• 
    

    
    

      99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

      扶正消積湯對(duì)小鼠肺癌模型腫瘤的生長抑制及免疫功能的改善研究

      2022-03-08 14:21:22潘景仁王旦輝
      實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志 2022年2期
      關(guān)鍵詞:消積荷瘤扶正

      趙 磊, 李 慧, 潘景仁, 王旦輝, 江 勤, 肖 璐

      (1. 新疆醫(yī)科大學(xué)校醫(yī)院, 新疆 烏魯木齊, 830011;2. 新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院 中醫(yī)科, 新疆 烏魯木齊, 830028;3. 新疆維吾爾自治區(qū)烏魯木齊市婦幼保健院 中醫(yī)科, 新疆 烏魯木齊, 830000)

      非小細(xì)胞肺癌是人類常見惡性腫瘤之一,患者往往預(yù)后不良[1]。當(dāng)人體處于免疫抑制狀態(tài)時(shí),腫瘤會(huì)出現(xiàn)“免疫逃逸”[2]。近年來,中藥已被越來越多地應(yīng)用于抗腫瘤治療中,扶正消積湯作為臨床常用方劑,可增強(qiáng)化療藥物的抗腫瘤作用[3-4]。研究[5]發(fā)現(xiàn),扶正消積湯可改善結(jié)腸癌患者的免疫力。但關(guān)于扶正消積湯能否通過調(diào)控免疫功能抑制肺癌腫瘤的生長,目前尚不明確。本研究構(gòu)建肺癌LA-4細(xì)胞荷瘤小鼠模型,探討扶正消積湯對(duì)荷瘤小鼠腫瘤生長、免疫調(diào)節(jié)的影響,現(xiàn)報(bào)告如下。

      1 材料與方法

      1.1 細(xì)胞株與動(dòng)物

      鼠肺癌細(xì)胞株LA-4(北京中科院細(xì)胞庫); 無特定病原體(SPF)級(jí)C57BL/6小鼠30只,雄性, 6~8周齡,體質(zhì)量17~23 g, 購自武漢漢生生物有限公司,動(dòng)物許可證編號(hào)為SYXK(浙)2021-0017, 動(dòng)物防疫合格證編號(hào)為(漢)動(dòng)防合字第20200031號(hào)。飼養(yǎng)條件: 溫度21~25 ℃, 濕度40%~70%, 自由活動(dòng),正常飼養(yǎng)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)符合“3R”原則[6]。

      1.2 中藥制備方法

      扶正消積湯組方為黨參15 g、黃芪15 g、茯苓12 g、白術(shù)20 g、陳皮15 g、苡仁30 g、仙鶴草30 g、白花蛇舌草30 g、炙甘草10 g。清洗藥材,煎煮后過濾, 60~80 ℃隔水蒸,濃縮成生藥量1 g/mL, 4 ℃儲(chǔ)存。

      1.3 儀器與試劑

      鼠腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-2(IL-2)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒(XY-SJH-N1027, XY-SJH-N1123, 蘇州金唯智生物有限公司)檢測,兔抗鼠CD3、CD4、CD8抗體(ab1535, ab1624, ab1811, Abcam, 美國), BD FACSCanto Ⅱ分析型流式細(xì)胞儀(天津儀器廠), JD-SY96S全自動(dòng)多功能酶標(biāo)儀(天津儀器廠)。

      1.4 方法

      1.4.1 肺癌荷瘤小鼠模型建立: DMEM培養(yǎng)基(10%胎牛血清、10萬U/L青霉素、100 mg/L鏈霉素)培養(yǎng)細(xì)胞,條件37 ℃、5%CO2飽和濕度, 24 h換液。制備1×106/mL細(xì)胞懸液。在24只小鼠右側(cè)前肢腋下消毒后注射0.2 mL, 10 d后見皮下約5 mm的腫瘤表明模型構(gòu)建成功[7]。

      1.4.2 處理及分組: 將24只荷瘤小鼠隨機(jī)分為4組,即模型組(同劑量生理鹽水灌胃)、低劑量組(125 mg/kg扶正消積湯灌胃)、中劑量組(250 mg/kg扶正消積湯灌胃)、高劑量組(500 mg/kg扶正消積湯灌胃),每組6只,1次/d, 共28 d。將6只正常小鼠設(shè)為對(duì)照組,給予等量生理鹽水(量同低劑量組)灌胃, 1次/d, 共28 d。每4 d測量荷瘤小鼠腫瘤長徑(a)和短徑(b), 根據(jù)V=ab2/2計(jì)算腫瘤體積。

      1.4.3 胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)及抑瘤率: 最后一次給藥后24 h, 斷頸法處死小鼠,剝離瘤體、脾臟、胸腺,計(jì)算抑瘤率、胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。抑瘤率=(1-給藥組瘤質(zhì)量/模型組瘤質(zhì)量)×100%; 胸腺指數(shù)=胸腺質(zhì)量(mg)/小鼠體質(zhì)量(g); 脾臟指數(shù)=脾臟質(zhì)量(mg)/小鼠體質(zhì)量(g)。

      1.4.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平: 各組小鼠最后一次給藥后24 h摘除眼球取血,加入紅細(xì)胞裂解液,離心(1 000轉(zhuǎn)/min, 離心半徑10 cm, 10 min), 去上清,重懸,加入CD3、CD4和CD8一抗(1∶200、1∶200、1∶100), 室溫避光孵育15 min, 上機(jī)檢測CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞百分比,并計(jì)算CD4+/CD8+值。

      1.4.5 小鼠血清TNF-α、IL-2表達(dá)水平檢測: 采用ELISA法檢測TNF-α、IL-2水平。

      1.4.6 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化及特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)殺傷活性測定: 制備脾臟單細(xì)胞懸液,裂解紅細(xì)胞,磷酸鹽緩沖溶液(PBS)洗滌,按照4×105/mL密度接種96孔板, 5 μg/mL的ConA孵育72 h后測量570 nm處光密度(OD)值。制備的小鼠脾細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞,對(duì)數(shù)生長期LA-4細(xì)胞為靶細(xì)胞,相同數(shù)量細(xì)胞共培養(yǎng)24 h后測量490 nm處OD值。計(jì)算CTL殺傷活性,公式為[1-(實(shí)驗(yàn)孔OD-效應(yīng)細(xì)胞對(duì)照孔OD)/靶細(xì)胞對(duì)照孔OD]×100%。每組5個(gè)復(fù)孔。

      1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

      2 結(jié) 果

      2.1 扶正消積湯對(duì)荷瘤小鼠腫瘤生長的影響

      給藥第20、24、28天,不同劑量扶正消積湯組小鼠腫瘤體積均小于模型組,且高劑量組小鼠腫瘤體積小于低劑量組、中劑量組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。不同劑量扶正消積湯組小鼠的腫瘤質(zhì)量低于模型組,抑瘤率高于模型組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); 高劑量組的腫瘤質(zhì)量低于低劑量組、中劑量組,抑瘤率高于低劑量組、中劑量組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。低劑量組小鼠的腫瘤體積、質(zhì)量及抑瘤率與中劑量組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖1、表1。

      A: 4組荷瘤小鼠腫瘤體積比較(與模型組比較, *P<0.05; 與高劑量組比較, #P<0.05);

      表1 4組荷瘤小鼠腫瘤質(zhì)量和抑瘤率比較

      2.2 扶正消積湯對(duì)荷瘤小鼠免疫器官指數(shù)的影響

      模型組小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)低于對(duì)照組,中劑量組、高劑量組脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)高于模型組,高劑量組脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)高于低劑量組、中劑量組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); 低劑量組脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)與模型組比較,低劑量組脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)與中劑量組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

      表2 各組小鼠免疫器官指數(shù)比較 mg/g

      2.3 扶正消積湯對(duì)荷瘤小鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群的影響

      模型組小鼠外周血CD4+T細(xì)胞水平、CD4+/CD8+值低于對(duì)照組, CD8+T細(xì)胞水平高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); 中劑量組、高劑量組CD4+T細(xì)胞水平、CD4+/CD8+值高于模型組, CD8+T細(xì)胞水平低于模型組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 而低劑量組與模型組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05); 低劑量組、中劑量組CD4+T細(xì)胞水平、CD4+/CD8+值低于高劑量組, CD8+T細(xì)胞水平高于高劑量組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。低劑量組T淋巴細(xì)胞亞群水平與中劑量組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3、圖2。

      2.4 扶正消積湯對(duì)荷瘤小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化及CTL殺傷活性的影響

      模型組小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化及CTL殺傷活性均低于對(duì)照組,中劑量組、高劑量組則高于模型組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 而低劑量組與模型組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05); 低劑量組、中劑量組小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化及CTL殺傷活性均低于高劑量組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 而低劑量組與中劑量組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

      表3 各組小鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較

      圖2 流式細(xì)胞術(shù)檢測各組小鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平

      表4 各組小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化及CTL殺傷活性比較

      2.5 扶正消積湯對(duì)荷瘤小鼠血清TNF-α、IL-2水平的影響

      模型組小鼠血清TNF-α、IL-2水平均低于對(duì)照組,中劑量組、高劑量組血清TNF-α、IL-2水平均高于模型組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 而低劑量組與模型組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05); 低劑量組、中劑量組小鼠血清TNF-α、IL-2水平均低于高劑量組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 而低劑量組與中劑量組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表5。

      表5 各組小鼠血清TNF-α、IL-2水平比較 pg/mL

      3 討 論

      中醫(yī)理論[8-10]認(rèn)為,肺癌病因?yàn)闅庋煌ā⑻刀灸?,治療原則以扶正為主,消瘀化痰為輔。扶正消積湯中的白術(shù)、黃芪可起到扶正益氣功能,甘草、石斛可生津滋陰,三七、仙鶴草具有清熱解毒、補(bǔ)虛虧及抑癌散瘀功能,雞內(nèi)金可健脾消積,豬苓、薏苡仁可化濁抑癌[11-16]。臨床研究[17-18]表明,扶正消積湯可改善腫瘤患者的臨床癥狀。研究[19]發(fā)現(xiàn),扶正消積湯可抑制人肺腺癌SPC-A1細(xì)胞增殖,促進(jìn)凋亡。本研究發(fā)現(xiàn),扶正消積湯可抑制肺癌荷瘤小鼠腫瘤生長,且抑制作用呈濃度依賴性。

      惡性腫瘤患者存在免疫功能低下的情況,胸腺、脾臟是人體最重要的免疫器官,其質(zhì)量的改變可反映人體的免疫功能[20]。本研究結(jié)果顯示,中劑量、高劑量扶正消積湯治療可顯著升高荷瘤小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù),提示扶正消積湯可增強(qiáng)荷瘤小鼠的免疫功能。淋巴細(xì)胞體外轉(zhuǎn)化是評(píng)估淋巴細(xì)胞功能的指標(biāo)之一。CTL作為重要的效應(yīng)細(xì)胞,其殺傷活性是評(píng)價(jià)機(jī)體細(xì)胞免疫功能的重要指標(biāo),也是評(píng)價(jià)藥物對(duì)免疫系統(tǒng)影響的重要方法[21]。本研究結(jié)果顯示,與模型組比較,中劑量組、高劑量組小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化程度及CTL殺傷活性均顯著升高。由此表明,扶正消積湯可通過增加免疫器官質(zhì)量、提高淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化程度以及增強(qiáng)CTL殺傷活性而改善荷瘤小鼠免疫功能。

      T淋巴細(xì)胞在人體抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用,其中CD4+T淋巴細(xì)胞分泌 TNF-α、IL-2 等細(xì)胞因子,提高人體免疫應(yīng)答, CD8+T淋巴細(xì)胞則起到負(fù)向調(diào)控作用。CD4+/CD8+值下降,提示人體免疫功能處于抑制狀態(tài)[22]。臨床研究[23-24]發(fā)現(xiàn),肺癌患者機(jī)體存在免疫功能抑制情況,如CD4+T淋巴細(xì)胞減少, CD8+T淋巴細(xì)胞增多, CD4+/CD8+值顯著降低。本研究結(jié)果顯示,中劑量、高劑量扶正消積湯治療可提高荷瘤小鼠CD4+T細(xì)胞水平,降低CD8+T細(xì)胞水平,并提高CD4+/CD8+值。TNF-α、IL-2等細(xì)胞因子在腫瘤發(fā)生發(fā)展及免疫治療中起著至關(guān)重要的作用。本研究發(fā)現(xiàn),中劑量、高劑量扶正消積湯還可提高荷瘤小鼠血清TNF-α、IL-2水平,提示扶正消積湯可能通過促進(jìn)TNF-α、IL-2等細(xì)胞因子的分泌,活化T細(xì)胞,提高免疫功能,進(jìn)而起到抗腫瘤的作用。

      綜上所述,扶正消積湯可抑制肺癌荷瘤小鼠腫瘤生長,改善荷瘤小鼠免疫功能,促進(jìn)CD8+T細(xì)胞分泌IL-2、TNF-α。然而,扶正消積湯含有多種藥物成分,其具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

      猜你喜歡
      消積荷瘤扶正
      Effect of decoction of Fuzheng Jiedu Xiaoji formula (扶正解毒消積方) plus chemoembolization on primary liver cancer in patients
      Fuzheng Kang' ai decoction (扶正抗癌方) inhibits cell proliferation,migration and invasion by modulating mir-21-5p/human phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten in lung cancer cells
      除痰解毒方聯(lián)合吉非替尼對(duì)肺腺癌H1975荷瘤小鼠Twist、Fibronectin表達(dá)的影響
      綠蘿花及其多糖對(duì)S180荷瘤小鼠腫瘤免疫相關(guān)因子的影響
      中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:35
      畫說中醫(yī)
      獨(dú)角蓮軟膠囊抗人肝癌Hep-2荷瘤裸鼠移植瘤作用及對(duì)p53表達(dá)的影響
      石見穿多糖對(duì)H22荷瘤小鼠的抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)作用
      消積散結(jié)丸聯(lián)合血栓通注射液治療脾切術(shù)后門靜脈血栓19例
      扶正解毒湯聯(lián)合調(diào)強(qiáng)放療治療宮頸癌50例
      FOLFOX聯(lián)合健脾消積合劑治療晚期胃癌60例臨床觀察
      崇明县| 河西区| 孟村| 武山县| 泸水县| 东安县| 高雄县| 诸城市| 崇礼县| 白银市| 青浦区| 富阳市| 大宁县| 洪江市| 德兴市| 宣恩县| 白城市| 德庆县| 鄂伦春自治旗| 安多县| 武宣县| 阳曲县| 皮山县| 耿马| 合川市| 河津市| 色达县| 松桃| 宁化县| 鹤峰县| 柏乡县| 沧源| 光山县| 巢湖市| 泾源县| 托克托县| 车致| 上杭县| 长寿区| 稷山县| 布尔津县|