三種血小板檢測方法計數(shù)結(jié)果準確性評價

張家明，洪 流，卓少賢，韓日成，黃秀紅

1.廣東醫(yī)科大學(xué)附屬湛江中心醫(yī)院檢驗科，廣東 湛江 524045；2.廣東醫(yī)科大學(xué)附屬湛江中心醫(yī)院中醫(yī)科，廣東 湛江 524045；3.廣東醫(yī)科大學(xué)附屬湛江中心醫(yī)院輸血科，廣東 湛江 524045

血小板計數(shù)是臨床血常規(guī)檢測中重要的指標之一，其對疾病的診斷、療效監(jiān)測及預(yù)后觀察均有重要意義。如今多參數(shù)的全自動血細胞分析儀發(fā)展快，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床檢驗工作，儀器法檢測血小板較手工法簡便、快速、重復(fù)性好及精密度高，但由于血細胞分析儀檢測血小板的原理不同，其抗干擾能力也不同，計數(shù)所得結(jié)果也有一定差別。為了保證檢驗結(jié)果的準確性，我們以經(jīng)典的手工顯微鏡法為評價標準，觀察檢驗科XN-1000全自動血細胞分析儀的電阻抗法（PLT-I法）、激光染色法（PLT-O法及PLT-F法）檢測90例血小板結(jié)果異常標本的準確性，以期為實驗室檢測結(jié)果出現(xiàn)異常時提供最佳的解決方案，現(xiàn)將研究結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 主要儀器與試劑

應(yīng)用日本SYSMEX公司生產(chǎn)的XN-1000全自動血細胞分析儀及其原裝配套試劑、質(zhì)控品，顯微鏡為OLYMPUS CX21型，手工顯微鏡法使用的草酸銨稀釋液按《全國臨床檢驗操作規(guī)程（第4版）》［1］配制。

1.2 標本來源與分組

收集廣東醫(yī)科大學(xué)附屬湛江中心醫(yī)院2020年3月—2020年7月在門診及住院患者中使用XN-1000型全自動血細胞分析儀檢測顯示血小板計數(shù)結(jié)果不可靠的血常規(guī)標本90例。將90例標本分三組，其中大血小板組30例，儀器報警顯示“PLT Abn Dst”直方圖曲線右側(cè)右移，分布低且寬，可有尾部上翹現(xiàn)象，顯微鏡下見大血小板。小紅細胞組30例，電阻抗法檢測儀器報警顯示“Fragments”，MCV＜70 fl，血小板直方圖在血小板與紅細胞交界處有抬高表現(xiàn)，顯微鏡下可見小紅細胞或紅細胞碎片。低值血小板組30例，PLT＜30×109/L，可見低平的血小板直方圖曲線，儀器報警顯示“PLT Abn Dst/Thrombo”。

1.3 方法

每天檢測標本前先做質(zhì)控，質(zhì)控結(jié)果在控后進行標本檢測，每份標本均用XN-1000全自動血細胞分析儀的PLT-I法、PLT-O法及PLT-F法檢測2次，取平均值作為測定值。人工計數(shù)法取顯微鏡手工計數(shù)2次結(jié)果的均值為測定值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PLT-I法、PLT-O法及PLT-F法與顯微鏡法檢測三組標本的結(jié)果比較

在大血小板組，PLT-I法檢測結(jié)果明顯低于顯微鏡法，而PLT-O法、PLT-F法檢測結(jié)果與顯微鏡法比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。小紅細胞組，PLT-I法檢測結(jié)果明顯高于顯微鏡法，PLT-O法、PLT-F法檢測結(jié)果與顯微鏡法比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。低值血小板組，PLT-I法、PLT-O法、PLT-F法計數(shù)結(jié)果與顯微鏡法比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 PLT-I法、PLT-O法、PLT-F法與顯微鏡法檢測三組標本結(jié)果（±s）

表1 PLT-I法、PLT-O法、PLT-F法與顯微鏡法檢測三組標本結(jié)果（±s）

a表示與顯微鏡法比較，P＜0.05。

組別大PLT組（n=30）小RBC組（n=30）低值PLT組（n=30）PLT-1法100.09±42.07a 228.43±93.52a 10.75±7.07 PLT-0法121.71±40.86 173.88±73.45 11.90±6.12 PLT-F法123.58±33.79 176.23±56.46 12.04±4.29顯微鏡法124.25±45.16 177.14±76.28 11.99±6.93

2.2 PLT-I法、PLT-O法、PLT-F法與顯微鏡法檢測結(jié)果相關(guān)性分析

PLT-F法與顯微鏡法三組標本檢測結(jié)果相關(guān)性最高，相關(guān)系數(shù)r＞0.990。PLT-O法與顯微鏡法三組標本檢測結(jié)果相關(guān)性較高，相關(guān)系數(shù)r＞0.973。PLT-I法與顯微鏡法三組標本檢測結(jié)果相關(guān)性均較低，相關(guān)系數(shù)r只有0.628～0.850之間，見表2。

表2 PLT-I法、PLT-O法及PLT-F法與顯微鏡法檢測結(jié)果相關(guān)性分析

3 討論

目前，臨床上使用的全自動血細胞分析儀基本上都能達到檢測快速、簡便、重復(fù)性好及精密度高的特點，儀器檢測血小板的原理多為經(jīng)典的電阻抗法，但當(dāng)血標本有大血小板、小紅細胞、紅細胞碎片等干擾因素存在時，可影響儀器計數(shù)血小板結(jié)果不準確，容易導(dǎo)致臨床誤診、漏診。在臨床檢驗工作量不斷增多的同時，如何快速識別并高效降低儀器計數(shù)血小板結(jié)果假性降低或假性增高的發(fā)生率，為臨床提供科學(xué)客觀的實驗室數(shù)據(jù)顯得尤其重要。

PLT-I法計數(shù)血小板是利用電阻抗原理檢測，運用的是RBC/PLT通道，每次可檢測計數(shù)20萬～25萬個細胞，具有重復(fù)性好，速度快、成本低等優(yōu)點。PLT-I法分別在25～250 fL和2～35 fL范圍內(nèi)分析紅細胞和血小板，但當(dāng)標本異常時，其準確性有一定的局限［2］，如小紅細胞或紅細胞碎片將被誤識別為血小板，使血小板結(jié)果假性增多。而大體積的血小板會被誤識別為紅細胞，導(dǎo)致血小板計數(shù)結(jié)果假性降低。本研究結(jié)果顯示，PLT-I法在小紅細胞組和大血小板組的檢測結(jié)果與顯微鏡法比較，無可比性，在大PLT組、小RBC組及低值PLT組，PLT-I法與顯微鏡法的血小板檢測結(jié)果相關(guān)性均較差。可見，PLT-I法應(yīng)用于檢測此幾類標本的血小板計數(shù)結(jié)果不準確。

PLT-O法采用PLT-O/RET通道，通過半導(dǎo)體激光技術(shù)，采用熒光染料（聚次甲基染料）對血小板進行染色，在前向散射光—熒光強度的二維散點圖上進行檢測計數(shù)，本方法經(jīng)過染色后能有效排除了電阻抗法無法排除的部分顆粒的影響，具有對小紅細胞、紅細胞碎片、大血小板和乳糜微粒等抗干擾能力強的特點［3-4］，同時也使PLT-O對低值血小板計數(shù)的檢測結(jié)果準確性更可靠［5-6］。本研究結(jié)果顯示，在大PLT組、小RBC組及低值PLT組共90例標本的PLT-O法血小板檢測結(jié)果與顯微鏡法比較無可比性，且這兩種方法的檢測結(jié)果相關(guān)性良好，相關(guān)系數(shù)r＞0.973。

PLT-F法是Sysmex XN系列血細胞分析儀的低值血小板獨立檢測通道，運用流式檢測原理，使用特殊新型的熒光染料（以嗯嗪為主）特異地與血小板中線粒體的DNA及小胞體的RNA進行結(jié)合，染色后形成不同的前向散射光和側(cè)向熒光強度，通過檢測散射光與熒光，具有較高的特異性，而且對低值血小板標本進行5倍顆粒分析技術(shù)［4］，能計數(shù)出準確的血小板數(shù)值。PLT-F法可以排除大血小板、小紅細胞、微小血小板、細胞碎片及溶血標本對血小板計數(shù)的影響，計數(shù)得到準確的血小板結(jié)果，尤其是在低值血小板計數(shù)方面有重要臨床意義［7］。也有研究［8］報道PLT-F法能準確可靠地計數(shù)峰高變低，底部增寬的可疑大血小板樣本，從而比PLT-I法更能有效識別血小板。本研究結(jié)果顯示，PLT-F法在三組90例標本的血小板計數(shù)結(jié)果與顯微鏡法最為接近，且PLT-F法與顯微鏡法的相關(guān)性很高，相關(guān)系數(shù)r＞0.990，比PLT-I法及PL-O法稍高，表明PLT-F法的綜合性能略優(yōu)于PLT-I法及PL-O法。

綜上所述，在臨床檢驗工作中醫(yī)生可以采取較快速、簡便有效的PLT-I法對血小板進行大批量檢測，當(dāng)儀器出現(xiàn)異常報警，提示標本可能為小紅細胞、細胞碎片、大血小板等情況干擾時，可采用PLT-O法或PLT-F法進行復(fù)檢，如遇標本溶血或低值血小板時，用PLT-F法復(fù)檢結(jié)果最為準確，必要時進行人工鏡檢。