王明山 韓春葉

摘要：以粉麗人長壽花莖段為材料，MS 為基本培養(yǎng)基，研究激素不同濃度配比對粉麗人長壽花快速繁殖生長的影響，以期尋找粉麗人長壽花莖段再生體系的最佳激素配比。結(jié)果表明，適宜粉麗人長壽花花芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，適宜粉麗人長壽花生根的培養(yǎng)基為1/4MS+NAA0.5mg/L。

關(guān)鍵詞：粉麗人長壽花;組織培養(yǎng);培養(yǎng)基

一、材料與方法

（一） 試驗材料

粉麗人長壽花購于鄭州市雙橋花卉市場，取帶腋芽的粉麗人長壽花的莖段2cm左右。

（二） 試驗方法

1、粉麗人長壽花腋芽誘導(dǎo)方法。在接種前，將粉麗人長壽花用洗衣粉洗凈并放在自來水下沖洗1h，然后將整株的外植體剪成帶腋芽的莖段，將外植體帶入無菌操作室，在超凈工作臺上用70%酒精溶液浸泡30s，無菌水沖洗4次，接著用0.1%升汞溶液浸泡8min，用無菌水沖洗6次，將粉麗人長壽花莖段上的水珠用無菌紙吸干，然后進(jìn)行接種。以MS+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L為基本培養(yǎng)基（下同），加入1.0mg/L 6-BA、0.2mg/L NAA，每個處理接種15瓶，每瓶分別接種2個、3個、4個莖段，培養(yǎng)條件（下同） 為溫度25±2℃， 相對濕度為70% ～80% ， pH 值5.8， 光照強(qiáng)度1000～1500 lux。培養(yǎng)一個月后，記錄每瓶誘導(dǎo)出芽的數(shù)目和污染的數(shù)目，計算其誘導(dǎo)率。

2、腋芽莖段初生培養(yǎng)方法。采用不同的6-BA和NAA激素配比，以MS為基本培養(yǎng)基，對帶腋芽的粉麗人長壽花的莖段進(jìn)行初代培養(yǎng)。6-BA 濃度（mg/L） 為1.0、1.5、2.0， NAA 濃度（mg/L） 為0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0，共21個處理，每個處理15瓶，每瓶接種2個帶腋芽的莖段。2周后觀察、統(tǒng)計莖段的腋芽誘導(dǎo)率與污染率。然后將獲得的無菌外植體接入到新鮮的培養(yǎng)基，進(jìn)行繼代培養(yǎng)。

3、外植體生根培養(yǎng)方法。分別以MS、1/2MS、1/4MS為基本培養(yǎng)基，加0.5mg/L NAA進(jìn)行生根培養(yǎng)，每個處理接種15瓶，每瓶分別接種2個，60d后統(tǒng)計生根率。再以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，分別加入0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.3 mg/L、0.4mg/L、0.5 mg/L 的NAA，以不加NAA為對照，每個處理接種15瓶，每瓶分別接種2個。60d后，統(tǒng)計生根率。誘導(dǎo)率、污染率、生根率的計算公式如下：

二、結(jié)果與分析

（一） 培養(yǎng)基接種數(shù)與誘導(dǎo)出芽的外植體數(shù)的關(guān)系

從表1可以看出，培養(yǎng)基里每瓶放置4個外植體時，腋芽的誘導(dǎo)率為75%;當(dāng)培養(yǎng)基里每瓶放置3個外植體時，腋芽的誘導(dǎo)率為33.33%;當(dāng)培養(yǎng)基里每瓶放置2 個外植體時，腋芽的誘導(dǎo)率為100%。

上述分析結(jié)果表明，一個培養(yǎng)基里放置2個外植體，其腋芽誘導(dǎo)率最高，即每瓶接種2 個外植體誘導(dǎo)出芽效果最好。

（二） 激素對外植體誘導(dǎo)的影響

1、6-BA濃度對外植體誘導(dǎo)率的影響。植物生長調(diào)節(jié)劑用生長素（NAA） 和細(xì)胞分裂素（6-BA），其中，6-BA是根尖合成向上運輸，主要作用是促進(jìn)細(xì)胞分裂和器官分化，促進(jìn)側(cè)芽分化和生長;NAA具有調(diào)節(jié)植物生長和生根的作用。

進(jìn)行初代培養(yǎng)14d后，對630個莖段的培養(yǎng)情況進(jìn)行統(tǒng)計，結(jié)果見表2。對21個不同激素配比進(jìn)行比較可知，在激素6-BA濃度為1.0～2.0mg/L、NAA的濃度為0～1.0mg/L時，都能長出定芽，在6-BA濃度為1.0mg/L、NAA濃度為0.2mg/L時，能較早分化出定芽，且定芽的增殖速度很快;當(dāng)6-BA為1.0mg/L時，外植體的誘導(dǎo)率最高，其平均值為54.29%。所以，6-BA的最佳濃度是1.0mg/L。

增加1.5mg/L6-BA和2.0mg/L6-BA兩個濃度與7組不同NAA濃度構(gòu)成14個不同的濃度配比，探究增加6-BA的濃度能否增加誘導(dǎo)率。由表2可知，在增加的14個不同的濃度配比中誘異率有3 個峰點，分別是6-BA1.5mg/L+NAA0mg/L配比中的誘導(dǎo)率為66.67%，6-BA2.0mg/L+NAA0mg/L配比中的誘導(dǎo)率為76.67%，6-BA2.0mg/L+NAA0.4mg/L配比中的誘導(dǎo)率為50.00%。6-BA1.5mg/L+NAA0mg/L 有3 個最低點， 分別是6 - BA1.0mg/L +NAA1.0mg/L 誘導(dǎo)率為26.67% 、6 - BA1.5mg/L +NAA0.3mg/L 誘導(dǎo)率為33.33% 、6 - BA2.0mg/L +NAA1.0mg/L誘導(dǎo)率為26.67%。

由表2可知，增加6-BA的濃度并不一定能增加誘導(dǎo)率，只有NAA的濃度在0和0.3mg/L、0.4mg/L時，增加6-BA的濃度，可以增加外植體的誘導(dǎo)率，誘導(dǎo)率增加情況分別為： 由66.67% 增加為76.67% 、由33.33% 增加為36.67%、由43.33%增加為50.00%;NAA 在其他濃度下，增加6-BA的濃度，反而降低誘導(dǎo)率。

2、NAA 濃度對外植體誘導(dǎo)率的影響。設(shè)置NAA 濃度（mg/L） 從0開始，以0.1的等差到0.5共6個不同濃度的激素梯度，探究培養(yǎng)基MS+6-BA1.0mg/L+NAA的最佳濃度配比，并了解當(dāng)NAA與6-BA濃度相等時，培養(yǎng)基的濃度與前6組相比是否為最佳濃度配比。由表2可知，當(dāng)濃度配比為6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L時，外植體的誘導(dǎo)率最高，而且污染率也相對較低。當(dāng)NAA與6-BA濃度相等時，即二者均為1.0 mg/L時，外植體的誘導(dǎo)率為26.67%，其誘導(dǎo)率最低。

上述分析表明，NAA與6-BA濃度相等，并不是培養(yǎng)基中NAA與6-BA的最佳濃度配比。

（三） 激素配比對生根培養(yǎng)的影響

1、MS培養(yǎng)基的濃度對粉麗人長壽花生根率的影響。由表3可知，在適當(dāng)?shù)臐舛确秶鷥?nèi)，MS培養(yǎng)基的濃度越低，粉麗人長壽花的生根率越高。本研究以1/4MS培養(yǎng)基的生根率最高，為80%，表明1/4MS培養(yǎng)基既滿足了粉麗人長壽花生長的營養(yǎng)需求，又能很好地誘導(dǎo)生根。

2、NAA濃度對生根培養(yǎng)的影響。由表4可知，當(dāng)MS培養(yǎng)基的濃度一定時，NAA濃度增加為0.1mg/L，粉麗人長壽花的生根率增加，當(dāng)濃度增加到0.4mg/L NAA時，粉麗人長壽花的誘導(dǎo)生根率最大，為76.67%;再增加NAA濃度到0.5 mg/L時，生根率反而降低，降低為50.0%。

三、結(jié)論與討論

粉麗人長壽花莖段誘導(dǎo)率與培養(yǎng)基接種數(shù)關(guān)系密切。本實驗結(jié)果表明，每瓶培養(yǎng)基接種2個外植體時，莖段的誘導(dǎo)率最高，達(dá)100%，而且植株的生長情況良好。每瓶接種外植體越少，外植體可利用營養(yǎng)物質(zhì)越充分，有利于莖段誘導(dǎo)出新的定芽。外植體越少，污染率相對越低，有利于植株生長。

不同濃度植物生長調(diào)節(jié)劑對粉麗人長壽花帶腋芽的莖段初代培養(yǎng)有較大影響。汪宏剛[2]、李玉梅[3]、崔廣榮[4]等研究表明， 粉麗人長壽花芽誘導(dǎo)最適培養(yǎng)基為MS+ 6- BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L，芽增殖的最適培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.5 mg/L;孫男[5]、高建莉[6]等研究表明，6-BA的最佳濃度是1.0mg/L，張瑞姿[7]、陳梅[8]等研究表明，NAA最佳濃度是0.5mg/L，孫利娜[9]研究表明，NAA最佳濃度是0.2mg/L，關(guān)艷清等[10]、李鳳蘭[11]、程軍[12]研究結(jié)果顯示，NAA最佳濃度是1.0mg/L。本實驗表明，對粉麗人長壽花的芽增殖初代培養(yǎng)中，6-BA濃度為1.0mg/L，NAA濃度為0.1mg/L能夠較早分化出芽，且芽的增殖速度很快，外植體的誘導(dǎo)率最高。

粉麗人長壽花的生根誘導(dǎo)時，有不少學(xué)者使用低濃度的MS培養(yǎng)基，用1/2MS培養(yǎng)基比用MS培養(yǎng)基粉麗人長壽花的誘導(dǎo)生根率高，不少學(xué)者也研究了NAA濃度對粉麗人長壽花生根率的影響，但結(jié)果不盡相同，也有人提出最適生根培養(yǎng)基為1/2 MS+NAA 0.2～0.5 mg/L[13-15]。本實驗研究表明，在適宜的MS范圍內(nèi)，基本培養(yǎng)基的濃度越低，粉麗人長壽花的生根率越高，1/4MS培養(yǎng)基的誘導(dǎo)生根率最高，且在基本培養(yǎng)基相同的條件下，加入0.5mg/LNAA，粉麗人長壽花的誘導(dǎo)生根率最大。

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基金項目：2018年度河南省科技攻關(guān)資助項目“土壤結(jié)構(gòu)對解決草莓連作障礙根際微生態(tài)效應(yīng)的影響研究”，項目編號：162102110092。

作者簡介：王明山（1978-），男，河南尉氏人，講師，研究方向：農(nóng)業(yè)信息技術(shù)。

（責(zé)任編輯 曹雯梅）