h的MIC分別為15.625、31.250和62.500 mg/mL。馮銳基等[22]報(bào)道五倍子水提物對(duì)溶藻弧菌的MIC和MBC均為6.25 mg/mL;石榴皮水提物對(duì)溶藻弧菌的MIC和MBC分別為12.50、25.00 mg/mL。黃連水提物對(duì)溶藻弧菌的MIC和MBC分別為7.80和31.25 mg/mL[23],而黃連中的有效成分黃連素對(duì)溶藻弧菌的MIC和MBC分別為0.064和0.256 mg/mL[24],說明黃連中抑菌活性較強(qiáng)的可能主要是小檗堿類成分。
Ng’ambi等[25]從皂樹(Quillaja saponaria)中分離得到的一種皂苷成分Quillaja saponin會(huì)刺激三疣梭子蟹的免疫反應(yīng),包括吞噬活性、血細(xì)胞總數(shù)、超氧化物歧化酶和酚氧化酶,并增強(qiáng)三疣梭子蟹對(duì)溶藻弧菌的免疫防御作用。
朱宇嘉等[26]研究發(fā)現(xiàn),一種中草藥復(fù)方HCV(herbal composition for vibriosis)粉末和浸膏對(duì)對(duì)蝦體內(nèi)外弧菌有較強(qiáng)的抑殺活性,對(duì)溶藻弧菌的MIC均為0.49 mg/mL,明顯大于單味藥的活性,說明中藥復(fù)方中的各個(gè)藥物之間起到協(xié)同增效的作用。
3 副溶血弧菌
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)是革蘭氏陰性多形態(tài)桿菌或稍彎曲弧菌,是引起對(duì)蝦急性肝胰腺壞死?。╝cute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)的主要致病菌[27-28]。
謝麗玲等[29]發(fā)現(xiàn),黃連的有效成分黃連素對(duì)副溶血弧菌的抑菌效果較強(qiáng),其MIC和MBC均為0.391 mg/mL;另一項(xiàng)研究表明,在25種中草藥中,黃連水提物對(duì)副溶血弧菌的抑制效果最好,MIC為15.63 mg/mL[14];說明黃連中抑制副溶血弧菌的有效成分可能主要是小檗堿類成分,與上述抑制溶藻弧菌的結(jié)果一致。研究表明,秦皮、訶子、石榴皮、黃連、五倍子和黃芩的水提物對(duì)副溶血弧菌的抑殺效果較好,其MIC和MBC分別為1.56和3.13 mg/mL[30]。戴碧鑫等[31]研究了黃芩原藥材、復(fù)方提取黃芩藥渣、單方提取黃芩藥渣的醇提物中黃芩苷的含量以及抑菌活性,發(fā)現(xiàn)這3種醇提物中黃芩苷的含量分別為4.91%、2.05%、2.25%,對(duì)副溶血弧菌的MIC分別為0.98、31.25和31.25 mg/mL,說明黃芩藥渣仍有很好的利用價(jià)值。張政等[32]發(fā)現(xiàn),生姜的醇提取物對(duì)副溶血弧菌具有較好的抑制作用,其MIC和MBC值均為40 mg/mL。此外,Zhang等[33]測(cè)定了地榆醇提物和水提物對(duì)副溶血弧菌的有效殺菌濃度,發(fā)現(xiàn)2種提取物對(duì)副溶血弧菌變異株(VPAHPND)的生長均有抑制作用,其MIC均為6.4 mg/mL,其中乙醇提取物的抑菌效果更強(qiáng),在濃度為6.4 mg/mL時(shí),10 h內(nèi)即可殺死VPAHPND。由此可見,多種單味中草藥對(duì)副溶血弧菌具有較好的抑菌效果,秦皮、訶子、石榴皮、五倍子和黃芩的MBC均低于3.13 mg/mL。
Zhai等[34]認(rèn)為,傳統(tǒng)中藥復(fù)方三黃散可提高凡納濱對(duì)蝦的天然免疫能力,增強(qiáng)其對(duì)一種由副溶血弧菌引起的急性肝胰腺壞死病菌株的抵抗力。同樣,烏梅和石榴皮的組合以及中草藥復(fù)方HCV對(duì)副溶血弧菌也具有很強(qiáng)的抑菌作用,其MIC分別是7.81和0.25 mg/mL[14,26]。
4 鏈球菌
鏈球菌是化膿性球菌的一類常見細(xì)菌,廣泛存在于自然界中,在健康人的鼻咽部以及人和動(dòng)物糞便中較常見,但是大多數(shù)都不致病。其中無乳鏈球菌等鏈球菌是魚類等水產(chǎn)動(dòng)物的常見致病菌[35]。
崔淼等[36]研究了100種中草藥的醇提物對(duì)羅非魚鏈球菌的體外抑制效果,其中桑白皮對(duì)無乳鏈球菌的抑殺效果最好,其MIC和MBC均為0.390 6 mg/mL;而藿香、豨薟草和槐角對(duì)海豚鏈球菌的抑殺效果最好,其MIC和MBC均為0.390 6 mg/mL。研究表明,一些中草藥的水提物對(duì)羅非魚源無乳鏈球菌的體外抑菌效果由高到低為:黃連、五倍子>石榴皮>連翹、訶子、雞血藤、黃芩,其MIC分別為3.9、15.6、62.5 mg/mL[37]。此外,姚麗等[38]研究表明,黃連、黃芩、連翹、丁香、秦皮的水提物對(duì)鱘魚源海豚鏈球菌具有較好的防治效果,其MIC和MBC分別為1.95和3.90 mg/mL、1.95和15.62 mg/mL、3.90和7.81 mg/mL、3.90和15.62 mg/mL、7.81和7.81 mg/mL,由此可知,黃連和黃芩的抑菌效果最好。
丁月霞等[37]將10種中草藥水提物中對(duì)羅非魚源無乳鏈球菌抑制效果較好的7味中草藥用棋盤交叉法進(jìn)行了聯(lián)合用藥,結(jié)果表明,黃連與訶子、黃連與黃芩、連翹與雞血藤、連翹與黃芩、訶子與石榴皮、訶子與雞血藤以及訶子與黃芩聯(lián)合用藥均呈現(xiàn)協(xié)同作用,其余藥物聯(lián)用組合均呈現(xiàn)無關(guān)或拮抗作用。由此可見,并不是所有的中藥配伍都可以起到協(xié)同增效的作用,有的中藥之間配伍會(huì)出現(xiàn)無關(guān)作用,甚至還會(huì)出現(xiàn)拮抗作用,抑菌效果反而低于單味中草藥。
袁國尚等[39]對(duì)10種復(fù)方中草藥水提物對(duì)鱘源海豚鏈球菌的抑菌效果進(jìn)行了研究,結(jié)果顯示,10種復(fù)方中草藥均有一定的抑制鱘源海豚鏈球菌的效果,其中九味羌活湯和桑菊飲對(duì)鱘源海豚鏈球菌的抑殺效果最強(qiáng),其MIC均為62.5 mg/mL,MBC均為125.0 mg/mL。Abarike等[40]探討了一種中藥合劑(黃芪、當(dāng)歸、湖北山楂以1∶1∶1的質(zhì)量比配伍)對(duì)尼羅羅非魚的影響,結(jié)果顯示,尼羅羅非魚被無乳鏈球菌攻擊后,中藥組的存活率為70%,而對(duì)照組為35%,表明該中藥合劑能提高尼羅羅非魚的免疫應(yīng)答和抗病能力。
5 遲緩愛德華氏菌
遲緩愛德華氏菌(Edwardsiella tarda,Et)又稱遲鈍愛德華氏菌或緩慢愛德華氏菌,革蘭氏陰性菌。近年來,遲緩愛德華氏菌已經(jīng)在20多種魚類中引起了病害,給水產(chǎn)養(yǎng)殖造成了巨大損失。同時(shí)遲緩愛德華氏菌也是愛德華氏菌屬中唯一能夠感染人的致病菌,危害極大[41]。
陳言峰等[42]發(fā)現(xiàn)五倍子、烏梅、大青葉和石榴皮等的水提物對(duì)遲緩愛德華氏菌具有明顯的抑菌作用,其MIC<6.25 mg/mL、MBC<50.00 mg/mL。同樣,劉克奉[21]研究6種中草藥的水提物對(duì)遲緩愛德華氏菌的抑菌效果,發(fā)現(xiàn)
蒲公英、石榴皮、黃芩、魚腥草、黃柏表現(xiàn)出相似的抑菌活性,其24 h的MIC均為31.25 mg/mL;而連翹相對(duì)較弱,MIC為62.50 mg/mL。五倍子、石榴皮、訶子、黃芩和烏梅等中草藥的水提物對(duì)遲緩愛德華氏菌均具有一定的抑菌效果,最強(qiáng)的是五倍子和黃芩,MIC為25 mg/mL;其次是石榴皮和訶子,MIC為 50 mg/mL;烏梅的抑菌效果較差,MIC為100 mg/mL[13]。王凱等[24]研究了黃連素對(duì)海水病原菌的殺滅效果,結(jié)果顯示,黃連素對(duì)遲緩愛德華氏菌的MIC為0.128 mg/mL,其殺菌作用最強(qiáng),MBC為0.256 mg/mL。由此可見,不同的研究者報(bào)道的同種中藥對(duì)同一致病菌的抑制效果不盡相同,如上述提到的五倍子、石榴皮和烏梅等對(duì)遲緩愛德華氏菌的MIC不一致,其原因可能是中藥的產(chǎn)地、采集時(shí)間或加工方法等不同,導(dǎo)致其相應(yīng)的有效成分含量不同。
Harikrishnan等[43]發(fā)現(xiàn)飼料中添加黃芩提取物可以有效地抑制遲緩愛德華氏菌的生長。飼料中分別添加0.2%和10%的番石榴提取物或2.0%的含羞草提取物,可以增強(qiáng)條紋鯰魚的免疫系統(tǒng)和降低其感染愛德華氏菌后的死亡率,從而改善其健康狀況[44]。
6 小結(jié)及展望
綜上所述,很多單味中藥對(duì)多種水產(chǎn)動(dòng)物致病菌具有較強(qiáng)的抑菌作用,如五倍子、黃芩、石榴皮、黃連等,同一種中藥不同溶劑的提取物抑菌活性不同,絕大多數(shù)是醇提物作用強(qiáng)于水提物,說明有效成分在醇提物中含量更高。而不同中藥的配伍或中藥復(fù)方的使用,也可大幅度提高其抑、殺菌活性,這體現(xiàn)出中藥多組分協(xié)同作用的特色。因此,中藥配伍給藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中具有很大的應(yīng)用前景。
然而,目前大多數(shù)中草藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用僅限于其粗提物。而中草藥粗提物的使用存在著一些缺點(diǎn),如有效成分含量低、原料用量大、療效慢等,從而影響中草藥防治技術(shù)的推廣和應(yīng)用;此外,不同產(chǎn)地、季節(jié)、加工方法等都會(huì)影響中藥材的質(zhì)量,導(dǎo)致其有效成分的種類和含量差別較大,質(zhì)量難以控制,從而引起很大的療效差異。
中藥有效部位是中藥某類或某幾類成分的混合物,具備中藥特有的多成分、多靶點(diǎn)作用特點(diǎn),只是除去了無效或低效成分,使中藥療效更強(qiáng)、作用更加專一,同時(shí)達(dá)到化學(xué)成分清楚、質(zhì)量易控的目的。中藥有效部位的配伍是中藥配伍的新模式,也是中藥現(xiàn)代化的趨勢(shì)。因此,今后在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中,中藥有效部位的配伍可為漁藥、飼料添加劑的生產(chǎn)加工提供新的思路和模式,具有遠(yuǎn)大的應(yīng)用前景。
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