賀誼紅 朱 瑋

（吉安職業(yè)技術(shù)學院，江西 吉安 343000）

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試菌絲來自吉安市青原山松乳菇子實體組織分離

1.1.2 供試馬尾松種子來自江蘇如意種業(yè)

1.1.3 供試培養(yǎng)基

馬鈴薯、蔗糖、瓊脂、麩皮、蛋白胨、vb1、煙酸、松針水。

1.2 試驗方法

1.2.1 松乳菇母種制備

2018年10月31日在超凈工作臺以無菌操作，取本地市場上野生松乳菇菌柄組織接入由馬鈴薯、蔗糖、瓊脂、麩皮、蛋白胨、vb1、煙酸、松針水組成的已消毒冷卻的松乳菇母種培養(yǎng)基6支試管（20×20），1管不接松乳菇菌柄組織做空白對照。26℃閉光培養(yǎng)。2管菌絲于2018年11月10日以乳狀態(tài)長于試管培養(yǎng)基斜面；1管菌絲以絲絨狀生長于試管培養(yǎng)基斜面；1管菌絲于2018年11月10日（10d）以白毛絮狀鋪滿試管培養(yǎng)基斜面；2管無菌絲萌發(fā)；空白對照管無雜菌感染。三種形態(tài)各轉(zhuǎn)接2次。轉(zhuǎn)管培養(yǎng)后的三種菌絲形態(tài)如圖1所示。

圖1

1.2.2 松樹種苗處理

1.2.2.1 松樹種子處理

用0.5%的高錳酸鉀溶液浸泡當年種子2h，再用無菌清水沖洗數(shù)次。然后用43℃溫水浸種1晝夜，種皮吸水膨脹后撈 （1）白毛絮狀 （2）絲絨狀 （3）乳狀

出置于已消好毒的河沙中，放于已消好毒的25℃培養(yǎng)箱中催芽，并每天用無菌水淘洗2次直至7天后有30%種子裂嘴露白時，于2018年12月1日在超凈工作臺上將裂嘴露白種子以每瓶1粒，播入裝好已消好毒的壤土基質(zhì)240ml組培瓶中。

壤土基質(zhì)配制：黃心土4份河沙6份攪拌均勻。每130g配好的基質(zhì)壤土加水20ml，分裝240ml組培瓶。126℃高溫高壓消毒1.5h。

1.2.2.2 出苗管理

將播完馬尾松種子的114個組培瓶，放于已消好毒的21℃光照培養(yǎng)箱中出苗。光照1500lxs，每天通風2次。經(jīng)18d（2018年12月1日至2018年12月18日）培養(yǎng)，106瓶長出松樹苗，出苗率93%。其中18粒種子發(fā)芽初期都有白色菌絲萌發(fā)且全發(fā)育成松樹苗無死亡。

1.2.3 接菌種培養(yǎng)

于2018年12月18日在超凈工作臺上將轉(zhuǎn)接2次將三種形態(tài)的松乳菇菌種（試管種20×20）每管用15ml無菌水稀釋接入已出苗的組培瓶（每瓶1ml）中。絲絨狀菌絲接種松樹苗32株，絲絨狀菌絲接種已長有白色菌絲的松樹苗6株，白毛絮狀菌絲接種松樹苗6株，乳狀菌絲接種松樹苗46株，乳狀菌絲接種已長有白色菌絲的松樹苗12株，4株松樹苗不接松乳菇菌種作空白對照。將接好菌種的松樹苗放于已消好毒的24℃，1500lks光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20d，觀察在光照培養(yǎng)箱中不同菌絲狀態(tài)感染馬尾松苗的成活情況。

1.2.4 育苗

定植已感染的菌根苗，用花卉小鏟插入容器袋中央，右手提住帶有土壤基質(zhì)（注意已感染的菌根苗從組培瓶中起苗時根部土球定不要散落）的芽苗放入穴內(nèi)，使育苗袋中土壤與芽苗根部土球密合。自然環(huán)境培育，淋水要看天氣或土壤狀況，一般一星期一次，晴天干燥1天要澆2次水，寒流天氣吹北風更應注意淋透水，既要防干旱，又要防積水爛根，45天后，每隔2周施一次肥（0.4斤尿素＋1斤過磷酸鈣兌水100斤），噴施。分別于第10d、第96d、第106d、第133d對已接種菌種松樹苗觀察。

2 結(jié)果與分析

2.1 人工培養(yǎng)環(huán)境下松乳菇不同菌絲狀態(tài)感染對馬尾松苗成活的影響

由表1可知不同菌絲狀態(tài)在人工培養(yǎng)環(huán)境下感染馬尾松苗20d，對馬尾松苗的成活率有影響，白毛絮狀菌絲感染馬尾松苗成活率最高，其次是乳狀菌絲感染馬尾松苗成活率高，乳狀（松樹苗已長有白色菌絲）、絲絨狀、絲絨狀（松樹苗已長有白色菌絲）菌絲感染馬尾松苗成活率兼低，未接菌空白株無死亡。綜上所述乳狀菌絲在感染馬尾松苗過程中對馬尾松苗有傷害作用。白毛絮狀菌絲在感染馬尾松苗過程中對馬尾松苗無傷害作用。

表1 不同菌絲狀態(tài)感染馬尾松苗成活率（2018年12月18日至2019年1月7日）

2.2 自然環(huán)境培養(yǎng)下松乳菇不同菌絲狀態(tài)感染馬尾松苗成活情況

已感染松乳菇不同菌絲狀態(tài)的馬尾松苗經(jīng)過133d在自然環(huán)境下的培養(yǎng)，結(jié)果如表2、圖2所示。通過以下圖表可以發(fā)現(xiàn)絲絨狀已有毛感染馬尾松苗、乳狀已有毛感染馬尾松苗在自然環(huán)境下成活率相對絲絨狀感染馬尾松苗、乳狀感染馬尾松苗、白毛絮狀感染馬尾松苗、空白對照馬尾松苗要高。白毛絮狀感染馬尾松苗、空白對照馬尾松苗在自然環(huán)境下存活株數(shù)為0。由上述可見絲絨狀已有毛感染馬尾松苗、乳狀已有毛感染馬尾松苗在自然環(huán)境中抗逆性強。絲絨狀感染馬尾松苗、乳狀感染馬尾松苗、白毛絮狀感染馬尾松苗、空白對照馬尾松苗在自然環(huán)境中易死亡抗逆性弱。

表2 自然環(huán)境培育不同時間段各種已感染不同形態(tài)菌種馬尾松苗成活狀況

圖2

3 結(jié)論與討論

本實驗中白毛絮狀菌絲感染馬尾松苗在人工潔凈條件下培養(yǎng)20d成活率高，而移植于自然環(huán)境中抗逆性弱易死亡。絲絨狀已有毛感染馬尾松苗、乳狀已有毛感染馬尾松苗在人工潔凈條件下培養(yǎng)20d成活率相對不高，在自然環(huán)境下133d成活率高抗逆性強。18粒種子發(fā)芽初期都有白色菌絲萌發(fā)且全發(fā)育成松樹苗無死亡。以上結(jié)果都與許多植物的種子缺乏菌根真菌就很難萌發(fā)，即使萌發(fā)也生長不正常甚至夭亡；莫美華報道紅汁乳菇提取物有抑制某些植物的發(fā)芽及生長，[1]相接近符合。絲絨狀已有毛感染馬尾松苗、乳狀已有毛感染馬尾松苗在人工潔凈條件下培養(yǎng)20d成活率相對不高，在自然環(huán)境下133d成活率高抗逆性強，此與植物種子發(fā)芽幾周后外生菌根便在二級菌系形成相符合。由此可見白毛絮狀菌絲及馬尾松種子發(fā)芽初期的白色菌絲具有向還無完整根系的馬尾松苗輸送營養(yǎng)的作用，而絲絨狀菌絲有利于菌根的形成，利于馬尾松苗自然環(huán)境下生長。本實驗因是初實驗樣本數(shù)量偏少，為增加高可信度，在以后的實驗中還需加大樣本數(shù)。至于白毛絮狀菌絲、馬尾松苗已有白色菌絲、絲絨狀菌絲、乳狀菌絲之間的鑒定及關系還需要出菇及分子生物學方面的實驗來驗證。