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      竹葉黃酮對蕭山雞公雞精液品質(zhì)和血液生理生化指標(biāo)的影響

      2022-03-16 08:48:30阮振婷王留超吳志偉俞奇力盧立志劉長國
      中國畜牧雜志 2022年3期
      關(guān)鍵詞:蕭山竹葉公雞

      阮振婷,王留超,吳志偉,俞奇力,陳 菲,盧立志,劉長國*

      (1.浙江農(nóng)林大學(xué)動物科技學(xué)院?動物醫(yī)學(xué)院,浙江杭州 311300;2.杭州蕭山種雞(蕭山雞)有限公司,浙江杭州 311200;3.浙江省農(nóng)科院畜牧獸醫(yī)研究所,浙江杭州 311000)

      種公雞精液品質(zhì)的優(yōu)劣是判斷其繁殖性能的重要依據(jù),也是決定種雞生產(chǎn)效益的關(guān)鍵因素,因此種雞場必須保證和改善公雞精液的品質(zhì)。竹葉黃酮是從竹葉中提取的天然物質(zhì),具有多種生物學(xué)活性功能,不但能夠抗氧化、抗炎、抑菌、調(diào)節(jié)血栓血脂,還能夠保護(hù)心腦血管以及肝臟健康。另外,研究表明,竹葉黃酮能夠提高家禽的生產(chǎn)性能和免疫功能。因此,本試驗(yàn)旨在研究飼糧中添加不同濃度的竹葉黃酮對公雞精液品質(zhì)以及血液生理生化指標(biāo)的影響,以期為竹葉黃酮應(yīng)用于種公雞生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

      1 材料與方法

      1.1 試驗(yàn)材料 竹葉黃酮純度40%(浙江圣氏生物科技有限公司),桿菌肽鋅預(yù)混劑純度10%(天津新星制藥廠)。

      1.2 試驗(yàn)動物及設(shè)計(jì) 選取健康狀況良好、平均體重為(2.35±0.29)kg 的34 周齡蕭山雞公雞180 只,采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì),將公雞隨機(jī)分為6 組,每組6 個重復(fù),每個重復(fù)5 只雞。其中,空白對照組飼喂基礎(chǔ)日糧,在基礎(chǔ)日糧中添加0.40‰(400 mg/kg)桿菌肽鋅作為陽性對照,試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.75‰、1.50‰、2.25‰、3.00‰竹葉黃酮。

      1.3 飼養(yǎng)管理及基礎(chǔ)日糧 試驗(yàn)公雞單籠飼養(yǎng),每日清晨06:30 喂料120 g,自由飲水。采用16 h 光照+8 h 黑暗的光照模式。預(yù)試期15 d,正試期90 d。基礎(chǔ)日糧參照NRC(1994)標(biāo)準(zhǔn)中家禽種雞營養(yǎng)需求水平設(shè)計(jì)(表1)。

      表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)成分(干物質(zhì)基礎(chǔ))

      1.4 精液采集 分別于試驗(yàn)期第30、60、90 天,用腹背聯(lián)合按摩法采集公雞精液,每個重復(fù)采3 只公雞的精液。精液放入37℃保溫盒,10 min 內(nèi)帶回實(shí)驗(yàn)室,置37℃水浴鍋中,進(jìn)行品質(zhì)評定。

      1.5 精液品質(zhì)評定及方法

      1.5.1 精液量和pH 采集時用帶刻度的集精杯收集精液,讀取精液量;回實(shí)驗(yàn)室后,用精密pH 計(jì)測定精液的pH。

      1.5.2 精子活率 吸取精液10 μL,用37℃生理鹽水稀釋5 倍,用光學(xué)顯微鏡觀察活率。

      1.5.3 精子密度 精子密度檢查用血細(xì)胞計(jì)數(shù)法。取10 μL原精液,用3% NaCl 稀釋300 倍,靜置10 min,置400× 顯微鏡下觀測5 個中方格的精子總數(shù),計(jì)算精子密度。

      1.5.4 精子畸形率 取10 μL 精液原液用稀釋液稀釋5 倍,制作抹片,于空氣中自然晾干,再置于無水乙醇中固定5 min,取出用水洗凈、烘干,用黑墨水染色5 min,再用水洗凈,待干燥后鏡檢。計(jì)數(shù)若干個視野中的正常精子和畸形精子,合計(jì)約500 個精子?;尉臃N類包括頭部畸形(頭大、頭小、無頭),中段畸形(頸部V形彎曲、線粒體鞘V 形彎曲)和尾部畸形(尾部V 形彎曲、尾部螺旋卷曲)等。最后,計(jì)算各種畸形精子的百分率。

      1.6 血液生理生化指標(biāo)測定 在試驗(yàn)期末,從每個重復(fù)中隨機(jī)選取1 只雞,翅下靜脈采血2.5 mL。其中500 μL血液裝入血液抗凝管(抗凝劑EDTA-Na2),4℃保存運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室,用全自動動物血液細(xì)胞分析儀(BC-2800Vеt)測定全血中白細(xì)胞(Whitе Blood Cеll,WBC)、淋巴細(xì)胞(Lymphocytе,Lymph)、單核細(xì)胞(Monocytе,Mon)、嗜中性粒細(xì)胞(Granulocytе,Gran)、淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(Pеrcеntagе of Lymphocytе,Lymph%)、單核細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(Pеrcеntagе of Monocytе,Mon%)、嗜中性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(Pеrcеntagе of Granulocytе,Gran%)、嗜酸性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(Pеrcеntagе of Eosino phils,Eos%)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(Rеd-Cеll Count,RBC)、血紅蛋白濃度(Hеmoglobin Concеntration,HGB)、紅細(xì)胞比積(Hеmatocrit,HCT)、平均紅細(xì)胞體積(Mеan Corpuscular Volumе,MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(Mеan Corpuscular Hеmoglobin,MCH)、平均血紅蛋白濃度(Mеan Corpuscular Hеmoglobin Concеntration,MCHC)、紅細(xì)胞分布寬度(Rеd Cеll Distribution Width,RDW)、血小板計(jì)數(shù)(Platеlеt Count,PLT)、血小板比積(Thrombocytocrit,PCT)、血小板平均體積(Mеan Platеlеt Volumе,MPV)、血小板分布寬度(Distribution Width Platеlеt,PDW)等。

      另外,2 mL 血液裝入EP 管中,室溫靜置7~8 h,待血液凝固,取血清,用血液生化分析儀(BECKMAN COULTER AU480)測定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Glutamic-Pyruvic Transaminasе,ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Glutamic-Ox Alacеtic Transaminasе,AST)、堿性磷酸酶(Alkalinе Phosphatasе,ALP)、血清乳酸脫氫酶(Lactatе Dеhyd Rogеnasе,LDH)活性以及血清總蛋白(Total Protеin,TP)、白蛋白(Albumin,ALB)、球蛋白(Globulin,GLB)、白球蛋白比(Albumin-Globulin Ratio,A/G)、血糖(Blood Glucosе,GLU)、尿素(Urеa,UREA)、肌酐(Crеatininе,CREA)、甘油三酯(Triglycеridе,TG)、總膽固醇(Total Cholеstеrol,TC)等。超氧化物歧化酶(Supеroxidе Dismutasе,SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathionе Pеroxidasе,GSH-Px)、過氧化氫酶(Catalasе,CAT)含量使用試劑盒測定(南京建成生物工程研究所)。

      1.7 統(tǒng)計(jì)分析 利用Excеl 對數(shù)據(jù)進(jìn)行初步整理,再用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。用單因素方差分析(Onе-Way ANOVA)統(tǒng)計(jì)公雞之間精液品質(zhì)、精子畸形種類以及血液生理生化的差異。結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。

      2 結(jié) 果

      2.1 竹葉黃酮對公雞精液品質(zhì)的影響 由表2 可知,試驗(yàn)第30 天,與陽性對照組相比,4 個竹葉黃酮組公雞采精量均提高(<0.05);第60 天和第90 天,與2 個對照組相比,4 個竹葉黃酮組均有升高趨勢(>0.05)。試驗(yàn)第30 天,各組間公雞精液密度無顯著差異;第60天和第90 天,與空白對照組相比,1.50‰、2.25‰、3.00‰竹葉黃酮組公雞精子密度均提高(<0.05)。試驗(yàn)第30、60 天,與空白對照組相比,0.75‰竹葉黃酮組和陽性對照組精液pH 均有所下降(>0.05)。試驗(yàn)第90 天時,與空白對照組相比,4 個竹葉黃酮組有降低精子畸形率的趨勢(>0.05)。最后,各試驗(yàn)組間精子活率無顯著差異。總體上,隨著飼喂時間的延長,竹葉黃酮逐漸表現(xiàn)出提高公雞射精量、精子密度和精液pH 及降低精子畸形率的作用。

      表2 竹葉黃酮對蕭山雞公雞精液品質(zhì)的影響

      2.2 竹葉黃酮對精子畸形類型的影響 由表3 可知,試驗(yàn)第30、60、90 天,與空白對照組相比,4 個竹葉黃酮試驗(yàn)組精子的3 種畸形類型無顯著差異,說明竹葉黃酮對公雞產(chǎn)生畸形精子無明顯的影響。

      表3 竹葉黃酮對蕭山雞公雞精子畸形種類的影響 %

      2.3 竹葉黃酮對血液指標(biāo)的影響

      2.3.1 竹葉黃酮對蕭山雞公雞血液生理指標(biāo)的影響 由表4 可知,與空白對照組相比,4 個竹葉黃酮組Lymph 和Lymph% 有升高趨勢,Gran% 有降低趨勢(0.05<<0.1),0.75‰、1.50‰竹葉黃酮組和陽性對照組Gran 含量均下降(<0.05),1.50‰、2.25‰和陽性對照組Eos%均下降(<0.05)。與空白對照組相比,各試驗(yàn)組RDW 含量有下降趨勢(0.05<<0.1)。與2 個對照組相比,2.25‰竹葉黃酮組PLT 和PCT 含量提高(<0.05),且高于0.75‰、3.00‰竹葉黃酮組(<0.05),0.75‰竹葉黃酮組PLT、PCT%與陽性對照組相當(dāng)。各組間MPV 和PDW 差異均不顯著。

      表4 竹葉黃酮對蕭山雞公雞血液生理指標(biāo)的影響

      2.3.2 竹葉黃酮對蕭山雞公雞血清生化指標(biāo)的影響 如表5 顯示, 4 個竹葉黃酮試驗(yàn)組和陽性對照組的ALT均低于空白對照組,而ALP 和TC 均高于空白對照組(>0.05)。0.75‰竹葉黃酮組LDH 與陽性對照組相近;而0.75‰和2.25‰竹葉黃酮組TG 含量低于2 個對照組(>0.05)。另外,各組間蛋白質(zhì)相關(guān)指標(biāo)TP、ALB、GLB 和A/G 均無顯著差異。

      表5 竹葉黃酮對蕭山雞公雞血清生化指標(biāo)的影響

      3 討 論

      3.1 竹葉黃酮對蕭山雞公雞精液品質(zhì)的影響 在家禽生產(chǎn)中,天然抗氧化劑在維持高的生長水平、繁殖和免疫能力方面具有特殊的重要性,抗氧化劑攝入不足可能會導(dǎo)致氧化應(yīng)激。研究表明,在肉仔雞飼糧中添加植物脂肪和抗氧化劑等植物提取物,可提高其生產(chǎn)性能。本試驗(yàn)中,測定的精液品質(zhì)結(jié)果均符合正常的精液品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn),并且隨著飼喂時間的延長,竹葉黃酮有改善公雞精液品質(zhì)的作用。郭振慧等研究也發(fā)現(xiàn),大豆黃酮能緩解熱應(yīng)激對公兔睪丸組織的損傷,提高采精量和精子密度,降低精子畸形率??赡苁且?yàn)辄S酮類化合物富含各種與繁殖性能有關(guān)的營養(yǎng)物質(zhì),并且參與了公雞的下丘腦-垂體-性腺軸的調(diào)節(jié)活動,促進(jìn)公雞性腺發(fā)育,一定程度上緩解了熱應(yīng)激對公雞睪丸組織的損傷,維持正常生殖機(jī)能運(yùn)行,從而提高了種公雞的精液品質(zhì)。

      3.2 竹葉黃酮對蕭山雞公雞血液生理生化指標(biāo)的影響

      3.2.1 竹葉黃酮對蕭山雞公雞血液生理指標(biāo)的影響 血液生理指標(biāo)包括WBC、RBC 和PLT 三大類。WBC 是具有防護(hù)作用的細(xì)胞,能夠吞噬異物、產(chǎn)生抗體、防御疾病,Lymph 是機(jī)體免疫力的重要評價(jià)指標(biāo)。研究表明,當(dāng)Gran/Lymph 比值變大時,Gran 分泌的大量炎癥介質(zhì)會介導(dǎo)廣泛的炎癥反應(yīng)。本試驗(yàn)中,與空白對照組相比,竹葉黃酮試驗(yàn)組公雞血液中Gran/Lymph 比值有下降趨勢,意味著黃酮類化合物可能參與了機(jī)體的細(xì)胞免疫,從而提高了蕭山雞公雞的免疫機(jī)能,說明竹葉黃酮具有一定的抗炎作用。RBC、HGB、RDW、MCV和MCHC 等指標(biāo)反映了血液運(yùn)載氧氣的能力。紅細(xì)胞對氧、二氧化碳、葡萄糖及氨基酸的運(yùn)輸是通過紅細(xì)胞中的血紅蛋白來實(shí)現(xiàn)的。RDW 是表示機(jī)體紅細(xì)胞體積一致性的重要參數(shù);HCT 是影響血液黏度的最主要因素,且與血液黏度正相關(guān)。另外,血液中MCV、MCH、MCHC、RDW 等也可用于檢測機(jī)體缺鐵性貧血的發(fā)生。本試驗(yàn)中,與空白對照組相比,竹葉黃酮總體上有降低單位體積血液中RBC、HGB、HCT、RDW 并升高M(jìn)CH、MCHC 含量的趨勢,表明竹葉黃酮具有改善紅細(xì)胞運(yùn)氧能力、提高紅細(xì)胞整齊度、降低紅細(xì)胞聚集、促進(jìn)機(jī)體血紅蛋白合成的潛質(zhì)。其中,0.75‰竹葉黃酮組在WBC 和RBC 中的各個指標(biāo)與陽性對照組相近,表明0.75‰竹葉黃酮添加劑量具有代替抗生素的潛質(zhì)。

      PLT 對機(jī)體具有凝血功能,可保護(hù)毛細(xì)血管的完整性。PDW 是血小板分布寬度一致性的衡量指標(biāo),較高的PDW 值代表血小板有較強(qiáng)的凝血功能。本研究中,竹葉黃酮處理組血小板參數(shù)均高于空白對照組,其中0.75‰、1.50‰和2.25‰竹葉黃酮組PDW 顯著上升,說明總體上竹葉黃酮提高了機(jī)體凝血、止血等功能,同時有抑制血小板聚集的趨勢,對血栓的形成具有良好的調(diào)節(jié)作用。

      3.2.2 竹葉黃酮對蕭山雞公雞血清生化的影響 血液中生化指標(biāo)能客觀反映機(jī)體臟器的健康狀態(tài)、營養(yǎng)物質(zhì)代謝正常與否以及動物的免疫水平等。血清中ALT和AST 活性變化可用于評估雞肝功能情況,ALT 和AST 含量升高顯示機(jī)體肝功能可能受損;另外,血清中LDH 也是檢測動物機(jī)體肝臟和實(shí)質(zhì)性內(nèi)臟器官損傷的指標(biāo)。本研究中,較空白對照組而言,竹葉黃酮有降低蕭山雞公雞血清中ALT 和LDH 含量的趨勢,說明竹葉黃酮加強(qiáng)了機(jī)體肝細(xì)胞進(jìn)行物質(zhì)代謝的功能,對肝臟具有一定保護(hù)作用。

      UREA 和CREA 是機(jī)體蛋白質(zhì)代謝的終產(chǎn)物,是反映腎臟功能的主要指標(biāo)。TG 和TC 含量的高低反映了動物機(jī)體脂類的吸收和代謝狀況。本研究結(jié)果顯示,在蕭山雞公雞日糧中添加不同濃度竹葉黃酮并不影響其腎功能。

      4 結(jié) 論

      本研究結(jié)果表明,在蕭山雞公雞日糧中添加竹葉黃酮有改善公雞精液品質(zhì)、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、提高紅細(xì)胞運(yùn)氧能力以及改善血小板參數(shù)的潛質(zhì)。因此,竹葉黃酮可以作為良好的替抗物質(zhì),且以0.75‰竹葉黃酮添加劑量效果相對更理想。

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