濰坊市售雞蛋中滅蠅胺殘留水平分析

谷翠梅 王丹

摘 要：目的：對(duì)濰坊市售雞蛋中滅蠅胺的殘留水平進(jìn)行分析。方法：選取了濰坊12個(gè)縣市區(qū)市場(chǎng)上銷售的雞蛋，對(duì)其中的滅蠅胺通過(guò)UPLC-MS/MS分析技術(shù)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。結(jié)果：空白基質(zhì)的加標(biāo)回收率皆在56.0%～86.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為4.4%～9.60%。線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)r為0.999 5，表明經(jīng)過(guò)MCX陽(yáng)離子交換固相萃取方法處理過(guò)的滅蠅胺殘留量檢測(cè)在1.0～200.0 ng/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。以3倍信噪比計(jì)算得到檢出限為0.73 ?g/kg，10倍信噪比算得定量限為2.19 ?g/kg。試驗(yàn)證明，MCX陽(yáng)離子交換固相萃取前方法可以作為本次研究雞蛋中滅蠅胺殘留量的檢測(cè)方法。連續(xù)抽檢近3年濰坊市售雞蛋樣品60份，檢出2份樣品中含有滅蠅胺，檢出率為3.33%，殘留量分別為0.22 mg/kg、0.15 mg/kg，均超出國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)限量值。結(jié)論：雞蛋中滅蠅胺有檢出，且多出自夏季樣品，跟季節(jié)性添加劑的使用有一定關(guān)系，檢測(cè)值高于國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)該引起人們的重視。畜牧養(yǎng)殖合規(guī)合法的飼料添加劑使用還需更規(guī)范，相關(guān)人員應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)管力度。

關(guān)鍵詞：雞蛋;滅蠅胺;殘留水平

Abstract： Objective： To analyze the residue level of Cyromazine in eggs sold in Weifang .Methods： Eggs sold in the markets of 12 counties and cities in Weifang were selected， and the Cyromazine was monitored by UPLC-MS/MS analysis technology. Results： The recoveries of blank matrix were in the range of 56.0%～86.0%， and the relative standard deviation （RSD） was in the range of 4.4%～9.60%. The correlation coefficients r of linear regression equation were 0.999 5 respectively， which showed that the detection of Chlorphenamine residues treated by McX cation exchange solid phase extraction had a good linear relationship in the range of 1.0～200.0 ng/mL. The detection limit calculated by 3 times signal-to-noise ratio is 0.73 ?g/kg， 10 times signal-to-noise ratio， the quantitative limit is 2.19 ?g/kg. The results show that the method before MCX cation exchange solid phase extraction can be used as a method for the determination of Chlorphenamine residues in eggs. 60 egg samples sold in Weifang City in recent three years were sampled continuously， and two samples were detected to contain Cyromazine， the detection rate was 3.33%， and the residues were 0.22 mg/kg and 0.15 mg/kg respectively， which exceeded the national standard limit. Conclusion： Cyromazine was detected in eggs， mostly from summer samples， which is related to the use of seasonal additives. The detection value is higher than the national limit standard， which should attract our attention. The use of legal feed additives in animal husbandry needs to be more standardized， and relevant personnel should strengthen supervision.

Keywords： egg; cyromazine; residual level

環(huán)丙氨嗪，又名滅蠅胺，環(huán)丙氨嗪在動(dòng)物急性毒理實(shí)驗(yàn)中有很高的劑量效應(yīng)關(guān)系，在慢性、亞慢性毒理實(shí)驗(yàn)中，環(huán)丙氨嗪能夠造成實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重下降，肝腫大，血液中血紅蛋白、血細(xì)胞數(shù)減少，使動(dòng)物胎兒骨骼發(fā)育遲緩、胎兒體重減輕、存活率下降[1]。近幾年，環(huán)丙氨嗪被廣泛地添加到動(dòng)物飼料中用于控制動(dòng)物廄舍內(nèi)蠅蛆的生長(zhǎng)發(fā)育，雖然取得了較好的效果，但鑒于環(huán)丙氨嗪的毒理性作用，我國(guó)2019年發(fā)布的《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥最大殘留限量》規(guī)定環(huán)丙氨嗪在禽產(chǎn)品中的最高殘留限量為0.05 mg/kg。

目前國(guó)內(nèi)普遍常用的檢測(cè)方法多為農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)推薦方法——高效液相色譜法[2]，本研究建立靈敏度較高的MCX陽(yáng)離子交換固相萃取-超高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)雞蛋中的環(huán)丙氨嗪[3-4]，可作為雞蛋中滅蠅胺藥物殘留量測(cè)定的技術(shù)參考，也可作為本次研究中調(diào)查濰坊市售雞蛋中滅蠅胺殘留情況的技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

超高效液相色譜三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀Aglient1290-6460，離心機(jī)（ST16R，Thermo）;氮吹儀（NEVAP，美國(guó)）;色譜柱（Aglient RRHD Eclipse plus-C18），固相萃取儀，恒溫水浴鍋。

1.2 材料與方法

甲醇（CH3OH）：色譜純，甲酸（HCOOH），乙酸銨（CH3COONH4），氨水（濃度25%～28%），標(biāo)準(zhǔn)品：滅蠅胺（Cyromazine，CAS：66215-27-8），滅蠅胺-13C3（Cyromazine-13C3）同位素內(nèi)標(biāo)，Waters MCX小柱60 mg/3 mL。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱（Aglient RRHD Eclipse plus-C18）（100 mm×3.0 mm，1.8 ?m）;流動(dòng)相A為0.05%甲酸水，流動(dòng)相B為乙腈;洗脫程序?yàn)?～1 min，50% B;1～3 min，60% B;3～6.5 min，95% B;6.5～7.6 min，25% B;7.6～8.5 min，50% B;流速0.3 mL/min;柱溫40 ℃;進(jìn)樣量10 ?L。

1.3.2 質(zhì)譜條件

多反應(yīng)監(jiān)測(cè)正離子掃描模式，參數(shù)為干燥氣溫度300 ℃，流速為5 L/min;霧化器壓力為40 psi;鞘氣溫度400 ℃;流速為11 L/min;毛細(xì)管電壓為4 000 V;噴嘴電壓為500 V。滅蠅胺的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。

1.3.3 樣品前處理

（1）樣品制備。取適量雞蛋，去殼后高速勻漿混合均勻，分裝后于-18 ℃以下保存?zhèn)溆谩?/p>

（2）樣品提取和凈化。①提取。稱取5 g（精確到0.01 g）均質(zhì)后的試樣于50 mL離心管中，加入50 ?L內(nèi)標(biāo)工作液、10 mL甲醇和0.05 mL甲酸，渦旋振蕩10 min，再超聲提取10 min。之后8 000 r/min離心5 min，上清液待凈化。②凈化。MCX柱預(yù)先用2 mL甲醇、2 mL水和1 mL甲醇活化。取離心后的上清液1.5 mL上柱，待快流干時(shí)依次用2 mL甲醇、2 mL水和1 mL甲醇淋洗，棄去所有淋洗液，之后用2.5 mL?2%氨水甲醇洗脫，收集洗脫液，于50℃氮吹近干，加1 mL的0.1%甲酸10%甲醇水溶液溶解殘?jiān)?，過(guò)0.22 ?m濾膜后，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。

1.3.4 溶液配制

（1）內(nèi)標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制。分別準(zhǔn)確稱取內(nèi)標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)品0.010 0 g，置于兩個(gè)10 mL容量瓶中，加5 mL水和20 ?L甲酸溶解，用甲醇定容至刻度，濃度均為1 mg/mL，-20 ℃保存，有效期12個(gè)月。

（2）標(biāo)準(zhǔn)工作液配制。取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇逐級(jí)稀釋，配制成濃度為1 ?g/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，-20 ℃保存，有效期6個(gè)月。

（3）內(nèi)標(biāo)工作液配制。取適量?jī)?nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，用甲醇逐級(jí)稀釋，配制成濃度為1 ?g/mL的內(nèi)標(biāo)工作液，-20 ℃保存，有效期6個(gè)月。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

取適量標(biāo)準(zhǔn)工作液，用0.1%甲酸、10%甲醇水溶液配制濃度為1.0～200.0 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，每mL標(biāo)準(zhǔn)溶液中加入10 ?L內(nèi)標(biāo)工作液，得到相當(dāng)于雞蛋中濃度為1.0～200.0 ?g/kg的標(biāo)準(zhǔn)工作系列溶液（按5 g樣品加入50 ?L內(nèi)標(biāo)工作液計(jì)算），進(jìn)樣測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)和內(nèi)標(biāo)定量離子對(duì)峰面積比值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制工作曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程、工作標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍，見(jiàn)圖1。相關(guān)系數(shù)R2為0.999 5，符合國(guó)標(biāo)要求。

2.2 回收率和精密度試驗(yàn)

在空白基質(zhì)中按0.5 ?g/kg、1.0 ?g/kg、5.0 ?g/kg和10.0 ?g/kg 4種濃度添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，并按照上述選定的分析條件進(jìn)行測(cè)定，平行進(jìn)樣6次。測(cè)得回收率和精密度，結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2可知，本法檢測(cè)雞蛋中滅蠅胺，添加標(biāo)準(zhǔn)品低、中、高濃度的回收率范圍為56.0%～86.0%，精密度為4.4%～9.6%，符合國(guó)標(biāo)要求。

2.3 方法的檢出限和定量限

采用向空白基質(zhì)中添加目標(biāo)化合物的方法進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)樣瓶中樣品濃度為5.00 ?g/L，取樣量為5 g，定容至10 mL。以3倍信噪比（S/N）所對(duì)應(yīng)的被測(cè)化合物的含量作為方法的檢出限，以10倍信噪比所對(duì)應(yīng)的被測(cè)化合物的含量作為方法的定量限。結(jié)果見(jiàn)表3，可知，本法滅蠅胺檢出限為0.73 ?g/kg，定量限為2.19 ?g/kg，符合國(guó)標(biāo)要求。

2.4 樣品檢測(cè)結(jié)果

由表4、表5可知，抽檢市售雞蛋樣品60份，其中采集正規(guī)超市、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)樣品各30份。按照本文中的方法進(jìn)行檢測(cè)，共檢出2份樣品中含有滅蠅胺，均來(lái)源于農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)，不合格率為為6.67%，殘留量為0.22 mg/kg、0.15 mg/kg，超出國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)限量值[5]，正規(guī)超市樣品合格率為100%。通過(guò)對(duì)檢出樣品的季節(jié)分析發(fā)現(xiàn)，夏季樣品檢出率高，可能與季節(jié)性滅蠅飼料添加有關(guān)。

3 結(jié)論與討論

本研究采用方法線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)R2為0.999 5，空白基質(zhì)的加標(biāo)回收率在56.0%～86.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在4.4%～9.60%。檢出限為0.73 ?g/kg，定量限為2.19 ?g/kg。試驗(yàn)證明，MCX陽(yáng)離子交換固相萃取前方法各項(xiàng)指標(biāo)符合國(guó)標(biāo)要求，可以作為本次研究雞蛋中滅蠅胺殘留量的檢測(cè)方法。試驗(yàn)樣本來(lái)自于濰坊12個(gè)縣市區(qū)的各大商超和集貿(mào)市場(chǎng)，涵蓋多個(gè)季節(jié)的樣品采集，共采集60批次雞蛋樣品。其中農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)采集樣品30份，檢出2份樣品中含有滅蠅胺，均超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)限量，且檢出樣品集中在夏季，相關(guān)人員考慮有季節(jié)性添加的因素。綜合檢出率雖然不高，但仍然應(yīng)該引起重視，也提醒人們應(yīng)加強(qiáng)養(yǎng)殖單位及個(gè)人對(duì)于國(guó)家相關(guān)法律法規(guī)的學(xué)習(xí)和貫徹;合理使用獸藥，嚴(yán)格按照國(guó)家規(guī)定進(jìn)行添加;加強(qiáng)禁用獸藥的管理，提高食品安全意識(shí)，從源頭進(jìn)行控制;加強(qiáng)集貿(mào)市場(chǎng)的食品流通管理，為消費(fèi)者提供一個(gè)安全的食品環(huán)境。

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